초록 ▼

현재 대부분의 체외 진단키트 제조사들은 진단키트의 검정이나 품질관리를 위해 국제표준품이나 상용화된 표준패널을 사용하고 있다. 이들 물질들은 가격이 고가이고 사용량에 제한이 따른다. 특히 HIV 진단키트의 민감도를 평가하기 위해서는 저역가 검체를 사용하는 것이 중요하나 이들 검체를 확보하는 것은 매우 어렵다. 본 연구에서는 HIV 진단키트 품질관리를 위해 저역가의 물질이 포함되고 국내에서 확보가 어려운 HIV-2가 포함된 표준패널과 HIV-1 표준품을 확립하고자 하였다.
대한적십자사 혈액원 선별검사에서 양성 결과를 보여 혈액수혈

현재 대부분의 체외 진단키트 제조사들은 진단키트의 검정이나 품질관리를 위해 국제표준품이나 상용화된 표준패널을 사용하고 있다. 이들 물질들은 가격이 고가이고 사용량에 제한이 따른다. 특히 HIV 진단키트의 민감도를 평가하기 위해서는 저역가 검체를 사용하는 것이 중요하나 이들 검체를 확보하는 것은 매우 어렵다. 본 연구에서는 HIV 진단키트 품질관리를 위해 저역가의 물질이 포함되고 국내에서 확보가 어려운 HIV-2가 포함된 표준패널과 HIV-1 표준품을 확립하고자 하였다.
대한적십자사 혈액원 선별검사에서 양성 결과를 보여 혈액수혈연구원으로 HIV 확인검사가 의뢰된 혈액 279단위의 양성 혈액을 수집하였고 BBI사에서 HIV-2 양성 혈액 9단위를 구매하였다. 모든 혈액에 대하여 EIA 3종, CIA 1종 총 4종의 검사시약을 이용하여 선별검사를 실시하였다. HIV-1 패널을 제조하기 위하여 선별검사 결과 4종의 검사시약에서 양성 결과를 보이고 확인검사 당시 HIV-1 Western blot 양성인 혈액 중 다양한 역가의 혈액이 포함되도록 9개의 혈액을 선별하였다. 또한 HIV-2 혈액은 다양한 역가가 포함될 수 있도록 9개의 혈액을 희석하여 패널후보물질로 선별하였다. 모든 검사에서 음성 결과를 보이는 혈액 2단위를 포함하여 최종 20개의 HIV 1/2 표준패널 후보물질을 선별하였다. 표준품은 Western blot 검사에서 HIV-1 양성 결과를 보이는 2개의 후보물질을 선별하였다. 표준패널 후보물질은 원료혈장 그대로 분병하였으며 표준품은 원료 물질을 400배로 희석 후 2배씩 5개 역가로 계대희석하여 보존제를 첨가하여 분병하였다. 표준패널 후보품에 대해서는 국내의료기관 검사실에서 많이 사용하고 있는 CIA 검사시약 2종, ECA 검사시약 1종, EIA 3종 등 총 6종의 검사시약을 사용하여 7개 검사기관에서 공동연구를 수행하였다. 표준품 후보물질에 대해서는 CIA 1종을 사용하여 5개 검사기관에서 공동연구를 수행하였다.
본 연구결과 다양한 역가의 HIV-1과 HIV-2 검체로 구성된 20개의 표준패널과 10개의 HIV-1 표준품을 제조하였다. 제조된 물질은 HIV 진단키트 성능평가를 위한 품질관리물질로 활용될 수 있을 것이다.

Abstract ▼

International Standards or commercially available reference materials are currently used for the validation or quality assessment of diagnostic kits. However, due to their high cost and limited quantity a sustainable supply cannot be guaranteed. It is important to include materials with a low reacti

International Standards or commercially available reference materials are currently used for the validation or quality assessment of diagnostic kits. However, due to their high cost and limited quantity a sustainable supply cannot be guaranteed. It is important to include materials with a low reactivity for validation of HIV diagnostic kits, but these samples are difficult to collect. This study was conducted to establish a HIV-1/2 mixed titer performance panel and a HIV working standard for the quality control of HIV diagnostic kits.
279 plasma units referred for HIV confirmation were collected from Korean Red Cross blood centers. 9 units of HIV-2 plasma were purchased from BBI. Anti-HIV-1/2 testing with 3 EIA assays and 1 CIA assay was performed on all units. To select candidate materials, the reactivity of a commercial mixed titer performance panel to various HIV assays was determined. Based on the screening results, 9 units of HIV-1 plasma with reactive results on all 4 assays and confirmed by Western blot were selected as candidate materials for the mixed titer performance panel. HIV-2 plasma was diluted to be used as panel members. 2 plasma units with negative results on all assays were also included in the panel. 2 units with high titer for anti-HIV-1 were selected as candidate materials for the working standards, Candidate materials for the mixed titer performance panel were filled into the final containers without further manipulation. Candidates for the working standards were serially diluted into 5 dilutions and filled into the final containers after addition of Bronidox as preservative. Candidates for the mixed titer panel were subjected to collaborative study with 7 laboratories using 6 immunoassays. For the working standards, collaborative study was performed with 5 participating laboratories using 1 CIA assay.
As a results of this study, an anti-HIV-1/2 mixed titer performance panel and an HIV working standard have been established. These materials will enable the supply of validation materials on a long-term basis, improve the validation system for performance evaluation of HIV diagnostic kits in Korea and lead to quality improvement of diagnostic kits.

목차 Contents

• 용역연구개발과제 최종보고서...1
• 표지...2
• 제출문...4
• 목차...5
• I. 연구개발결과 요약문...7
• 국문 요약문...7
• Summary...9
• II. 총괄연구개발과제 연구결과 ...11
• 제1장 총괄연구개발과제의 목적 및 필요성 ...11
• 1.1 총괄 연구개발과제의 목표...11
• 1.2 총괄연구개발과제의 목표달성도...14
• 1.3 총괄국내.외 기술개발 현황...14
• 제2장 총괄연구개발과제의 내용 및 방법 ...17
• 2.1 HIV 양성 혈액 및 희석용 음성혈장 확보...17
• 2.2 HIV 1/2 표준패널 및 working standard 후보품 선별 및 확인검사...17
• 2.3. HIV 표준패널 및 working standard 후보물질 선정...18
• 2.4 HIV 표준패널 및 working standard 후보물질 분병...18
• 2.5 분병한 후보물질 검증을 위한 공동연구...19
• 2.6 안정성 평가...20
• 2.7 HIV 진단키트 품질관리 표준패널 및 working standard 제조.확립...21
• 제3장 총괄연구개발과제의 최종결과 및 고찰 ...22
• 3.1 HIV 양성 혈액 및 희석용 음성 혈액 확보...22
• 3.2 HIV 1/2 표준패널 및 HIV working standard에 대한 선별 및 확인 검사...22
• 3.3 HIV 1/2 표준패널 및 HIV working standard 후보물질 선별...30
• 3.4 HIV 1/2 표준패널 및 HIV working standard 후보물질 분병...31
• 3.5 공동연구 결과...32
• 3.6 안정성 실험 결과...34
• 3.7 HIV 진단키트 품질관리를 위한 표준패널 및 표준품 제조 및 확립...37
• 3.8 고찰...38
• 제4장 총괄연구개발과제의 연구성과 ...40
• 4.1 총괄활용성과...40
• 4.2 총괄활용계획...41
• 제5장 총괄주요연구 변경사항 ...42
• 제6장 총괄 참고문헌 ...43
• 제7장 총괄첨부서류 ...44