보고서 정보
주관연구기관 |
서울대학교 약학대학 College of Pharmacy, Seoul National University |
연구책임자 |
김대덕
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보고서유형 | 최종보고서 |
발행국가 | 대한민국 |
언어 |
한국어
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발행년월 | 2004-11 |
과제시작연도 |
2004 |
주관부처 |
식품의약품안전청 |
사업 관리 기관 |
식품의약품안전청 Korea Food & Drug Administration |
등록번호 |
TRKO201000016053 |
과제고유번호 |
1470000940 |
사업명 |
식품의약품안전성관리 |
DB 구축일자 |
2013-04-18
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키워드 |
이소트레티노인.생물학적동등성.생체이용률.약물동력학적 파라메타.Isotretinoin.Bioequivalence.Bioavailability.Pharmacokinetic parameters.
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초록
▼
본 연구에서는 이소트레티노인(로아큐탄, 한국로슈)의 생체이용률시험을 통하여 동 제제의 표준 생물학적동등성시험의 지침을 제시하는 것을 목적으로 하였으며 이를 통해 생물학적동등성시험의 활성화 및 약효동등성시험 관리의 효율화에 기여하고자 한다. 제 1 세부기관, 제 2 세부기관 및 제 3 세부기관의 세부기관 별로 각각 이소트레티노인 표준 분석법을 확립하였다. 1차 시험으로 제 1 세부기관에서 건강한 성인 8인을 모집하여 생물학적동등성시험 방법에 따라 대조약인 한국로슈의 로아큐탄 캅셀(이소트레티노인 50 mg)을 경구로 투여한 다음, 취한
본 연구에서는 이소트레티노인(로아큐탄, 한국로슈)의 생체이용률시험을 통하여 동 제제의 표준 생물학적동등성시험의 지침을 제시하는 것을 목적으로 하였으며 이를 통해 생물학적동등성시험의 활성화 및 약효동등성시험 관리의 효율화에 기여하고자 한다. 제 1 세부기관, 제 2 세부기관 및 제 3 세부기관의 세부기관 별로 각각 이소트레티노인 표준 분석법을 확립하였다. 1차 시험으로 제 1 세부기관에서 건강한 성인 8인을 모집하여 생물학적동등성시험 방법에 따라 대조약인 한국로슈의 로아큐탄 캅셀(이소트레티노인 50 mg)을 경구로 투여한 다음, 취한 혈청시료로부터 분석법을 확인하고 채혈시간 등 생물학적동등성시험의 세부사항을 검토하였다. 2차 및 3차 시험을 제 2 세부기관 및 제 3세부기관에서 순차적으로 진행하여 분석법 및 채혈시간 등 생물학적동등성시험의 세부사항을 재검토하였다. 최종적으로 이를 종합하여 이소트레티노인 제제의 생물학적동등성시험의 표준지침을 작성하였다. 다음의 HPLC 분석조건, 즉, 컬럼 (Shiseido calcellpa가 C18(5㎛, 4.6x250 mm)), 이동상 (Acetonitrile: 0.5% acetic acid) = 93:7(v/v %)), 유속 (1.0 ml/min), UV detector (360nm)에서 이소트레티노인을 분석하였다. 혈청 0.3 mL에 내부표준물질로 retinyl acetate (RA) (0.1 mg/mL) 10 $\mu$L를 넣은후 vortex를 하고 150 $\mu$L의 에탄올과 300 $\mu$L $K_{2}HPO_{4}$ (1M, pH. 3.4), 그리고 300 $\mu$L hexane을 가하였다. 13000 rpm에서 원심분리를 한 후 상 등액 (유기층)을 취하였다. 이 과정을 3회 반복 후 유기층들을 모으고 hexane을 질소로 날린 후 60 $\mu$L 메탄올에 다시 용해시킨 후 HPLC로 분석하였다.
상기의 분석조건으로 제 1 세부, 제 2 세부 및 제 3 세부 기관 모두에서 순차적으로 분석법을 검증한 결과, 모두 특이성 및 직선성이 양호하게 판명되었으며, 또한, 일내 및 일간 정밀성 및 정확성이 모두 규정 조건을 만족시켰다. 정량한계농도를 5 ng/mL로 결정하였다. 이로부터 혈청(장) 중 이소트레티노인에 대한 본 HPLC분석법은 인체에 대한 생체이용률 시험에 이용될 수 있는 충분한 감도, 특이성, 직선성, 정확성 및 정밀성을 갖고 있음을 알 수 있었다. 절식상태 건강한 한국인 성인 남성 24명(세 세부기관 합계)을 대상으로 한 이소트레티노인 제제 50 mg 일회 경구투여 시험 결과, 최종상 반감기(t1/2)는22.35±6.03 시간, 최고혈청중 농도($C_{max}$)는 642.43±163.94 ng/ml, 최고혈청중 농도 도달시간($t_{max}$)은 2.45±1.14 시간으로 나타났다. 한편, AUCt은 8061.77±2088.34 을 나타내었다. 따라서 채혈시간은 72시간 까지로 하는 것이 타당하다고 생각된다. 또한, $T_{max}$는 2.45시간의 값으로, 초기 채혈시간을 0.5, 1, 2 시간으로 설정하여도 최고혈중농도 도달 전 적어도 2포인트 이상 채혈할 것이라는 생물학적동등성시험 기준을 만족하는 것으로 평가되었다.
