초록 ▼

미국, 유럽, 일본 등 OECD 회원국을 중심으로 동물을 사용하지 않고 짧은 시간 내에 적은 경비로 많은 내분비계 장애물질 등을 신속하게 검색할 수 있는 in vitro 시험법 개발 및 확립을 적극적으로 추진하고 있다.
특히 OECD는 미국, 일본, 유럽연합 등 OECD 회원국을 중심으로 1998년부터 내분비계장애물질 검색 시험법 개발 및 확립을 위한 국제 공동 연구를 추진해 오고 있다. OECD는 2007년도 10월에 OECD에서 설치류를 이용한 자궁비대반응시험법이 내분비계장애물질 in vivo 검색시험법으로서는 최초로 테스

미국, 유럽, 일본 등 OECD 회원국을 중심으로 동물을 사용하지 않고 짧은 시간 내에 적은 경비로 많은 내분비계 장애물질 등을 신속하게 검색할 수 있는 in vitro 시험법 개발 및 확립을 적극적으로 추진하고 있다.
특히 OECD는 미국, 일본, 유럽연합 등 OECD 회원국을 중심으로 1998년부터 내분비계장애물질 검색 시험법 개발 및 확립을 위한 국제 공동 연구를 추진해 오고 있다. OECD는 2007년도 10월에 OECD에서 설치류를 이용한 자궁비대반응시험법이 내분비계장애물질 in vivo 검색시험법으로서는 최초로 테스트 가이드라인으로 제정·공표되었으나, 보다 효과적으로 많은 물질을 단시간 안에 검색할 수 있는 in vitro 시험법은 아직 검증연구 또는 검증 후 체택 전 논의 과정에 있다. 본 연구에서는 일본의 화학물질평가연 구소(CERI)에서 개발한 에스트로겐 수용체 전사활성 시험법(Stably Transfected TranscriptionActivation(STTA) assay)의 (항)에스트로겐성 물질 시험법 및 Freyberger가 개발한 안드로겐 수용체 결합 시험법(rat recombinant andtogen receptor binding assay)의 국제검증연구에 참여하여, 내분비계장애물질 검색 시험법 확립을 위한 국제공동연구를 수행, OECD, EPA 등에서 권고하는 내분비계장애물질 in vitro 검색 시험법의 가이드라인화에 대비할 뿐만 아니라 국내 관련 기술의 국제적 표준화 및 선진화를 유도하고자 하였다. 본 STTA 시험법은 인간의 자궁경부암세포주인 HeLa 세포주에 상시 발현하는 human Estrogen Receptor α 유전자와, 리포터 유전자로써 에스트로겐 수용체의 활성에 의해 발현량이 조절되도록 제조된 개똥벌레의 발광유전자를 안정적으로 도입시킨 HeLa-X 세포주를 사용하였다. 즉, 리포터 유전자 의 활성을 측정함으로써 세포배양액 내에 존재하는 화학물질의 에스트로겐성 또는 항에스트로겐성을판단하도록 고안된 시험법이다. 항에스트로겐성 물질 검색시험법의 국제검증연구로 수행된 연구결과는 OECD에서 제시한 Task-1인 1단계 연구에서 STTA 시험법의 에스트로겐성 검색시험법 확립 및 기준을 통과 하였고, 2단계 연구 결과를 주도연구기관에 송부하였다. OECD 국제회의에서 본 연구 결과공개·토의되어 연구의 신뢰성을 확보하였으며, 시험법 확립에 기여함으로써 국제위상을 강화하였다. 또한 추가로 24여 가지 현안 물질들에 대하여 에스트로겐 활성을 측정함으로써 신속하고 재현성 있는 검색시험법으로써 유용 가능성을 제시하였다. 안드로겐 수용체 결합하는 물질을 신속하게 검색하기 위해 경제산업자문위원회(BIAC)에서 제안한 protocol에서 이용되는 rrAR의 ligand binding domain(LBD)를 이용하여 17여종 물질을 검색 하였다. 특히 본 연구결과 등을 통하여 OECD ER STTA assay 중 agonist assay 가이드라인(TG455) 마련에기여하였다. 이러한 국제검증연구는 국제적으로 표준화된 가이드라인 제정에 기여할 뿐만 아니라, 이러한 연구 분야에서의 국가적 위상을 높이는 계기가 될 수 있을 것으로 사료된다

