초록 ▼

본 연구는 1996년도부터 농림기술개발특정연구사업으로 “헛개나무로부터 간질환치료제 및 숙취해소제 개발”이란 제목으로 연구를 하여 다음과 같은 연구결과를 얻었다.사염화탄소에 의해 유도된 간독성에 대한 효능은 과경 열수추출분획(Hdfhw- l), 과경 메탄올추출분획 (hdfm- l)， 어린가지 메탄올추출분획 CHdbr- l)이 우수하게 나타났으며, 목부 메탄올추출분획(Hd-2WS)은 단백질합성 능력이 나타나지 않았고, Acetaminophen에 의한 간독성 유발에서도 목부메탄올추출분획들(Hd-2WS, Hd-2WI)의 단백질합성에 의한

본 연구는 1996년도부터 농림기술개발특정연구사업으로 “헛개나무로부터 간질환치료제 및 숙취해소제 개발”이란 제목으로 연구를 하여 다음과 같은 연구결과를 얻었다.사염화탄소에 의해 유도된 간독성에 대한 효능은 과경 열수추출분획(Hdfhw- l), 과경 메탄올추출분획 (hdfm- l)， 어린가지 메탄올추출분획 CHdbr- l)이 우수하게 나타났으며, 목부 메탄올추출분획(Hd-2WS)은 단백질합성 능력이 나타나지 않았고, Acetaminophen에 의한 간독성 유발에서도 목부메탄올추출분획들(Hd-2WS, Hd-2WI)의 단백질합성에 의한 간독성보호작용이 없는 것으로 밝혀졌다.l)- galactosamine/LPS 에 의 해 간독성 유발 했을때 과경 메 탄올추출분획 (Hdfm- l)과 어린가지메탄올추출분획(HdBr- l)에서 단백질합성능력이 증가하였다 사염화탄소에서 단백질합성능력이 있었던 과경 열수추출분획(Hdfhw- l)은 단백질합성 효능을 나타내지 않았다. 랫드에 D-galactosamine/LPS 를 처리하고 헛개나무 수피 메탄올추출물을 한번에 투여하는 것보다 12, -1, 0, 1, 2시간 여러번 투여하는게 GOT와 GPT를 유의적으로 감소 시키는 것으로 나타났다. 목부메탄올추출물을 GOT와 GPT 가 약간 감소하는 효과를 나타냈지만， 사염화탄소를 처리한 간독성에서는 GOT와 GPT 감소효과를 나타내지 않았다. Bromobenzene 에 의해 유도된 LDH 방출에 대한 헛개나무 각 부위별 분획들의 영향을 알아본 실험에서， 과병 열수추출 메탄올불용부(HDFHW-1) 와 과병 80% 메탄올추출물 메탄올불용부(HDFM- l)분획 브로모벤젠에 의한 간손상으로부터 보호기능의 활성이 우수한 것으로 나타났다.Bromobenzene 뿐만 아니라 사염화탄소와 D-galactosamine/LPS 에서도 효과를 나타냈던 HDFHW -1 Fl peak 가 간독성 해소물질로 사료되었다.헛개나무의 수피， 목부， 과경 추출물은 혈중알콜농도를 저하시켰으며， 과경의 메탄올추출물보디→는 열수추출불이 알콜분해효소 (Alcohol dehydrogenase) 의 활성을 높여 알콜을 분해하논 것으로 나타났다
목부 Hd-2WS분획이 혈중 alcohcl 농도를 저하시켰으나 간의 alcohol dehydrogenase 효소활성에는 영향이 없었으며, 헛개나무추출물 그 자체에도 alcohol성분을 분해하는 작용이 없음을 확인하였다.
목부 Hd-2WI 분획은 혈중알콜농도에 아무런 영향을 주지 않는 것으로 나타나 Hd-2WS 분획이 목부의 혈중알콜농도를 저하시키는 활성분획으로 판명되었다. 목부의 HD-2WS 분획의 peak는 주로 2 개로 나타났으며， MALLS 에 의해 절대분자 량을 측정한 결과 peak 1 은 분자량이 5，346 이고 peak 2는 분자량이 3 ，827로 나타났고，과경의 HDFHW-1 분획의 peak는 4 개로 나타났고， peak 1 의 분자량은 1,330,000, peak 2 의 분자량은 142,800, peak 3 의 분자량은 70,540, 그리 고 peak 4 의 분자량은 102,400 으로 나타났다. 헛개나무 간독성 해소 및 숙취해소 활성을 갖는 HDFHW-l 분획중 pe려〈의 크기가 가장 큰 peak 2의 순수화합물은 고분자성의 친수성이며 산분해에도 강한 분자량 114，500의 물에 잘 녹는 구조를 갖고 있는 polysaccharide polymer로 밝혀 졌다. 안전성 평가를 위하여 3 개월간의 아급성 독성 검사를 실시한 결과 별다른 독성을 나타내지 못했다.