Abstract
▼
The purpose of the present study was to propose a guideline of the bioequivalence test of isotretinoin capsule on the basis of the bioequivalence criteria of the Korea Food and Drug Administration. For this purpose, a simple, specific and sensitive HPLC assay method using UV detection (360nm) for is
The purpose of the present study was to propose a guideline of the bioequivalence test of isotretinoin capsule on the basis of the bioequivalence criteria of the Korea Food and Drug Administration. For this purpose, a simple, specific and sensitive HPLC assay method using UV detection (360nm) for isotretinoin in serum was evaluated and validated. The compound was separated on an C-18 reversed-phase HPLC column with a mobile phase of acetonitrile:$K_{2}$$HPO_{4}$ (pH adjusted 4.0 with phosphoric acid) = 93:7 (v/v %). Retinyl acetate (RA) (0.1 mg/mL) 10 $\mu$L (1mg/mL in methanol) was added as an internal standard to an aliquot of human serum (0.3 mL).
After the addition of 150 $\mu$L of methanol and 300 μL of $K_{2}$$HPO_{4}$ (1M, pH 3.4), each sample was vortex mixed with 300 μL of hexane and centrifuged at 13,000rpm. The organic portion was separated, then this procedure was repeated three times. The supernatant (organic phase) was evaporated under nitrogen gas. The residue was reconstituted in 60 uL of methanol, was injected into the HPLC system. The HPLC assay was linear over the usable concentration range (5-300 ng/ml) and it provides good validation data for both intra-day and inter-day accuracy and precision. The coefficients of variation for all criteria of validation were less than 20% in the quantitation limit (5 ng/mL) and less than 15% in the other concentration ranges. A bioavailability study of the RoAccutane capsule ${\circledR}$ (10 mg), a formulation of isotretinoin, was conducted. Twenty four healthy Korean subjects were received each formulation at the dose of 50 mg of isotretinoin. AUC was calculated by the linear trapezoidal method. Cmax and tmax were compiled from the serum drug concentration-time data. The half life value (t1/2), Cmax, tmax and AUCt were calculated to be 22.34±6.03hr, 642.43±163.94 ng/ml, 2.46±1.14hr and 8061.77±2088.04 ng?hr/ml, respectively. In conclusion, the methods proposed in the present study was, therefore, considered to be suitable for the assay of isotretinoin in serum samples. Moreover, the guideline proposed in the present study is able to be used for the bioequivalence test of isotretinoin capsule in the near future.
목차 Contents
- 용역연구개발사업최종보고서 ...1
- 표지 ...2
- 제출문 ...4
- 요약문 ...5
- Project Summary ...6
- 목차 ...7
- 제1장 서론 ...8
- 1. 연구목적 및 필요성 ...8
- 2. 연구내용 및 방법 ...8
- 제2장 국내.외 기술개발 현황 ...9
- 1. 국내외 연구동향(연구배경) ...9
- 2. 연구결과에 대한 기여도, 기대효과 및 활용방안 ...9
- 3. 공동연구로 수행해야 할 필요성 ...9
- 제3장 연구개발수행 내용 및 결과 ...10
- 1. 분석법 확립 결과 (validation 포함) ...10
- 2. 생체이용률시험 결과 ...11
- 제4장 연구개발목표 달성도 및 대외 기여도 ...12
