1) MMTV/c-Neu/CYP1B1/TAK 형질 전환 생쥐 생산 (3 세대) 전년도에 개발, 생산된 MMTV/c-Neu/CYP1B1/TAK 형질 전환 생쥐 모델의 안정화 및 대량화를 위하여 3차 생산을 하고 genotyping으로 확인하였다. 2) MMTV/c-Neu/CYP1B1/TAK 형질 전환 생쥐에서 발암의심 화학물질 투여에 의한 유방암 발생 검색 MMTV/c-Neu/CYP1B1/TAK 형질 전환 생쥐 모델의 유효성을 살펴보고자 발암 의심 화학물질로 알려진 DMBA를 투여한 뒤, 암 발생 여부를 살펴보았다.
1) MMTV/c-Neu/CYP1B1/TAK 형질 전환 생쥐 생산 (3 세대) 전년도에 개발, 생산된 MMTV/c-Neu/CYP1B1/TAK 형질 전환 생쥐 모델의 안정화 및 대량화를 위하여 3차 생산을 하고 genotyping으로 확인하였다. 2) MMTV/c-Neu/CYP1B1/TAK 형질 전환 생쥐에서 발암의심 화학물질 투여에 의한 유방암 발생 검색 MMTV/c-Neu/CYP1B1/TAK 형질 전환 생쥐 모델의 유효성을 살펴보고자 발암 의심 화학물질로 알려진 DMBA를 투여한 뒤, 암 발생 여부를 살펴보았다. DMBA 투여군은 대조군과 비슷한 시기에 신생종이 관찰되었고, 오히려 대조군에 비해 암 발생률이 낮게 나타났다. 3) 사람 유방암 동물 모델로 개발된 형질 전환 생쥐의 활용 신규 ALK-5 저해제 (TGF$\beta$1 차단제)인 IN-1130의 유효성 검색한 결과, 유방암이 발생한 MMTV/c-Neu/CYP1B1/TAK Triple 형질 전환 생쥐의 폐암으로의 전이를 차단했다. $E_{2}$ (17$\beta$-estradiol)의 발암독성 평가 및 EGCG (EpiGalloCatechin Gallate)의 유효성을 검색한 결과, MMTV/c-Neu/CYP1B1/TAK Triple 형질 전환 생쥐 모델에서 발암 의심 화학 물질인 $E_{2}$는 발암성으로 작용하였으나, 녹차의 항산화 주성분인 EGCG는 암 예방제로서 기능하지 못했다. DES (Diethylstilbestrol)의 발암 독성 평가 및 I3C (Indole-3-Carbinol)의 유효성을 검색하기 위하여 MMTV/c-Neu 형질 전환 생쥐에 각각 대조군, I3C 투여군, DES 투여군, EGCG 투여군, DES + EGCG 투여군, I3C + DES 투여군으로 나누어 현재 7주째 투여 중에 있다. 4) 신규 유방암 치료제의 작용기전 연구 · MMTV/c-Neu 형질 전환 생쥐 모델 신규 항암 후보 물질인 IN-2001의 항암 작용 메카니즘 연구에 형질 전환 동물 모델의 적용성을 연구하기 위하여, MMTV/c-Neu 형질 전환 생쥐에 IN-2001을 처치한 뒤, 암조직에서 세포주기 조절 인자들의 발현 변화를 측정한 결과, IN-2001은 $p21^{WAF1}$과 $p27^{KIP1}$ 단백질 발현을 증가시켰다. · MMTV/c-Neu/CYP1B1/TAK 형질 전환 생쥐 모델 MMTV/c-Neu/CYP1B1/TAK 형질 전환 생쥐 모델을 이용하여 IN-2001의 효과를 살펴본 결과, MMTV/c-Neu 형질 전환 생쥐 모델에서와 유사하게, 암조직에서 에스트로겐 수용체의 발현을 시간 의존적으로 증가시키는 것으로 나타났다. ③ 사람 유방암 세포주 신규 항암 후보 물질인 히스톤 탈아세틸화 효소 저해제의 작용 메카니즘을 알아보기 위해서 사람 유방암 세포주를 이용하여 IN-2001 및 기존의 히스톤 탈아세틸화 효소 저해제들의 세포주기 및 세포사멸 조절인자들의 발현에 미치는 영향을 비교해보았다. 그 결과, IN-2001을 비롯한 모든 히스톤 탈아세틸화 효소 저해제들은 유방암 세포주에서 $p21^{WAF1}$과 $p27^{KIP1}$ 단백질 발현을 증가시키고, Bax/Bcl-2 비율을 증가시켰다. 결론적으로 본 연구를 통해 개발된 사람 유방암 형질 전환 실험동물 모델은 기존의 2년 설치류 시험법을 대체할 수 있는 적절한 발암 독성 평가 모델로 사료된다.
