초록 ▼

- 본 연구의 목표는 현재 국내, 외의 아데노바이러스를 이용한 임상사례가 증가하고 있는 시점에서, 안전성 및 유효성을 향상시키기 위해서 인체 내의 약동력학(PK)연구를 위한 임상샘플에서의 아데노바이러스의 정량법 및 면역원성 연구에 대한 시험법의 개발이 매우 시급한 실정이므로, 이를 위하여 인체 혈액으로부터의 아데노바이러스 정량적 검출법 및 중화항체의 정량적, 정성적 검출법을 개발하고 이에 따른 표준 지침서를 확립하고자 하였다. 그에 따른 연구 내용으로는 아데노바이러스를 정량적으로 검출하기 위한 Q-PCR 시험법을 개발하고, 확립된

- 본 연구의 목표는 현재 국내, 외의 아데노바이러스를 이용한 임상사례가 증가하고 있는 시점에서, 안전성 및 유효성을 향상시키기 위해서 인체 내의 약동력학(PK)연구를 위한 임상샘플에서의 아데노바이러스의 정량법 및 면역원성 연구에 대한 시험법의 개발이 매우 시급한 실정이므로, 이를 위하여 인체 혈액으로부터의 아데노바이러스 정량적 검출법 및 중화항체의 정량적, 정성적 검출법을 개발하고 이에 따른 표준 지침서를 확립하고자 하였다. 그에 따른 연구 내용으로는 아데노바이러스를 정량적으로 검출하기 위한 Q-PCR 시험법을 개발하고, 확립된 Q-PCR 시험법에 가장 적절한 프라이머 set을 선정함. 또한 혈액 내 존재하는 아데노바이러스와 중화항체의 특성을 고려하여, 특이성 뿐 아니라 민감성이 가장 높은 시험법을 선별하였다. 또한, 아데노바이러스 투여 후 환자의 생검 조직내 종양 특이적 T 림프구의 침윤 정도를 확인하고, TNF-α, IFN-γ, IL-6등의 싸이토카인의 발현량을 ELISA와 CBA를 통해 확인하여 최적의 면역원성 확인법을 확립하고, 이를 바탕으로 아데노바이러스의 투여에 따른 인체 내 면역원성을 검증하였다. 이러한 결과들을 바탕으로 임상시험을 위한 복제가능 아데노바이러스의 PK 연구에 필요한 시험법을 구축하여, 복제가능 아데노바이러스를 이용한 유전자치료제의 KFDA 허가 신청자료 작성을 위한 가이드라인으로 활용될 수 있다. 또한, 국내 여러 임상 연구팀에 활용 가능한 기준시험법을 제시 할 수 있다. 나아가, 국내실험기준의 향상으로 인한 국제경쟁력 및 전문성강화에 기여 할 것으로 예상되며, 관련 인력을 양성하고 안전관리를 기반으로 한 미래 기술 확립에 이바지할 수 있다고 사료된다.

Abstract ▼

- As the number of clinical trials using adenovirus has been increased in Korea, it is necessary to develop the analysis and validation methods like quantification of adenovirus dose, adenovirus neutralizing antibody, and immune response to adenovirus for PK and PD studies. To achieve this end, we w

- As the number of clinical trials using adenovirus has been increased in Korea, it is necessary to develop the analysis and validation methods like quantification of adenovirus dose, adenovirus neutralizing antibody, and immune response to adenovirus for PK and PD studies. To achieve this end, we would like to establish standard experimental methods for detecting adenovirus, neutralizing antibodies, and cytokines in blood samples, and evaluating intratumoral infiltration of CD4+ or CD8+ T cells. We established Q-PCR method for quantitative analysis of adenovirus in human blood and selected optimal primer pair via analysis and validation of linearity, sensitivity, accuracy, and reproducibility. We also established standard method to analyze and quantitatively determine the level of neutralizing antibodies against adenovirus in human serum and verified by conducting the experiments for linearity, sensitivity, accuracy, and reproducibility. In addition, to analyze immune response to adenovirus, we established standard experimental methods for assessing intratumoral infiltration of CD4+ or CD8+ T cells and the profile of cytokines in patient treated with intratumoral injection of oncolytic adenovirus. The results of this study can be used to set up the standard methods which are required in many clinical studies using adenovirus to determine PK, PD, and levels of neutralizying antibodies against adenovirus. These results can be also used as a guideline needed for IND application to KFDA permission for gene therapy clinical trials using oncolytic adenovirus. Moreover, the improved standard quantitative methods for clinical samples from clinical trials are expected to transform Korea into a more competitive and specialized country in medical research, contributing to the development of future technologies based on the development of experts in the field and safety supervision.

목차 Contents

• 표지 ... 1
• 제출문 ... 3
• 목차 ... 4
• I. 총괄연구개발과제 요약문 ... 6
• 1. 국문요약문 ... 6
• 2. 영문요약문 ... 8
• II. 총괄연구개발과제 연구결과 ... 10
• 제1장 총괄연구개발과제의 목적 및 필요성 ... 10
• 제2장 총괄연구개발과제의 내용 및 방법 ... 17
• 제3장 총괄연구개발과제의 최종결과 및 고찰 ... 22
• 제4장 총괄연구개발과제의 연구성과 ... 50
• 제5장 총괄주요연구 변경사항 ... 53
• 제6장 총괄참고문헌 ... 54
• 제7장 총괄첨부서류 ... 55