보고서 정보
주관연구기관 |
대한적십자사 혈액수혈연구원 Korea Red Cross |
연구책임자 |
오덕자
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보고서유형 | 최종보고서 |
발행국가 | 대한민국 |
언어 |
한국어
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발행년월 | 2008-10 |
주관부처 |
보건복지부 |
사업 관리 기관 |
질병관리본부 Korea Center for Diease Control and Prevention |
등록번호 |
TRKO201300000114 |
DB 구축일자 |
2013-04-18
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키워드 |
헌혈자 보관검체.보존제도.보관검체 보관방법.Blood donor storage samples.Storage systems.Storage method.
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초록
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수혈부작용이 발생하면 그 원인을 규명하고, 법적인 책임 여부를 판단하는 근거를 수집하기 위하여 수혈 당시의 혈액에 대한 검사가 불가피하게 된다. 이러한 문제를 해결하기 위하여 대한 적십자사는 2004년 1월부터 헌혈자 검체를 -20℃ 이하에서 10년간 보존하고 있다. 본 연구는 현재 운영되고 있는 국내 헌혈자 보관검체 보존제도의 유용성을 실험적인 방법을 통하여 검증하기 위하여 실시되었다.
연구대상은 헌혈자로부터 확보한 HBV DNA, HCV RNA, HIV RNA 양성인 검체(각 n=30), HIV 감염자로부터 확보된 HIV
수혈부작용이 발생하면 그 원인을 규명하고, 법적인 책임 여부를 판단하는 근거를 수집하기 위하여 수혈 당시의 혈액에 대한 검사가 불가피하게 된다. 이러한 문제를 해결하기 위하여 대한 적십자사는 2004년 1월부터 헌혈자 검체를 -20℃ 이하에서 10년간 보존하고 있다. 본 연구는 현재 운영되고 있는 국내 헌혈자 보관검체 보존제도의 유용성을 실험적인 방법을 통하여 검증하기 위하여 실시되었다.
연구대상은 헌혈자로부터 확보한 HBV DNA, HCV RNA, HIV RNA 양성인 검체(각 n=30), HIV 감염자로부터 확보된 HIV RNA 양성 검체(n=20), HBV DNA, HCV RNA, HIV RNA WHO 국제표준정량물질을 희석하여 $10^{2}$ ~$10^{3}$IU/ml의 농도로 제조된 검체, 흡광도 S/CO가 3.0 이상 및 3.0 미만인 HBsAg anti-HCV, anti-HIV 양성 검체(각 n=20), 및 음성 대조 혈장(n=20)이며, 수집된 검체를 동결튜브에 소분하여 보존 개시 시점에 Roche사의 핵산증폭자동화기기인 Cobas $Amplicor^{R}$analyzer를 이용하여 핵산정량검사를 시행하였고, HBsAg는 CLIA ($PRISM^{R}$ , Abbott, USA)로, anti-HCV와 anti-HIV는 EIA (BeFree, Dade $Behring^{R}$ , Switzland)로 검사하였다. 핵산역가 및 흡광도를 확인하고, HIV 감염자 검체는 -20℃에, 나머지 검체들은 -20℃ 및 -70℃에 보관하였다. 개별 검체에 대한 검사는 인위제조 검체의 triplicate 검사를 제외하고 나머지는 모두 duplicate 검사로 시행하였다. 향후 수집되는 보관검체에 대한 비교 군 간의 결과는 전문가의 자문에 따라 excel과 통계분석프로그램인 SASⓇ 9.1 for windows를 사용하여 선형혼합모형(Linear mixed model)으로 분석하기로 하였다. 보존개시 시점의 보관검체에 대한 검사결과는 다음과 같다. 헌혈자 검체의 핵산정량 값은 HBV가 $10^{1}$ ~$10^{7}$ IU/ml, HIV가 $10^{2}$ ~$10^{4}$IU/ml, HCV가 103 ~106 IU/ml로 분포되어 있었고, HIV 감염자 검체는 101 ~105 IU/ml 의 농도를 나타내었다. 국제표준물질의 희석제조검체는 목표 농도인 $10^{2}$ ~$10^{3}$IU/ml로 확인되었다. 검체의 혈청학적 검사의 흡광도는 S/CO가 3.0~500 로 나타났다. S/CO 3.0 미만으로 핵산검사가 양성인 검체는 드물었는데, 확보되지 못한 검체는 지속적으로 수집하여 장기적인 비교 관찰 대상에는 포함되도록 할 예정이다.