Abstract ▼

Houenia dulcis var. koreana Nakai is a rare endemic plant groWll1g 111 Korea. It has long been believed to contain some substances may be effective on the treatment of hang-over. In the present study, I have collected the trees from various locations throughout the country to preserve the genetic re

Houenia dulcis var. koreana Nakai is a rare endemic plant groWll1g 111 Korea. It has long been believed to contain some substances may be effective on the treatment of hang-over. In the present study, I have collected the trees from various locations throughout the country to preserve the genetic resources, attempted to develop a mass propagation system for the species, and finally examined its effect on both the protection of liver and the reduction of blood alcohol level. The following results were obtained;

목차 Contents

• 표지 ...1
• 제출문 ...5
• 요약문 ...7
• SUMMARY ...13
• CONTENTS ...17
• 목차 ...19
• 제 1 장 서 론 ...27
• 제 2 장 유전자원 수집 보존과 재배법 개발분야 ...30
• 제 1 절 서 설 ...30
• 1. 임목의 유전변이 ...30
• 가. 형태적 특성 ...30
• 나. 동위효소 변이 ...31
• 다. RAPD-PCR 에 의한 DNA 밴드패턴 ...32
• 2. 임목의 번식 ...33
• 가. 종자에 의한 번 식 ...33
• 나. 영 양체에 의한 번식 ...34
• 제 2 절 재료 및 방법 ...35
• 1. 분포 및 표본목 선정 ...35
• 가. 분포지 조사 ...35
• 나. 분포지의 입지 환경 ...35
• 다. 헛개나무 표본목 선정 ...35
• 2 유전변이 조사 ...35
• 가. 개화특성 조사 ...35
• 나. 형태적 변이 ...38
• 1) 종실 변이 조사 ...38
• 2) 염형질 변이 조사 ...38
• 다. 동위효소 변이 ...38
• 라. RAPD-PCR에 의한 변이분석 ...42
• 1) 집단선정 및 시료채취 ...42
• 2) RAPD-PCR ...42
• 가) 헛개나무 잎조직의 DNA 분리 ...42
• 나) RAPD-PCR 수행 ...42
• 다) RAPD-PCR 조건의 확립 ...43
• 라) Printing screening ...43
• 3) 자료수집 ...44
• 4) 통계분석 ...45
• 가) 유전적 다양성 (Genetic Diversity) ...45
• 나) 집단간 유전적 분화와 유전적 거리의 추정 ...45
• 다) AMOVA(analysis of molecular variance) 분석 ...45
• 라) 유연관계 분석 ...46
• 3. 헛개나무 증식특성 구명 ...47
• 가 종자에 의한 증식 ...47
• 나. 삽목에 의한 번식 ...47
• 1) 발근촉진제 효과 ...47
• 2) 삽목 시기별 효과 ...48
• 3) 삽수채취 부위별 효과 ...48
• 4) 모수령별 효과 ...48
• 다. 조직배양에 의한 번식 ...48
• 4. 재배법 개발 ...49
• 제 3 절 결과 및 고찰 ...50
