초록 ▼

원화(Genkwa flos)는 한약재중 독성이 강하다고 알려진 약재이다. 복용시 가공 (수치)을 제대로 하지 않거나 과량 복용하였을 경우 극심한 설사와 복통이 유발된다고 알려져 있다. 따라서, 본 연구에서는 원화를 가공하여 추출한 수치원화 (processed Genkwa flos)를 대상으로 과학적이면서 객관적인 독성을 규명하고자, 90일 반복투여 독성시험 및 유전독성시험을 실시하였다.
13주 경구 반복투여독성시험의 본시험에 앞서 투여용량의 설정을 위하여 14일 반복투여독성시험을 2, 1, 0.5, 0.25, 0.125 g/k

원화(Genkwa flos)는 한약재중 독성이 강하다고 알려진 약재이다. 복용시 가공 (수치)을 제대로 하지 않거나 과량 복용하였을 경우 극심한 설사와 복통이 유발된다고 알려져 있다. 따라서, 본 연구에서는 원화를 가공하여 추출한 수치원화 (processed Genkwa flos)를 대상으로 과학적이면서 객관적인 독성을 규명하고자, 90일 반복투여 독성시험 및 유전독성시험을 실시하였다.
13주 경구 반복투여독성시험의 본시험에 앞서 투여용량의 설정을 위하여 14일 반복투여독성시험을 2, 1, 0.5, 0.25, 0.125 g/kg B.W으로 14일간 투여한 결과, 시험물질에 의한 것이라고 사료되는 임상증상, 행동이상, 사망례 및 체중변화 등은 관찰되지 않았다. 육안적 부검소견, 장기무게에 있어서도 유의한 변화는 관찰되지 않았다.
14일 반복투여 독성시험의 결과를 고려하여, 본시험 13주 경구 반복투여 독성시험의 최고용량을 2g/kg B.W.으로 설정하였고, 공비 3으로 5단계의 용량(2, 0.667, 0.222, 0.074, 0.025 g/kg B.W.)으로 13 주간 반복투여 하였다. 시험 결과 본 시험물질의 독성에 의한 것으로 추정되는 임상증상 및 사망, 체중변화, 사료/음수섭취량 변화, 혈액학 및 혈액생화학적 이상, 뇨검사 수치 이상, 수컷의 생식기관 및 정자 검사시 이상, 육안적 부검소견은 관찰되지 않았다. 하지만, 장기중량에서 암수 간장의 중량이 0.667g/kg 투여군에서부터 증가하였다. 따라서, 병리조직학적 검경시 간장을 면밀하게 관찰하여야 할 것으로 판단된다. 현재까지 결과로 보아, 수치원화 추출물은 F344 랫드에서의 무해용량은 0.667g/kg 이하인 것으로 추정된다.
수치원화 추출물의 in vitro system 적용을 위해 시험물질을 최고용량으로 D.D.W.에 용해한 후 filtering(0.22㎛)하여 희석하여 사용하였다. 복귀돌연변이시험은 시험물질을 5,000, 2,500, 1,250, 625, 312.5㎍/100㎕/plate의 농도로 시험한 결과, 대사활성계 미적용시 TA98, TA102, TA1537 균주에서 양성이 대사활성계 적용시에는 TA1537에서 양성이 관찰되었다. 염색체이상시험에서는 MTT법을 이용한 세포독성시험을 실시하여 세포독성이 나타나지 않는 최고 농도를 설정하여 2,500, 1,250, 625 ㎍/ml 의 용량으로 실시한 결과, 음성대조군과 비교하여 염색체의 구조적 이상 및 수적 이상에 있어 통계학적으로 유의한 변화가 관찰되지 않았으므로 음성으로 판정하였다. 소핵시험에서는 본시험에서의 투여용량과 검체제작시간 설정을 위한 예비시험을 통해 MTD 및 소핵유발빈도를 관찰하여 최고용량을 2g/kg B.W.으로 설정하였고, 소핵유발빈도가 가장 높은 시간대의 유의한 차이가 없어서 최종 투여 후 24시간에 검체를 제작하기로 하여, 본시험은 2, 1, 0.5g/kg의 용량으로 4일간 매일 1회 경구 투여하였다. 최종 투여 후 24시간째에 골수도말 검체를 제작하여 소핵의 유발빈도를 관찰한 결과 소핵유발능이 없는 것으로 판단되었다. 따라서. 시험물질 수치원화 추출물은 복귀돌연변이시험에서 양성으로 나타나 유전독성이 있는 것으로 사료된다.

