초록 ▼

본 과제는 메르스 바이러스에 대한 항원과 항체를 검출하는데 그 목적이 있다. 항원의 검출은 바이러스의 특정단백질에 대한 항체를 제작하고 감염된 환자의 객담으로부터 신속하게 항원을 검출하는 면역학적 방법에 의한 항원진단키트와 세 가지 유전자를 동시 증폭하여 ICA 기법을 이용하여 유전자키트의 개발이다. 항체의 검출은 감염환자의 혈액으로부터 메르스 바이러스에 대한 항체를 면역학적 방법으로 검출하는 키트의 개발과 BL2실험실에서도 중화항체가를 측정할 수 있는 시험법을 개발하는 것이 본 과제의 주된 목적이 있다고 하겠다.

면역

본 과제는 메르스 바이러스에 대한 항원과 항체를 검출하는데 그 목적이 있다. 항원의 검출은 바이러스의 특정단백질에 대한 항체를 제작하고 감염된 환자의 객담으로부터 신속하게 항원을 검출하는 면역학적 방법에 의한 항원진단키트와 세 가지 유전자를 동시 증폭하여 ICA 기법을 이용하여 유전자키트의 개발이다. 항체의 검출은 감염환자의 혈액으로부터 메르스 바이러스에 대한 항체를 면역학적 방법으로 검출하는 키트의 개발과 BL2실험실에서도 중화항체가를 측정할 수 있는 시험법을 개발하는 것이 본 과제의 주된 목적이 있다고 하겠다.

면역학적 기법을 이용한 MERS-CoV Ag 키트는 nucleocapsid protein에 결합하는 키트의 주원료인 항체 클론을 확보하였다. 또한 다른 호흡기 감염병과는 다르게 객담에 바이러스 함유율이 높아서 객담을 녹일 수 있는 검체처리과정을 포함하여 성공적으로 진단키트의 개발이 이루어졌다. 개발된 제품은 허가를 받기위한 분석적 성능 시험이 수행되었다.

유전적 기법을 이용한 MERS-CoV Multiplex PCR-ICA 키트도 객담에서 바이러스의 유전자를 증폭시킬 수 있는 처리방법을 개발하고 RdRp, upE, N 유전자를 동시에 증폭하는 primer를 개발하였다. 증폭된 유전자는 전기영동 없이 ICA법을 이용하여 확인 가능한 키트를 개발하였다.

메르스 항체 키트개발을 위한 spike, nucleocapsid protein의 재조합 단백질은 클로닝 및 발현 그리고 정제과정 이 성공적으로 이루어 졌다. 양성검체로 토끼 항혈청을 이용하여 항체키트를 개발하였다..

중화항체가 시험은 메르스 특성상 BL3에서 진행되어야 하는데 MERS Spike gene을 pseudovirus에 삽입하여 BL2실험실에서도 활용이 가능한 시험법을 성공적으로 개발하였다. MERS pseudovirus를 이용한 중화항체 시험법은 SOP를 작성하여 학문적인 연구 활성화에 기대가 된다.

이 일련의 성과들은 차 후 국내 메르스 바이러스의 재 유입시 사용가능하며 해외로부터의 유입을 조기 차단 및 방지할 수 있다.

(출처 : 최종보고서 요약문 6p)

Abstract ▼

This project is mainly for developing diagnostic kit which can detect Mers Virus antigen , diagnostic kit which can detect the virus antibody from blood of infected person and finally experiment method which can measure neutralizing antibodyeven in BL2 laboratory.

First, There are two way of

This project is mainly for developing diagnostic kit which can detect Mers Virus antigen , diagnostic kit which can detect the virus antibody from blood of infected person and finally experiment method which can measure neutralizing antibodyeven in BL2 laboratory.

First, There are two way of detecting Antigen of Mers virus. One is developing antigen diagnostic kit by using immunological method.

The other way is developing gene diagnostic kit by amplificating three kinds of Mers specific gene.

To reach the goal of this project, Antibody clones ,which combine with Nucleocapsid protein, should be secured. Surely, the Nucleocapsid protein is main ingredient for diagnostic antigen kit.

