초록 ▼

1. 젤라틴 특이 -항체 측정
가. 항 젤라티 IgG 측정
일반적으로 혈청내 항 젤라틴 항제의 수준은 젤라틴 특이 면역반응을 지닌 사람이라 할지라도 대단히 낮다. 그러므로 감도를 높이려면 다량의 혈청을 사용하여야 한다. 본 연구에서는 10 및 30 ㎕의 시료를 검체 희석액에 희석하여 200㎕가 되게 만들고, 비특이 반응을 낮출 수 있는 검체 희석액을 제조하고자 하였으며, 발색기질을 사용하는 indirect ELISA 법에 의하여 항 젤라틴 IgG를 측정하고자 하였다.
나. 항 젤라틴 IgE 측정
혈액내 l

1. 젤라틴 특이 -항체 측정
가. 항 젤라티 IgG 측정
일반적으로 혈청내 항 젤라틴 항제의 수준은 젤라틴 특이 면역반응을 지닌 사람이라 할지라도 대단히 낮다. 그러므로 감도를 높이려면 다량의 혈청을 사용하여야 한다. 본 연구에서는 10 및 30 ㎕의 시료를 검체 희석액에 희석하여 200㎕가 되게 만들고, 비특이 반응을 낮출 수 있는 검체 희석액을 제조하고자 하였으며, 발색기질을 사용하는 indirect ELISA 법에 의하여 항 젤라틴 IgG를 측정하고자 하였다.
나. 항 젤라틴 IgE 측정
혈액내 lgE level은 IgG에 비하여 1/100,000 이하이다. 그러므로 일반적인 발색 기질을 사용한 ELISA 법으로는 항 젤라틴 항체를 효과적으로 측정할 수가 없다. 본연구에서는 감도가 매우높은 발광기질을 사용하는 indirect ELISA 법으로 항 젤라틴 IgE를 측정하였다.
다. Biotinylated 젤라틴을 이용한 항 젤라틴 IgE 측정법 개발
농도가 낮은 lgE가 젤라틴에 결합할 경우 IgG와 결합시 경쟁을 하여 감도가 낮아질 가능성이 많으므로, IgE를 capture하고 biotinylation된 젤라틴을 결합시켜, 항 젤라틴 IgE를 측정법을 개발하고자 하였가.
라. 단백질 칩을 이용한 항 젤라틴 항체 측정법 개발
본 측정법은 혈청이 30 ㎕ 이상으로 배우많이 소요된다. 그러므로 본 연구에서는 이를 해결하고자 소량의 시료로도 항 젤라틴 항체를 측정하고자, slide glass에서 형광면역 검사법을 사용하여 항 젤라틴 항체를 검사하는 측정법을 개발하고자 하였다.
2. 젤라틴을 마우스에 면역화
소 및 되지의 젤라틴을 Freund,s adjuvant를 면역보조제로 하여 마우스에 주사하고, 젤라틴 특이 항체 및 임파구를 제조하고자 하였다.

Abstract ▼

Gelatin containing vaccines occasionally induce allergic reactions including anaphylaxis, and anti -gelatin IgE has been detected in sera obtained from patients with systemic immediate-type reactions. Furthermore, all the patients sensitized by gelatin develop gelatin specific lymphocyte proliferati

Gelatin containing vaccines occasionally induce allergic reactions including anaphylaxis, and anti -gelatin IgE has been detected in sera obtained from patients with systemic immediate-type reactions. Furthermore, all the patients sensitized by gelatin develop gelatin specific lymphocyte proliferation activity. Even though the patients with systemic nonimmediate-type reactions do not produce any anti-gelatin IgE, some of them have identified to produce gelatin specific IgG. In this study we tried to setup a sensitive method to detect anti-gelatin antibodies in human sera. Since the levels of anti-gelatin antibodies are little in sera, large amount of sera should be used. Anti-gelatin IgG could be measured by an indirect ELISA using a colorimetric (OPD) substrate. However, anti -gelatin IgE could not be detected using the colorimetric substrate, therefore the chemiluminescent substrate was used. The Japanese reference serum (JR) obtained from a patient with gelatin allergy was used as a positive control. It found to contain high concentrations of both anti-gelatin IgG and IgE, indicating that our system is useful for detection of anti -gelatin antibodies. Of 26 antisera two patient sera, DS-3 and CS-6, also were also proved to have relatively higher concentration of IgG and IgE specific to gelatin. Anti -gelatin IgGs in 5 sera showed low affinities to gelatin, but anti-gelatin IgEs in those sera were found to have relatively higher affinities to gelatin. Two antibodies in two sera, DS-8 and CS-3, showed nonspecific binding patterns. Both wells with and without gelatin coating showed relatively high reactivity to both IgG and IgE in those sera. The other sera were found to contain little anti-gelatin IgGs and IgEs. Since there are very small amount IgE in sera. we tried to make a system for detection of anti-gelatin IgE. After capturing the human IgE using anti-human IgE mouse monoclonal antibody, biotinylated gelatins bound to the human IgE. However. no specific binding was found in all the samples tested including DS · :3. The gelatins on the glass slide were found to use for detecting anti- gelatin antibody in sera with high sensitivity.

목차 Contents

• 표지 ...1
• 용역연구개발사업최종보고서 ...3
• 제출문 ...5
• 국문요약문 ...6
• 영문요약문 ...9
• 목차 ...10
• 제1장 서론 ...11
• 제2장 국내.외 기술 개발 현황 ...17
• 제3장 연구개발 수행 내용 및 결과 ...18
• 제1절 실험 재료 및 방법 ...18
• 1. 실험동물 ...18
• 2. 항체 및 시약 ...18
• 3. 기타재료 ...18
• 4. 혈액내의 항 젤라틴 IgF 및 IgE 농도 측정 ...18
• 5. Biotinylated 젤라틴 제조 및 항 젤라틴 IgE측정에 응용 ...19
• 6. 단백질칩을 이용한 항 젤라틴 항체 측정법 개발 ...19
• 7. 항 젤라틴 항체 생산 ...20
• 제2절 결과 및 고찰 ...21
• 1. Indirect ELISA 법에 의한 항 젤라틴 항체 분석 ...21
• 2. 항 젤라틴 IgE를 검출하기 위한 IgE carture assay system 개발 ...32
• 3. 단백질 칩을 이용한 항 젤라틴 항체 측정 ...35
• 4. 항젤라틴 항체 및 젤라틴 특이 임파구 증식 측정을 위한 마우스에 젤라틴 면역화 ...37
• 5. 종합의견 ...37
• 제4장 연구개발목표의 달성도 및 기대효과 ...39
• 제5장 연구개발 결과의 활용계획 ...40
• 제6장 기타 중요 변경 사항 ...40
• 제7장 참고문헌 ...41