초록 ▼

1 ZFAND2A가 26S 프로테아좀과 ATP가 없는 조건에서 상호작용하는 것을 확인하였고 첫 번째 AN1 도메인인 상호작요에 중요하것을 규명하였고 ZFAND2B가 ER stress에 의해 발현이 증가하고 VCP와 결합하여 ERAD pathway를 관여하는것을 규명함
2 프로테아좀을 분리 정제가 용이하게 FLAG, 6HIS을 tagging한 형질전환 마우스를 구축하였고 이를 이용하여 상호작용 단백질을 규명하였고 면역특이적 및 정소특이적인 프로테아좀을 질량분석기를 이용한 상대정량법으로 규명함
3 ER-stress에 의한 V

1 ZFAND2A가 26S 프로테아좀과 ATP가 없는 조건에서 상호작용하는 것을 확인하였고 첫 번째 AN1 도메인인 상호작요에 중요하것을 규명하였고 ZFAND2B가 ER stress에 의해 발현이 증가하고 VCP와 결합하여 ERAD pathway를 관여하는것을 규명함
2 프로테아좀을 분리 정제가 용이하게 FLAG, 6HIS을 tagging한 형질전환 마우스를 구축하였고 이를 이용하여 상호작용 단백질을 규명하였고 면역특이적 및 정소특이적인 프로테아좀을 질량분석기를 이용한 상대정량법으로 규명함
3 ER-stress에 의한 VCP와 상호작용 하는 단백질을 규명하고 ZFAND famaily 단백질의 역할 규명
4 E2-25K효소는 다른 E2와 차별화되는 K48-linked polyubiquitination, self-ubiquitination, cyclized ubiquitination 등의 활성을 지니고 있음을 규명함E2-25K의 UBA domain은 acceptor Ub의 recruit를 촉진하나 UBC domain만으로도 ubiquitination활성을 지니고 있음을 규명함
5 E2-25K의 active site cysteine에 연결된 ubiquitin과 ubiquitination kinetics을 분석한 결과로부터 기존의 sequential ubiquitination뿐 아니라 en block transfer와 simultaneous ubiquitination 가능성을 발견함
6 Prsx가 cytokine에 의해 NF-kB pathway에 의해 발현이 증가되고 증가한 Prsx는 proteasoem assembly를 방해하여 proteasome 활성을 억제
7 Prsx knockdown시 이러한 signal이 차단되며 반대로 transgenic mouse 에서는 proteasome 활성을 억 제함을 발견. Proteasome 조절하는 새로운 pathway 발견

Abstract ▼

1. We have characterized ZFAND family proteins and have found that ZFAND2a specifically interacts with the proteasome whereas ZFAND2b interacts with VCP/p97.
2. We have established mouse lines which express a FLAG-tagged proteasome subunit, have purified 26S proteasome by a single-step affinity p

1. We have characterized ZFAND family proteins and have found that ZFAND2a specifically interacts with the proteasome whereas ZFAND2b interacts with VCP/p97.
2. We have established mouse lines which express a FLAG-tagged proteasome subunit, have purified 26S proteasome by a single-step affinity purification procedure, and have analyzed its subunit composition, post-translational modification and interacting proteins by LC-MS/MS.
3. We have analyzed VCP-interacting proteins and have characterized ZFAND family proteins.
4. E2-25K was capable of synthesizing K48-linked unanchored polyubiquitin not only by one-by-one but also simultaneously in addition to self-ubiquitination and cyclization.
5. Catalytic steps for the synthesis of unanchored polyubiquitin chain by E2-25K could be divided into receiving activated donor Ub from E1, recruitment of acceptor Ub, and conjugation of donor and acceptor Ubs. UBA domain facilitated recruitment of acceptor ubiquitin but UBC alone catalyze all three steps withou UBA.
6. We detected various length of polyubiquitin was linked to active site cysteine of E2-25K through thioester bond, suggesting en bloc transfer ubiquitination in addition to the conventional sequential ubiquitination.
7. Prsx was induced by cytokine to inhibit proteasoem assembly through NF-kB pathway.
8. Prsx knockdown blocks cytokine-mediated proteasome inhibition, whereas tissues of transgenic mouse over-expressing Prsx shows enhanced proteasome activity, providing a new pathway implicated in cytokine-mediated proteasome regulation.

목차 Contents

• 제출문 ... 1
• 보고서 요약서 ... 2
• 요약문 ... 3
• SUMMARY ... 7
• CONTENTS ... 8
• 목차 ... 9
• 제 1 장 연구개발과제의 개요 ... 10
• 1. 연구 개발의 목적 ... 10
• 2. 연구 개발의 필요성 ... 10
• 3. 연구개발의 범위 ... 13
• 제 2 장 국내외 기술개발 현황 ... 14
• 1. 프로테아좀의 post-translatioal modification 연구 ... 14
• 2. 프로테아좀의 shuttle factor에 관한 연구 ... 14
• 3. E2-25K 효소에 관한 연구 ... 15
• 4. functioal screening을 이용한 유비퀴틴-프로테아좀 시스템의 조절단백질 연구 ... 17
• 제 3 장 연구개발수행 내용 및 결과 ... 18
• 1. 연구범위 및 연구수행방법 ... 18
• 2. 연구내용 및 결과 ... 25
• 제 4 장 목표달성도 및 관련분야에의 기여도 ... 89
• 제 5 장 연구개발결과의 활용계획 ... 90
• 제 6 장 연구개발과정에서 수집한 해외과학기술정보 ... 91
• 제 7 장 참고문헌 ... 92