보고서 정보
주관연구기관 |
국립암센터 National Cancer Center |
연구책임자 |
박종배
|
참여연구자 |
김종헌
,
김연재
,
최은영
|
보고서유형 | 최종보고서 |
발행국가 | 대한민국 |
언어 |
한국어
|
발행년월 | 2010-12 |
과제시작연도 |
2010 |
주관부처 |
보건복지가족부 |
과제관리전문기관 |
국립암센터 National Cancer Center |
등록번호 |
TRKO201100007026 |
과제고유번호 |
1355061632 |
사업명 |
국립암연구소운영 |
DB 구축일자 |
2015-01-08
|
키워드 |
종양마이크로RNA.전사후조절.PTEN.OncomiR.Post-transcriptional control.
|
초록
▼
◆ 연구목표
<최종목표>
대표적인 종양억제 유전자인 PTEN에 의한 종양 마이크로RNA 조절기전 규명 및 암화과정에서의 역할 규명
<당해연도목표>
동정된 PTEN Interactome과 마이크로RNA processing 과정에서의 관련성 규명 및 PTEN에 의한 마이크로RNA의 정확한 조절기전 규명
◆ 연구내용 및 방법
1. 뇌신경교종 환자에서 종양 miR-21의 발현이 전사후 단계에서 조절됨.
-qRT-PCR 기법을 이용하여 환자군에서 primary, precursor, matu
◆ 연구목표
<최종목표>
대표적인 종양억제 유전자인 PTEN에 의한 종양 마이크로RNA 조절기전 규명 및 암화과정에서의 역할 규명
<당해연도목표>
동정된 PTEN Interactome과 마이크로RNA processing 과정에서의 관련성 규명 및 PTEN에 의한 마이크로RNA의 정확한 조절기전 규명
◆ 연구내용 및 방법
1. 뇌신경교종 환자에서 종양 miR-21의 발현이 전사후 단계에서 조절됨.
-qRT-PCR 기법을 이용하여 환자군에서 primary, precursor, mature 형태의 종양 miR-21의 발현을 조사, 성숙한 형태의 종양 miR-21의 발현이 전사단계의 primary 형태에 비해 증가되어있는 것을 관찰.
2. 암미세환경 변화에 의해 발현되는 종양 마이크로RNA의 발현이 PTEN에 의해 전사후 조절됨.
- 뇌신경교종에서의 대표적인 종양 마이크로RNA인 miR-21의 발현이 저산소상태에서 증가함으로부터 다른 미세 환경 변화에 따른 발현 조절 및 PTEN 의존성 확인.
3. In vitro 마이크로RNA processing assay을 통한 PTEN의 마이크로RNA processing 단계에서의 역할 규명
- 마이크로RNA의 processing 과정을 in vitro 상에서 모방할 수 있는 방법을 이용 뇌신경교종에서 PTEN의 소실과 마이크로RNA의 가공과의 관련성 검증.
- PTEN이 소실되어있는 뇌신경교종 세포주인 U373-MG의 경우 종양 마이크로RNA의 processing이 PTEN이 야생형으로 존재하는 LN229에 비해 가속화되고 증대되어 있음을 확인.
4. Tandem affinity purification 방법을 이용한 PTEN의 새로운 마이크로RNA processing 관련 Interactome의 분리동정
- PTEN의 특이적 전사 후 조절 Interactome (Ago2, RNH1, hnRNPL, NOB1, ARIP4, DDX5, DDX18, DDX23, DUB3)을 분리동정하였으며 종양 마이크로RNA processing의 관련가능성을 탐색.
5. 기존의 마이크로RNA processing 기구의 주요 분자들과 PTEN의 연관성 검증
- Drosha, Dicer, Ago2 등의 기존에 마이크로RNA processing에 관여하는 분자들과 PTEN과의 결합을 검증.
6. PTEN의 돌연변이체를 확립을 통한 PTEN의 마이크로RNA processing 단계에서 역할 규명
- PTEN의 효소활성, 세포 내 위치 돌연변이체 제작하고 lenti-virus를 통해 뇌신경교종 세포주에서 과발현시켜 PTEN의 어떠한 기능이 마이크로RNA의 processing에 영향을 미치는지 조사.
◆ 연구성과
-정량적 성과
1) 총연구기간내 목표 연구성과로 기 제출한 값
-정성적 성과
1. PTEN Interactome과 PTEN에 의한 마이크로RNA processing의 정확한 조절기전 규명
2. 암의 proliferation, angiogenesis, invasion, metastasis 등에 있어 PTEN에 의한 마이크로RNA 조절의 역할 규명
Abstract
▼
MicroRNAs are short non-coding RNA molecules that play important roles in almost all kinds of cancer where they modulate key processes during tumorigenesis such as metastasis, apoptosis, proliferation, or angiogenesis. Multiple links between microRNA biogenesis and cancer highlight its significance
MicroRNAs are short non-coding RNA molecules that play important roles in almost all kinds of cancer where they modulate key processes during tumorigenesis such as metastasis, apoptosis, proliferation, or angiogenesis. Multiple links between microRNA biogenesis and cancer highlight its significance for tumor diseases. Especially, post-transcriptional regulation of microRNA processing has been observed as major regulatory event of its biognenesis during tumor progression However, mechanisms of microRNA processing are only beginning to emerge. Here, we demonstrated the microRNA-processing pathway can be regulated by PTEN in a post-transcriptional regulation.
To address the relationship between PTEN and microRNA processing, we compared expression level of microRNAs in glioma cell lines with or without PTEN mutation. Interestingly, miR-21, one of the most well-known oncoMIR, was highly up-regulated by PTEN mutation under hypoxic environment. The regulation of miR-21 expression was not affected by actinomycin D treatment, a blocker of mRNA transcription, and PTEN-mutated cancer cell extracts increased precursor and mature form of miR-21, which further support regulation of microRNA-processing by PTEN. Moreover, the interaction of PTEN with other microprocessors of microRNA such as Drosha, Dicer, and Ago was observed by co-immunoprecipitation assay. Furthermore, we also identified other RNA processing molecules such as DDX family proteins, hnRNPs, and RNH1 by tandemn affinity purification. These results suggest the possibility of microRNA processing by PTEN and implicates clinical importance of microRNA processing in cancer progression.
목차 Contents
- 기관고유연구사업 결과 보고 ...1
- 표지 ...2
- 제출문 ...4
- 목 차 ...5
- 요약문 ...6
- Project Summary ...8
- 연구결과 ...9
- 최종목표 ...9
- 기관고유연구사업 선행 연구결과 및 성과 ...9
- 3. 연구결과 고찰 및 결론 ...16
- 4. 연구성과 및 목표달성도 ...17
- 5. 연구결과의 활용계획 ...20
- 6. 참고문헌 ...20
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