초록 ▼

ｏ 제1세부 과제명: Reverse genetics system을 이용한 고증식성 바이러스 제작기술개발(1,2년차)
- Reverse genetics system을 이용하여 고증식성 균주를 모체로 하고 야외주의 외부항원단백질을 발현하는 3주의 재조합 H9N2 바이러스 strain(Ck/310/01 CE3 및 CE20의 HA, NA와 Ck/Q30/04 HA, NA 함유)을 제작하였고, 제작된 3종의 재조합 바이러스를 이용하여 각각의 면역원성을 조사한 결과 각기 고증식성의 특성을 보유하면서 면역원성을 보였다.
- 또한 구축된

ｏ 제1세부 과제명: Reverse genetics system을 이용한 고증식성 바이러스 제작기술개발(1,2년차)
- Reverse genetics system을 이용하여 고증식성 균주를 모체로 하고 야외주의 외부항원단백질을 발현하는 3주의 재조합 H9N2 바이러스 strain(Ck/310/01 CE3 및 CE20의 HA, NA와 Ck/Q30/04 HA, NA 함유)을 제작하였고, 제작된 3종의 재조합 바이러스를 이용하여 각각의 면역원성을 조사한 결과 각기 고증식성의 특성을 보유하면서 면역원성을 보였다.
- 또한 구축된 Reverse genetic system을 이용하여 NA 감별용 DIVA 백신 후보주를 제작하였으며, NA 감별용 DIVA 백신주는 유행주의 H9 단백을 발현하면서 야외주와 감별 할 수 있는 N8 단백질을 발현하도록 제작하였다.
- 제작된 DIVA 백신 후보주는 야외주에 대해 방어효과 (맹장편도에서의 분리율: 대조군에 비해 87.5% 감소)가 있는 것으로 나타났다
ｏ 제2세부과제명: Revers genetics system을 이용한 병원성/증식성에 관한 연구(2년차)
:조류인플루엔자의 병원성/증식성 연구에 활용 가능한 Reverse genetics system 구축
- 병원성 증강요인 또는 바이러스의 증식성 변화에 관한 연구를 위해 조류 유래의 저증식성 바이러스 및 고증식성 바이러스의 유전자를 이용하여 Back-bone 구축하였다.
• 조류유래의 저증식성 back bone으로 Ck/Kor/310/01(H9N2, CE3)주의 모든 유전자에 대해 plasmid 구축하였다.
• 조류유래의 고증식성 back bone으로 Ck/Kor/310/01(H9N2, CE20)주의 8개의 모든 유전자에 대해 plasmid 구축하였다.
- 구축된 reverse genetic system을 이용하여, 증식성에 영향을 미치는 HA 및 NA유전자의 조합을 통해 증식성 관련 요인을 분석한 결과, 저증식성 특성을 보이는 01310 CE3에서 수정란 계대를 통해 고증식성의 특성을 보이는 CE20으로의 변화는 HA와 NA 유전적인 변화 모두 관련이 있으나, HA 유전자가 더 상관성이 높은 것으로 나타났다.

Abstract ▼

The prevalence and continuous evolution of H9N2 avian influenza viruses in poultry have necessitated the use of vaccines in veterinary medicine. Because of the inadequate growth properties of some strains, additional steps are needed for producing vaccine seed virus. In this study, we generated thre

The prevalence and continuous evolution of H9N2 avian influenza viruses in poultry have necessitated the use of vaccines in veterinary medicine. Because of the inadequate growth properties of some strains, additional steps are needed for producing vaccine seed virus. In this study, we generated three H9N2/PR8 reassortant viruses using a total cDNA plasmid-transfection system, as an alternative strategy for developing an avian influenza vaccine for animals. We investigated the vaccine potency of the reassortant viruses compared with the existing vaccine strain which was adapted by the 20th serial passages in embryonated eggs with A/Ck/Kor/01310/01 (H9N2). The H9N2/PR8 reassortant viruses, containing the internal genes of the high-yielding PR8 strain and the surface gene of the A/CK/Kor/01310/2001 strain, could be propagated in eggs to the same extent as existing vaccine strain without additional processing. Similar to vaccine strain, the H9N2/PR8 reassortant viruses induced hemagglutination-inhibiting antibodies in chickens and prevented vrus shedding and replication in multiple organs in response to homologous infection. However, the continuing evolution and increasing biologic diversity of H9N2 influenza in Korea, the vaccine provided only partial protection against currently isolates. Taken together, our results suggest that the H9N2/PR8 reassortant virus can be used as a seed virus for avian influenza vaccines in poultry farm. Considering the constant genetic changes in H9 strains isolated in Korea, this reverse genetic system may offer a prompt and simple way to change the vaccine seed virus and mitigate the impact of unexpected influenza outbreaks.

We generated the H9N2 reassortant viruses wholly derived from avian influenza using a total cDNA plasmid-transfection system. All genes of the low-yield influenza virus A/Ck/Kor/01310/2001(H9N2) CE3 (01310CE3) and it' s egg adapted high-yielding H9N2 virus by the 20th serial passages in embryonated eggs, A/Ck/Kor/01310/2001(H9N2) CE20 (01310CE20) were amplified by RT/PCR technique.
Eight gene expressing plasmids were constructed, and the recombinant viruses rg01310CE3 and rg01310CE20 were generated by cell transfection. We investigated the virus potency of the reassortant viruses compared with original viruses, 01310CE3 and 01310CE20. The H9N2 reassortant viruses could be propagated in eggs to the same extent as their wild type viruses, 01310 CE3 and 01310CE20.
To estimate the influence on virus replication of two surface glycoproteins, haemagglutinin (HA) and neuraminidase (NA), we generated reassortant viruses with various combination. This results show that HA rather than NA gene is more important in high-yielding influenza viruses in 01310 strain. And also, these results demonstrate the usefulness of a reverse genetics system for rapid generation of avian origin reassortant AI viruses that allows utilization of the avian original reassortant vaccine and utilization to study influenza pathogenesis and so on..

목차 Contents

• 연구과제 최종결과보고서 Final Report (FR) ... 1
• 연구과제 최종결과보고서 ... 2
• Ⅰ. 연구배경 및 목표 ... 3
• 1. 연구배경 ... 3
• 2. 연구최종목표 ... 5
• 3. 연차별 연구개발 목표 및 내용 ... 5
• Ⅱ. 연구방법 및 수행전략 ... 6
• 1. 재 료 ... 6
• 2. 연구전략 및 방법 ... 6
• Ⅲ. 연구결과 ... 9
• 가. 제1세부과제명: Reverse genetics system을 이용한 고증식성 바이러스 제작기술 개발 ... 9
• 나. 제2세부과제명: Reverse genetics system을 이용한 병원성/증식성에 관한 연구 ... 18
• Ⅳ. 연구결과요약 ... 21
• Ⅴ. 고 찰 ... 22
• Ⅵ. 연구결과 활용실적 및 계획 ... 23
• Ⅶ. 주요연구과제 변경사항 ... 23
• Ⅷ. 참고문헌 ... 23
• Ⅹ. 영문초록 ... 25