Abstract▼
1) Establishment of MMTV/c-Nu/CYP1B1/TAK transgenic mice. As we did previously, we have generated MMTV/c-Neu/CYP1B1/TAK mice and confirmed the genotype by RT-PCR. 2) Monitoring tumorigenecity of DMBA using MMTV/c-Neu/CYP1B1/TAK transgenic mice. In order to examine if this animal model can b
1) Establishment of MMTV/c-Nu/CYP1B1/TAK transgenic mice. As we did previously, we have generated MMTV/c-Neu/CYP1B1/TAK mice and confirmed the genotype by RT-PCR. 2) Monitoring tumorigenecity of DMBA using MMTV/c-Neu/CYP1B1/TAK transgenic mice. In order to examine if this animal model can be used for testing chemical carcinogenecity, we tested DMBA. And the result showed that MMTV/c-Neu/CYP1B1/TAK transgenic mice developed less tumors than untreated control mice that were fed corn oil, possibly due to the metabolism of DMBA via CYP1B1. 3) Study of anticancer activity of new chemicals in MMTV/c-Neu and MMTV/c-Neu/CYP1B1/TAK transgenic mice. Novel inhibitor of ALK-5 (TGF-$\beta$1), IN-1130 showed anti-metastatic effect on breast tumor bearing MMTV/c-Neu/CYP1B1/TAK transgenic mice, and it inhibited lung metastasis. $E_{2}$ (17$\beta$-Estradiol) showed strong tumorigenic effect in MMTV/c-Neu/CYP1B1/TAK transgenic mice, due to the bioactivation of E2 to 3,4-dihydroxy estriol. when EGCG (EpiGallo Catechin Gallate) was examined if it acted as anti-tumorigenic agent in MMTV/c-Neu/CYP1B1/TAK transgenic mice and the result showed that EGCG did not inhibit tumor formation in MMTV/c-Neu/CYP1B1/TAK transgenic mice. Studies with DES (Diethylstibestrol) and I3C (Indole-3-carbionol) are still under investigation, we have been studying for 7 weeks. 4) Mecahnism of action of anti-cancer agent in MMTV/c-Neu transgenic mice. Previously, we have reported that novel HDAC inhibition. IN-2001 showed strong anti-cancer activity MMTV/c-Neu transgenic mice. Thus, we decided to examine the mechanism of action of IN-2001 on tumor bearing MMTV/c-Neu transgenic mice. The results showed that it increased the levels of $p21^{WAF1}$ and $p27^{KIP1}$ in breast tumors in MMTV/c-Neu transgenic mice. Also, it increased the level of estrogen receptor mRNA in MMTV/c-Neu/CYP1B1/TAK transgenic mice, with a time dependent manner. Furthermore, in human breast cancer cell line, IN-2001 in creased the level of $p21^{WAF1}$, $p27^{KIP1}$and the ratio of Bax/Bcl-2, eventually increased apoptosis of cancer cells. Based on these our results, we can conclude that MMTV/c-Neu and MMTV/c-Neu/CYP1B1/TAK transgenic mice is very useful animal model to study carcinogenesis as well as anti-cancer activity of chemicals.
목차 Contents
연구과제제안서(RFP) ...1
용역연구사업 연구결과보고서 ...2
표지 ...3
제출문 ...5
목차 ...6
I. 연구결과보고서 요약문 ...7
한글요약문...7
Summary ...8
II. 총괄연구개발과제 연구결과 ...9
제1장 총괄연구개발과제의 최종 연구개발 목표 ...10
1.1 총괄연구개발과제의 목표 ...10
1.2 총괄연구개발과제의 목표달성도 ...12
1.3 국내.외 기술개발 현황 ...15
제2장 총괄연구개발과제의 최종 연구개발 내용 및 방법 ...18
2.1 최종연구개발 내용 ...18
2.2 최종연구개발 방법 ...19
제3장 총괄연구개발과제의 최종 연구개발 결과 ...22
1. MMTV/c-Neu/CYP1B1/TAK 형질 전환 생쥐 생산 (3 세대) ...22
2. MMTV/c-Neu/CYP1B1/TAK 형질 전환 생쥐에서 발암의심 화학물질 투여에 의한 유방암 발생 검색 ...23
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