• 1. 분포 및 표본목 선정 ...50
• 가. 분포지 조사 ...50
• 나. 분포지의 입지 환경 ...50
• 다. 헛개나무 표본목 선정 ...51
• 2. 유전변이 조사 ...52
• 가. 개화특성 조사 ...52
• 나. 형태적 변이 ...57
• 1) 종설 변이 조사 ...57
• 2) 엽형질 변이 조사 ...58
• 다. 동위효소분석 ...59
• 1) 동위효소별 유전양식 ...59
• 가) Phosphoglucose isomerase (PGI) ...59
• 나) Glutamate dehydrogenase (GDH) ...59
• 다) Isocitric dehydrogenease (IDH) ...60
• 라) Glutalllilte oxaloacetate transminase (GOT) ...60
• 마) Leucine aminopeptidase (LAP) ...60
• 바) Malate dehydrogenease (MDH) ...60
• 사) 6-phosphogluconate dehydrogenease (6PG) ...61
• 아) Phosphoglucomutase (PGM) ...61
• 자) Shinkimate dehydrogenease(SKDH) ...61
• 차) Aconitase (ACO) ...61
• 라. RAPD-PCR ...61
• 1) 유전적 다양성과 유전적 분화 ...61
• 2) 유연관계분석 및 유전적 거리의 추정 ...64
• 3) AMOVA 분석 ...65
• 3. 증식법 개발 ...66
• 가. 종자에 의한 증식 방법 ...66
• 나. 삽목 증식법 개발 ...69
• 1) 발근촉진제 효과 ...69
• 2) 삼목 시기별 효과 ...69
• 3) 삽수채취 부위별 효과 ...70
• 4) 모수령간 발근력의 차이 ...71
• 다. 조직배양에 의한 번식 ...72
• 4. 재배법 개발 ...73
• 제 3 장 간기능 활성물질 구명...75
• 제 1 절 서 설 ...75
• 제 2 절 재 및 방법 ...77
• 1. 유용성분의 추출 및 정 제 ...77
• 가. 용매 별，농도별 효과적인 추출법 개발 ...77
• 나 효과적인 용매분획 및 정제 ...77
• 2. 헛개나무 각 부위별 추출 ...77
• 3 간독성활성물질의 분리 ...77
• 4. GPC에 의한 절대분자량 측정(HPSEC-MALLS-RI Analysis) ...77
• 5. 용융온도, 용융엔탈피 측정 ...80
• 6. 단백질 및 당량분석 ...80
• 7. 정제법 개발을 위한 TLC 조건 ...80
• 8. 고분자 획분의 물질구조 ...80
• 가 고분자 획분의 정제 ...80
• 나. 당쇄 결합의 확인 ...81
• 9. 분자량 측정 및 조성식 분석 ...81
• 가. 질량분석 ...81
• 나. 분자구조 분석 (NMR) ...82
• 1) 조성식 확인 ...82
• 2) 공명선 귀속 ...82
• 3) 분자구조 분석 ...82
• 제 3 절 결과 및 고찰 ...84
• 1 유용성분의 추출 및 정제 ...84
• 가. 용매별, 농도별 효과적인 추출법 개발 ...84
• 나. 효과적인 용매분획 및 정 제 ...84
• 2. 헛개나무 각 부위별 추출방법별 추출효율 ...86
• 3 간기능 활성 물질의 분리 ...88
• 4. GPC에 의한 절대분자량 측정 (HPSEC-MALLS-RI Analysis) ...99
• 5. 용융온도, 용융엔탈피 측정 ...99
• 6. 단백질, 아미노산 및 polyphenolgkafid 분석 ...106
• 7. IR 과 UV spectrophotometery에 의한 function group 예상 ...106
• 8. GC-MS를 이용한 당함량 분석 ...106
• 9. 정제법 개발을 위한 TLC조건 ...113
• 10. 활성분획 HDFHW-l의 물질구조 ...113
• 가 Gel filtration에 의한 간질환 활성물질 분리 ...113
• 나. GPC-MALLS에 의한 절대분자량 측정 ...118