- 제5장 연구개발결과의 활용성과 및 계획 ...12
- 가. 계량적 성과 ...12
- 나. 성과내용기술 ...12
- 다. 활용계획 ...12
- 제6장 기타 중요변경 사항 ...12
- 제7장 생물학적동등성시험 표준지침(안) ...13
- 가. 서론 ...13
- 나. 생물학적동등성시험 ...14
- 다. 참고문헌 ...18
- 제8장 참고문헌 ...19
- 이소트레티노인의 생체이용률시험 및 생물학적 동등성시험 표준 지침 작성 결과보고서(제1세부과제) ...20
- 목차 ...21
- 1. 시험제목, 시험 목적 및 시험결과의 요약 ...23
- 1.1. 시험제목 ...23
- 1.2. 시험목적 ...23
- 1.3. 시험결과의 요약 ...23
- 2. 대조약의 성분명 및 명칭, 제형 함량, 용법 및 용량 ...24
- 3. 시험기관 ...24
- 4. 연구기간 ...24
- 5. 대조약의 관리 ...24
- 6. 예비시험 ...24
- 7. 피험자의 선정 기준 및 방법 ...24
- 7.1. 지원자 모집 ...25
- 7.2. 검강검진 ...25
- 7.3. 선정기준 ...25
- 7.4. 지원자 동의 방법 ...26
- 7.5. 최종 선정된 피험자 ...26
- 7.6. 중도 탈락자와 그 사유 ...27
- 8. 실험예수 ...27
- 9. 시험 방법 ...27
- 9.1. 시험전날 피험자의 관리 ...27
- 9. 2. 시험일 피험자의 관리 ...28
- 10. 채혈인 경우 감염방지 대책 ...29
- 11. 검체처리 및 분석방법 ...29
- 11.1. 분석대상 ...29
- 11.2. 분석기기 조건 ...29
- 11.3. 혈장(청) 시료의 처리 및 혈중 농도의 계산 ...29
- 11.4. 검량선 작성 ...30
- 12. 시험결과 및 validation 자료 ...30
- 12. 1 분석조건의 검증 ...30
- 12.2. 각 피험자의 시간에 따른 혈장 중 이소트레티노인의 농도추이 ...37
- 12. 3. 생체이용률 파라메타의 산출 ...41
- 13. 결론 ...41
- 14. 참고문헌 ...42
- 이소트레티노인의 생체이용률시험 및 생물학적 동등성시험 표준 지침 작성 중간보고서(제2세부과제) ...43
- 목차 ...44
- 1. 시험제목, 시험 목적 및 시험결과의 요약 ...46
- 1.1. 시험제목 ...46
- 1.2. 시험목적 ...46
- 1.3. 시험결과의 요약 ...46
- 2. 대조약의 성분명 및 명칭, 제형 함량, 용법 및 용량 ...47
- 3. 시험책임자 및 담당자 성명, 소속 및 직책 ...47
- 3.1. 시험책임자 ...47
- 3.2. 시험담당자 ...47
- 4. 예비시험 ...47
- 5. 피험자 선정기준 및 방법 ...48
- 5.1. 지원자 모집 ...48
- 5.2. 검강검진 ...48
- 5.3. 선정기준 ...48
- 5.4. 지원자 동의 방법 ...49
- 6. 시험대상 예수 및 시험대상군 분류 ...49
- 7. 시험방법 ...49
- 7.1. 시험전날 피험자의 관리 ...49
- 7.2. 시험일 피험자의 관리 ...50
- 8. 채혈인 경우 감염방지 대책 ...51
- 9. 검체처리 및 분석방법 ...51
- 9.1. 분석대상 ...51
- 9.2. 주요기기 및 장치 ...51
- 9.3. 분석기기 조건 ...51
- 9.4. 검량선 작성 ...51
- 9.5. 혈장(청) 시료의 처리 ...51
- 9.6. 혈중농도계산 ...51
- 10. 시험결과 및 validation 자료 ...52
- 10.1. 분석조건의 검증 ...52
- 10.2. 각 피험자의 시간에 따른 혈장(청) 중 이소트레티노인의 농도추이 ...59
- 10.3. 생체이용률 파라메타의 산출 ...63
- 10.4. 시험결과에 대한 종합의견 ...63
- 11. 시험의 신뢰성 보증 ...64
- 12. 참고문헌 ...64
- 이소트레티노인의 생체이용률시험 및 생물학적 동등성시험 표준 지침 작성 중간보고서 (제3세부과제) ...66
- 목차 ...67
- 1. 시험제목, 시험 목적 및 시험결과의 요약 ...69
- 1.1. 시험제목 ...69
- 1.2. 시험목적 ...69
- 1.3. 시험결과의 요약 ...69
- 2. 대조약의 성분명 및 명칭, 제형, 사용기한, 제조번호 ...70
- 3. 시험책임자 및 담당자 성명, 소속, 및 직책 ...70
- 3.1. 시험책임자 ...70
- 3.2. 시험담당자 ...70
- 4. 예비시험 ...71
- 5. 피험자의 선정 기준 및 방법 ...71
- 5.1. 지원자 모집 ...71
- 5.2. 검강검진 ...71
- 5.3. 선정기준 ...72
- 5.4. 지원자 동의 방법 ...74
- 6. 시험예수 ...74
- 7. 시험 방법 ...74
- 7.1. 시험 전날 피험자 관리 ...74
- 7.2. 시험 당일 피험자 관리 ...75
- 8. 채혈인 경우 감염방지 대책 ...76
- 9. 검체처리 및 분석방법 ...76
- 9.1. 분석대상 ...76
- 9.2. 주요기기 및 장치 ...76
- 9.3. 분석기기 조건 ...77
- 9.4. 검량선 작성 ...77
- 9.5. 혈장 시료의 처리 ...77
- 9.6. 혈중농도계산 ...77
- 10. 시험결과 및 validation 자료 ...78
- 10.1. 분석조건의 검증 ...78
- 10.2. 각 피험자의 시간에 따른 혈장 중 이소트레티노인의 농도 추이 ...81
- 10.3. 생체이용률 파라메타의 산출 ...86
- 10.4. 시험결과에 대한 종합 의견 ...86
- 11. 시험의 신뢰성 보증 ...87
- 총괄 연구과제 요약 ...88
- 세부 연구과제 요약 (제1세부) ...90
- 세부 연구과제 요약 (제2세부) ...92
- 세부 연구과제 요약 (제3세부) ...94
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