Abstract ▼

Genkwa flos can not be taken unless the toxicity is removed. To decrease the toxicity of Genkwa flos, some processing method should be applied. This study was performed to evaluate 13-week repeated dose toxicity(RDT) and genotoxicity of processed Genkwa flos(PGF) according to theUS-NTP protocol and

Genkwa flos can not be taken unless the toxicity is removed. To decrease the toxicity of Genkwa flos, some processing method should be applied. This study was performed to evaluate 13-week repeated dose toxicity(RDT) and genotoxicity of processed Genkwa flos(PGF) according to theUS-NTP protocol and GLP guideline.
To determine the appropriate dosage of PGF extract administration, 14-days RDT study were performed. 14-days repeated dose study was performed to dosage levels of 0125, 0.25, 0.5, 1 and 2g/kg/day in F344/N rats. Based on preliminary tests, PGF extract was orally administered five times per week for 13 weeks in F344/N rats at dosage levels of 2, 0.667, 0.222, 0.074, 0.025 g/kg/B.W. Vehicle control group were received D.D.W. No test substance-related effect were observed in some criteria included mortality; clinical signs; body weight changes; food and water consumption; hematology and serum biochemistry parameters; male reproductive tissue evaluations; and gross findings. However, liver weight were significantly increased at dose 0.667 and 2.0g/kg. Therefore, NOAEL for PGF extract might be thought under 0.667g/kg in male and female F344 rats.
In reverse mutation assay of PGF extract using Salmonella typhimurium TA98, TA100, TA102, TA1535 and TA1537, test substance was diluted to 5 dosage levels of 312.5, 625, 1,250, 2,500 and 5,000㎍/plate with D.D.W.. Each tester strain was exposed to the test item with and without metabolic activation system. TA98, TA102 and TA1537 were 2-fold increased at 5,000㎍/plate without metabolic activation. TA1537 were significantly increased up to 5,000㎍/plate dose dependently. These results suggest that PGF extract might have reverse mutagenicity under the condition of this study.
Chromosome aberration test of PGF extract was performed to evaluate its clastogenic potential in Chinese Hamster Lung fibroblast (CHL) cell line. The test substance was diluted to 3 dosage levels of 2,500, 1,250, 625㎍/ml. Cells were exposed to test items for 6 or 24 hours in the absenceof metabolic activation system, or for 6 hours in the presence of metabolic activation system.
There was no statistically significant increase in the number of structural or numeric aberrant metaphases at any dose both in the presence and absence of metabolic activation. A micronucleus test of PGF extract was performed using ICR mice. The test substance was orally administered to 3 groups of 8-week old male ICR mice at dosage levels of 2, 1, and 0.5g/kg B.W. for 4 days. Five male mice were used in each test group. All animals were sacrificed about 24 hours after the final administration. No treatment related changes were noted in the mortality, clinical signs and body weight changes. Frequency of MNPCEs and ratio PCE were not increased at any treated dose.

목차 Contents

• 용역연구사업 연구결과보고서 ...1
• 제출문 ...2
• 목차 ...3
• I. 연구개발결과 요약문 ...4
• 국문요약문 ...4
• 영문요약문 ...5
• II. 총괄연구개발과제 연구결과 ...6
• 제1장 총괄연구개발과제의 최종 연구개발 목표 ...6
• 제1절 총괄연구개발과제의 목표 ...6
• 제2절 총괄연구개발과제의 목표달성도 ...8
• 제3절 국내?외 기술개발 현황 ...8
• 제2장 총괄연구개발과제의 최종 연구개발 내용 및 방법 ...10
• 제1절 연구개발내용 ...10
• 제2절 연구개발방법 ...12
• 제3장 총괄연구개발과제의 최종 연구개발 결과 ...18
• 제1절 14일 반복투여독성시험 ...18
• 제2절 13주 반복투여독성시험 ...57
• 제3절 유전독성시험 - 복귀돌연변이시험 ...133
• 제4절 유전독성시험 - 염색체이상시험 ...158
• 제5절 유전독성시험 - 소핵시험 ...200
• 제4장 총괄연구개발과제의 연구결과 고찰 및 결론 ...229
• 제5장 총괄연구개발과제의 연구성과 ...230
• 5.1 활용성과 ...230
• 5.2 활용계획 ...231
• 제6장 기타 중요변경사항 ...231
• 제7장 참고문헌 ...231
• 제8장 첨부서류 ...233
• 총괄 연구과제 요약 ...234