• 다. FT-IR에 의한 작용기 분석 ...120
• 라. H-NMR 분석 ...120
• 마. 간질환 활성분획의 물질구조 ...120
• 11. 헛개나무 일년생 실생묘 지상부 추출물 물질구조 확인 ...124
• 가. 단일물질의 분리 순수 분리 정제 ...124
• 나. 질량분석기와 원소분석기와 이용한 분자량 측정 및 조성식 분석 ...124
• 다. NMR을 이용한 분자구조 분석 ...124
• 라. 공명선 귀속 및 구조 결정 ...127
• 1) 질량분석 ...127
• 2) 원소분석 ...127
• 3) NMR Assignment와 예상구조 ...127
• 제 4 장 간(肝)질환 및 숙취해소 약리 효능 및 안전성 평가...140
• 제 1 절. 서 설 ...140
• 1. 간독성 해소작용 ...140
• 2. 숙취 해소작용 ...141
• 제 2 절 재료 및 방법 ...144
• 1. 간보호효과 구명 ...144
• 가. 실험 동물 ...144
• 나. 간세포 배양 ...144
• 다. Liver slice culture를 이용한 in vitro 간독성 실험 ...144
• 2. 사염 화탄소에 의한 간독성에 대한 효과 ...145
• 가. 사염 화탄소 및 시료의 처 리 ...145
• 나. 혈액내 glitamate-oxaloacetate transminase( GOT) 및 glutamatrpyruvatetransaminase(GPT) 활성 도 측정 ...145
• 다. 간세포에서 total cytochrome P-450 및 microsomal monooxygenase활성 도 측정 ...146
• 라. 간세포에서 lactic dehydrogenase(LDH)의 측정 ...146
• 마. 간세포에서 RNA와 protein의 합성량 측정 ...147
• 3. D-galactosamine/LPS에 의한 간독성에 대한 효과 ...147
• 가. D-galactosamine 및 시료의 처리 ...147
• 나. 간독성 치료 및 예방효과 실험 ...147
• 4. Bromobenzene에 의한 간독성에 대한 효과 ...148
• 5. 혈중알콜농도저하에 대한 효과 ...148
• 가. 혈중알콜농도의 측정 ...148
• 1) 효소학적 방법 ...148
• 2) Gas Chromatography에 의한 측정 ...149
• 3) Alcohol dehydrogenase 활성도 측정...149
• 6. 아급성 독성시험을 퉁한 안전성 평가 ...149
• 가. 실험동물 ...150
• 나. 시약 및 조제 ...150
• 다. 일반상태 관찰 ...150
• 라. 체중, 사료섭취량 및 식수섭취량 측정 ...150
• 마. 혈액학적 검사 및 혈청 생화학적 검사 ...151
• 바. 뇨검사 ...151
• 사. 장기 중량 측정 ...151
• 아. 병리학적 검사 ...151
• 자. 통계처리 ...152
• 제 3 절 결과 및 고찰 ...153
• 1. 사염 화탄소에 의해 유도된 간독성에 대한 효능 ...153
• 2. D-galactosamine/LPS에 의해 유도된 간독성에 대한 효능 ...161
• 3. Bromobenzene에 의 유도된 간독성에 대한 효능 ...173
• 4. 헛개나무의 혈중알콜농도저하에 대한 영향 ...174
• 5. 아급성 독성시험을 통한 안전성 평가 ...195
• 가. 일반상태 관찰 ...195
• 나. 체중, 사료섭취량 및 식수섭취량 변화 ...195
• 다. 혈액학적 검사 및 혈청 생화학적 검사 ...199
• 라. 뇨 검사 ...199
• 마. 장기중량 ...200
• 바. 병리학적 검사 ...200
• 1) 육안적 소견 ...200
• 2) 병리조직학적 소견 ...200
• 參考文獻...205
• 부록 1. Operon OPS, OPV, OPW primer set의 sequence ...215
• 부록 2. Isozyme band patterns ampong populations ...216