Additionally, because viruses are contained in sputum as high proportion, preprocessing method should be developed.

Finally, analytical performance test should accompany by the items mentioned above Let me tell the experiment method of ICA.

MERS-COV Multiplex PCR-ICA kit was developed by way of processing which is able to amplificate the viruses in sputum. And also we developed an primer which can amplify genes of RdRp, upE and N. So, Through the ICA method, the amplified gene can be seen without electrophoresis.

Production of recombinant protein targeted by Spike and Nucleo protein proceed successfully. Rabbit antiserums are used for developing antibody kit. experiment of neutralizing antibody normally should be conducted in BL3 laboratory.

However, RapiGEN INC. did experiment in BL2 laboratory by inserting MERS Spike gene into pseudovirus.

Through this study, We, RapiGEN, drew Standard Operating Procedure and we believe we will contribute our study to other academic study as reference.

If Mers virus will occur in Korea, our study would be helpful to shut off the virus into Domestic and be utilized. Thus, we anticipate this study will be contribute to national health.

(출처 : Summary 7p)

목차 Contents

• 표지 ... 1
• 학술연구개발용역과제 최종결과보고서 ... 2
• 목차 ... 3
• 연구결과점검보고서 요약문 ... 6
• Summary ... 7
• 학술연구개발용역과제 연구결과 ... 8
• 제1장 최종 목표 ... 8
• 1절. 목표 ... 8
• 2절. 목표달성도 및 관련분야에 대한 기여도 ... 10
• 제2장 국내외 기술 현황 ... 12
• 제3장 최종 연구 내용 및 방법 ... 13
• 1절. 면역학적 크로마토그래피(ICA)를 이용한 신속진단 키트의 제작 ... 13
• 2절. 중화항체가 시험 ... 21
• 제4장 최종 연구 결과 ... 24
• 1절 MERS-CoV 항원 진단 키트의 개발 ... 24
• 2절 MER-CoV 항체 진단 키트의 개발 ... 47
• 3절 MERS-CoV Multiplex PCR-ICA 키트의 개발 ... 51
• 4절 MERS-CoV 중화항체 시험의 개발 ... 60
• 제5장 연구결과 고찰 및 결론 ... 64
• 제6장 연구성과 및 활용계획 ... 65
• 제7장 연구용역과제 진행과정에서 수집한 해외과학기술정보 ... 66
• 제8장 기타 중요변경사항 ... 67
• 제10장 참고문헌 ... 68
• Ⅲ. 제1세부용역과제 연구결과 ... 69
• 제1장 제1세부연구용역과제의 최종 연구목표 ... 69
• 제2장 제1세부연구용역과제의 국내외 기술 현황 ... 70
• 제3장 제1세부연구용역과제의 용역과제 내용 및 방법 ... 71
• 제4장. 제1세부연구용역과제의 최종 용역과제 결과 ... 75
• 제5장 제1세부연구용역과제의 연구결과 고찰 및 결론 ... 99
• 제6장 제1세부연구용역과제의 연구성과 및 활용계획 ... 100
• 제7장 제1세부연구용역과제의 진행과정에서 수집한 해외과학기술정보 ... 101
• 제8장 제1세부연구용역과제의 기타 중요변경사항 ... 102
• VI. 제2세부용역과제 연구결과 ... 103
• 제1장 제2세부연구용역과제의 최종 연구목표 ... 103
• 제2장 제2세부연구용역과제의 국내외 기술 현황 ... 104
• 제3장 제2세부연구용역과제의 용역과제 내용 및 방법 ... 106
• 제4장. 제2세부연구용역과제의 최종 용역과제 결과 ... 118
• 제5장 제2세부연구용역과제의 연구결과 고찰 및 결론 ... 136
• 제6장 제2세부연구용역과제의 연구성과 및 활용계획 ... 147
• 제7장 제2세부연구용역과제의 진행과정에서 수집한 해외과학기술정보 ... 148
• 제8장 제2세부연구용역과제의 기타 중요변경사항 ... 150
• 끝페이지 ... 151