Abstract ▼

There is few test and screening methods about endocrine disruptors which is one of the world wide social problems like environmental pollution, global warming. OECD first published the OECD guideline for the testing of chemicals test no. 440(Uterptrophic bioassay in rodents: a short-term screening t

There is few test and screening methods about endocrine disruptors which is one of the world wide social problems like environmental pollution, global warming. OECD first published the OECD guideline for the testing of chemicals test no. 440(Uterptrophic bioassay in rodents: a short-term screening test for oestrogenic properties as a in vivo screening test guideline in October, 2007. However, in vitro screening test guidelines which are effective in a large quantity screening for chemicals are still in process of the validation or the official discussion before adoption. Thus, to be beforehand with the international cooperative standardization of in vitro screening test method recommended by OECD or EPA, we participate in the international cooperative validation study of Stably Transfected Transcriptional Activation(STTA) assay developed by Japan Chemicals Evaluation and Research Institute(CERI). Besides contributing to the international validation study of the endocrine disuptors test and screening method, t will be helpful for acquiring the advanced international standardization of domestic related research field as well as for being ready for the global standardization of test methods. This STTA assay use Hela-X cell line which is stably transfected a human estrogen receptor α gene and a firefly luciferase gene as a reporter gene. By measuring the luciferase activity-chemilluminance by a luminometer, estrogenic or anti-estrogenic activity of test chemicals are easily detected. So far, we passed the Task-1 results of international validation study and sent the Task-2 results to the lead lab, NIHS, JaCVAM and our dada were presented and discussed in the last OECD meeting(VMG-NonAnimal). Furthermore, we detect the estrogenic activity of about 24 other chemicals by this STTA agonist assay. The in vitro androgen receptor (AR) binding assay for screening chemicals possessing endocrine disrupting potency is placed in level 2 in the OECD framework and can provide mechanistic information. The AR binding assay can be sed to determine the ability of probable endocrine disruptors (EDs) to compete with synthetic androgen methyltrienolone (R1881) for binding to recombinant rat AR (rrAR). In this study, we assessed AR binding of various 17 chemicals using Lexius Freyberger’s method. It is meaningful for us to participate in this OECD international validation study not only for contributing to the global standardization of testing and screening methods of endocrine disruptor but also for raising the national research standard in this field.

목차 Contents

• 최종보고서...1
• 표지...2
• 요약문 ...4
• Summary ...5
• 목차 ...6
• I. 연구개발과제 연구결과 ...7
• 제1장 연구개발과제의 개요 ...7
• 제1절 연구개발과제의 목표 ...7
• 제2절 연구개발과제의 필요성 ...7
• 제2장 연구개발과제의 국내?외 연구개발 현황 ...10
• 제3장 연구개발과제의 연구수행 내용 및 결과 ...14
• 제1절 연구개발과제의 연구수행 내용 및 결과 ...14
• 제2절 연구결과 ...31
• 제4장 연구개발과제의 연구결과 고찰 및 결론 ...68
• 1. 국제협력검증연구 참여 및 수행에 따른 in vitro 시험법 확립...68
• 2. 사회현안물질에 대해 (항)에스트로겐성 및 (항)안드로겐성 확인...69
• 3. 국제회의 참석 등 연구교류...70
• 제5장 연구개발과제의 목표달성도 및 관련분야에의 기여도 ...71
• 1. Stably Transfected Transcription Activation(STTA) 항에스트로겐성 물질 시험법의 국제검증연구 참여 및 androgen receptor binding assay 시험법 확립...71
• 2. 사회현안물질 24여종에 대해 STTA 에스트로겐성 물질 시험법 수행...71
• 3. 사 회 현 안물질 17여종에 대해 androgen receptor binding assay 시험법 수행...72
• 4. 국제회의 참석 등 연구교류...72
• 제6장 연구개발과제 연구개발 결과 활용계획 ...73
• 제1절 활용성과 ...73
• 제2절 활용계획 ...73
• 제7장 참고문헌 ...75