초록 ▼

1. 사람 G-CSF 유전자 cloning 및 최적 발현 vector의 구축
가. hG-CSF cDNA 및 genomic DNA의 cloning
나. 유선특이발현 promotor의 cloning 및 검사
다. 조직특이발현 강화 또는 promotor 활성강화를 위한 enhancer 영역의 cloning 및 검사
라. 외래유전자의 삽입효율증진을 위한 반복배열 및 특이배열의 cloning 및 검사
마. ${\beta}$-casein promotor를 이용한 최적발현 vector 제작 및 검사

1. 사람 G-CSF 유전자 cloning 및 최적 발현 vector의 구축
가. hG-CSF cDNA 및 genomic DNA의 cloning
나. 유선특이발현 promotor의 cloning 및 검사
다. 조직특이발현 강화 또는 promotor 활성강화를 위한 enhancer 영역의 cloning 및 검사
라. 외래유전자의 삽입효율증진을 위한 반복배열 및 특이배열의 cloning 및 검사
마. ${\beta}$-casein promotor를 이용한 최적발현 vector 제작 및 검사
2. 최적발현 vector를 이용한 형질전환 생쥐 및 돼지의 생산
가. 형질전환 생쥐의 개발
나. 돼지 복제수정란의 최적의 배양조건 확립
다. 형질전환 난자 생산법 개발
라. 형질전환난자의 이식과 산자생산
3. 고효율 G-CSF 생산을 위한 mutants작성 및 유즙분비 G-CSF의 분리·정제기술의 개발
가. 고효율 hG-CSF 생산을 위한 mutants 작성
(1) hG-CSF 아미노산잔기의 치환
(2) hG-CSF fusion protein의 작성
(3) GST-fusion vector의 작성 및 E. coli에서의 발현과 정제
(4) 분리정제된 hG-CSF의 stability 및 생리활성의 비교
나. 유즙분비 hG-CSF의 분리·정제
(1) hG-CSF와 기존 상품화된 hG-CSF와의 특성비교
(2) 돼지 유즙에서의 hG-CSF 대량 분리·정제법의 확립

Abstract ▼

1. Cloning of hunam G-CSF gene and construction of optimal expression vector.
a. Cloning of hG-CSF cDNA and genomic DNA.
b. Analysis and cloning of mammary gland specific expression promotor.
c. Analysis and cloning of enhancer to improve promotor activity and tissue specificity.
d. Anal

1. Cloning of hunam G-CSF gene and construction of optimal expression vector.
a. Cloning of hG-CSF cDNA and genomic DNA.
b. Analysis and cloning of mammary gland specific expression promotor.
c. Analysis and cloning of enhancer to improve promotor activity and tissue specificity.
d. Analysis and cloning of repeat and/or specific sequence to improve integration rate of foreign gene into cell.
e. Analysis and construct of optimal tissue specific vector using 13-casein promotor.
2. Production of transgenic mice and pigs using tissue specific vector.
a. Development of transgenic mice.
b. Establishment of optimal culture system of transgenic porcine oocytes,
c. Development of transgenic oocyte production method.
d. Transgenic embryo transfer and production of piglets.
3. Analysis of mutants and development of isolation and purification of G-CSF from milk.
a. Analysis of mutants to produce high efficient hG-CSF
(1) Substitution of hG-CSF amino acid residue.
(2) Development of hG-CSF fusion protein
(3) Development of GST-fusion vector and analysis of expression and purification on E. coli.
(4) Comparative analysis of stability and physiological activity of purified hG-CSF.
b. Isolation and purification of hG-CSF produced from milk.
(1) Comparative analysis of hG-CSF and commercial hG-CSF.
(2) Establishment of large scaled isolation and purification method from pig milk.

목차 Contents

• 표지...1
• 제출문...3
• 요약문...5
• SUMMARY...9
• 목차...15
• 제 1 장 서 론...17
• 제 1절. 연구개발의 목적...17
• 제 2절. 연구개발의 필요성...17
• 제 3절. 연구개발의 범위...21
• 제 2 장 국내외 기술개발 현황...22
• 제 1절. 형질전환동물 국내외 기술개발 동향...22
• 제 2절. G-CSF 국내외 기술개발 동향...24
• 제 3 장 연구개발수행 내용 및 결과...26
• 제 1 절. 사람 G-CSF 유전자 cloning 및 최적 발현 vector의 구축...26
• 1. hG-CSF cDNA 및 genomic DNA의 cloning...26
• 2. 유선특이발현 promotor의 최적 발현 cloning 및 검사...29
• 3. 조직특이발현 강화 또는 promotor 활성강화를 위한 enhancer 영역의 cloning 및 검사...30
• 제 2절. 최적발현 vector를 이용한 형질전환 생쥐 및 돼지의 생산...32
• 1. 형질전환 생쥐의 개발...32
• 2. 돼지 복제수정란의 최적의 배양조건 확립...34
• 3. 형질전환 난자 생산법 개발...44
• 4. 새로운 형질전환 난자 생산법 개발...52
• 5. 형질전환 돼지의 개발...54
• 제 3절. 고효율 G-CSF 생산을 위한 mutants 작성 및 유즙분비 G-CSF의 분리ㆍ정제기술 개발...56
• 1. 고효율 hG-CSF 생산을 위한 mutants 작성...56
• 2. 유즙분비 hG-CSF의 분리 및 정제...64
• 제 4장 연구개발목표 달성도 및 대외기여도...75
• 제 1절. 연구개발목표 달성도...75
• 제 2절. 관련분야 대외기여도...76
• 제 5 장 연구개발결과의 활용계획...78
• 제 6 장 기타 중요 변동사항...79
• 제 7 장 참고문헌...80