초록 ▼

급성 호흡기증후군 바이러스 (SARS)는 매우 높은 감염력 때문에 일반적인 실험실 및 임상에서 진단하는 것이 어렵다. 특히 감염초기 조기 진단은 질병예방 및 전염통제 측면에서 중요하다. 따라서 일반실험실 및 임상에서 수행할 수 있는 진단체계를 구축하는 것이 필요하다.
본 연구의 목표는 SARS-CoV 에 대한 nucleocapsid protein과 spike protein을 재조합 방법으로 생산하고, 이를 이용하여 ELISA와 신속진단키트 진단방법을 확립하고 일반실험실 및 임상에서도 중화 항체가를 검사할 수 있는 시스템을 확립

급성 호흡기증후군 바이러스 (SARS)는 매우 높은 감염력 때문에 일반적인 실험실 및 임상에서 진단하는 것이 어렵다. 특히 감염초기 조기 진단은 질병예방 및 전염통제 측면에서 중요하다. 따라서 일반실험실 및 임상에서 수행할 수 있는 진단체계를 구축하는 것이 필요하다.
본 연구의 목표는 SARS-CoV 에 대한 nucleocapsid protein과 spike protein을 재조합 방법으로 생산하고, 이를 이용하여 ELISA와 신속진단키트 진단방법을 확립하고 일반실험실 및 임상에서도 중화 항체가를 검사할 수 있는 시스템을 확립하는 것이다.
SARS-nucleocapsid-protein(N)의 경우, pET vector를 이용하여 원핵세포에서 N 단백질을 생산 정제하며, SARS-spike-protein(S)은 Vesicular stomatitis virus (VSVΔG) system을 이용하여 S 단백질을 생산했다. 사람의 Coronavirus (HcoV)인 OC43, 229E등과의 교차반응이 일어나지 않는 N-protein과 S-protein에 대한 항원들을 제작했다.
SARS virus (Vietnam Strain) 재조합 N-protein과 S-protein들을 이용하여 항원성이 강한 단클론 및 다클론 항체를 개발하고, 각각의 항원을 이용하여 ELISA 진단법을 확립했다. 그리고 N-protein 을 이용하여 신속진단키트(면역크로마토그래피법)를 개발했다.
SARS에 대한 신속진단을 통하여 질병의 예방 및 역학연구를 할 수 있으며, SARS의 보균 동물 탐색을 통하여 바이러스 변이 등을 추적할 수 있을 것이다. 또한 동물의 다른 Coronavirus와의 교차항원에 대한 광범위한 조사로 유전적인 변이조사와 바이러스의 phylogenetic 연구에 기여할 수 있을 것이다. 나아가 재조합 단백질을 이용한 진단시약 등의 평가기준 확립과 바이러스 출현에 대한 대응체계 구축에 큰 도움이 될 것이다.

Abstract ▼

Severe acute respiratory syndrome-coronavirus(SARS-CoV) cause an infectious disease through respiratory route. Diagnosing the disease effectively and accurately at early stage is essential for preventing the disease transmission and performing antiviral treatment. It is necessary that the diagnosis

Severe acute respiratory syndrome-coronavirus(SARS-CoV) cause an infectious disease through respiratory route. Diagnosing the disease effectively and accurately at early stage is essential for preventing the disease transmission and performing antiviral treatment. It is necessary that the diagnosis system which can be used in the laboratory and clinics is constructed.
This project`s goal is to produce the recombinant SARS nucleoprotein and SARS spike protein so to construct ELISA-kit and rapid immunochromatography kit. Through these kits we will able to detect the neutral antibody of SARS-CoV.
We produced the recombinant SARS nucleoprotein using pET vector and purified the protein. We produced recombinant SARS spike protein using Vesicular stomatitis virus (VSVΔG) system. These proteins must not be reacted with human coronavirus.
We raised monoclonal antibodies and polyclonal antibodies against the recombinant SARS nucleoprotein and recombinant SARS spike protein. And we construsted ELISA-kit and rapid immunochromatography kit using those proteins.
The development of the SARS-CoV diagnosis system will contribute to research for prevention, epidemology and mutation of the disease. In addition, we will able to research for the genetical mutation and phylogenetic information of the coronaviruses through the study about the cross reactivity among coronaviruses. In advance, that will be very helpful to set up the evaulation standard of the diagnosis kit using recombonant proteins and improve the control system against the out-break of the virus diseases.

목차 Contents

• 총괄 연구과제 요약 ...1
• 제출문 ...4
• 목차 ...5
• I. 연구개발결과 요약문 ...6
• 연구결과보고서요약문 ...6
• Summary ...7
• II. 총괄연구개발과제 연구결과 ...8
• 제1장 총괄연구개발과제의 최종 연구개발 목표 ...8
• 1절 총괄연구개발과제의 목표 ...8
• 2절 총괄연구개발과제의 목표달성도 ...11
• 3절 국내.외 기술개발 현황 ...12
• 제2장 총괄연구개발과제의 최종 연구개발 내용 및 방법 ...14
• 1절 연구내용 ...14
• 2절 연구방법 ...16
• 제3장 총괄연구개발과제의 최종 연구개발 결과 ...27
• 1절 재조합 SARS-CoV-N 항원을 이용한 진단계의 확립 ...27
• 2절 SARS-CoV-S 항원을 생산하는 virus-like-particle(VLP)를 이용한 진단계 확립 ...41
• 제4장 총괄연구개발과제의 연구결과 고찰 및 결론 ...50
• 1절 재조합 SARS-CoV-N 항원을 이용한 진단계의 확립 ...50
• 2절 SARS-CoV-S 항원을 생산하는 virus-like-particle(VLP)를 이용한 진단계 확립 ...50
• 제5장 총괄연구개발과제의 연구성과 ...52
• 1절 활용성과 ...52
• 2절 활용계획 ...53
• 제6장 기타 중요변경사항 ...55
• 제7장 참고문헌 ...56
• 제8장 첨부서류 ...58