보관 후 6개월 경과시점에 해당되는 검체를 대상으로 시행한 검사 결과에서, -20℃ 및 -70℃에 보관된 개별 검체의 미세한 변화가 있기는 하였으나 특정한 변화의 방향성을 나타내고 있지는 않으며 통계적인 유의성은 없었다. 충분한 검사 값이 축적되면 통계적으로 분석이 가능해 질 것이다.
현행 보관검체 보존제도의 효율적인 운영을 위해서는 1) 보관검체의 무분별한 사용의 억제, 2) 보관검체 사용에 대한 책임자 지정, 3) 세분화된 보관검체 사용 코드의 제정이 포함된 문서의 개정이 필요하고, 4) 보관검체 관련 자료를 통합 관리하고 잔여검체의 여부나 확인을 위한 적정한 전산시스템의 보완이 필요하다. 더불어 bio-bank에 대한 논의가 활발한데, 차제에 현행 헌혈자 보관검체 뿐 아니라 linked donor-recipient archives 가 추가되어 혈액의 안전성을 위한 조사나 연구가 더욱 활발하게 이루어 질 수 있기를 기대 해 본다.
결론적으로, 국내의 현행 보관검체의 보존제도의 유효성을 장기적인 비교 관찰을 통하여 검증 할 수 있는 실험방법 설계를 완료하였는데 여기에는 향 후 장기간에 걸쳐 수행될 연구를 위하여 필요한 다양한 성상을 가진 보관검체의 확보가 포함된다. 앞으로 지속적으로 추적 검사가 수행되며 얻어지는 결과로 -20℃에서 10년간 보존되고 있는 현행 국내 헌혈자 보관검체의 안정성을 실험적으로 검증하고, 향후 보관검체에 대한 검사의 유효성 여부를 과학적 근거를 가지고 판단 할 수 있게 될 것으로 기대한다.
Abstract
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The KRC blood services have introduced a system of the donor blood sample storage since 2004. The samples would be kept for 10 years under -20 ℃ and used for look-back studies including investigations of possible transfusion transmitted infections (TTIs). We made a experimental scheme to verify the
The KRC blood services have introduced a system of the donor blood sample storage since 2004. The samples would be kept for 10 years under -20 ℃ and used for look-back studies including investigations of possible transfusion transmitted infections (TTIs). We made a experimental scheme to verify the stability of the storage samples according to the different temperatures and preservation period.
We collected samples such as blood donor samples containing HBV DNA ($10^{1}$ ~$10^{7}$ IU/ml, n=30), HCV RNA ($10^{3}$ ~$10^{6}$ IU/ml, n=30), HIV RNA ($10^{2}$ ~$10^{4}$ IU/ml, n=17), samples from HIV infected persons containing HIV RNA ($10^{1}$ ~$10^{5}$ IU/ml, n=20), and WHO international standards containing HBV DNA, HCV RNA, HIV RNA (diluted in negative plasma, adjusted to final titers of $10^{2}$ ~$10^{3}$ IU/ml). Serological positive samples in HBsAg, anti-HCV, anti-HIV test (≥S/CO 3.0, n=20 : <3.0, n=20) and negative samples (as control, n=20) were also prepared. The collected samples were aliquoted in a cryo-preserved tube with volume of 0.5~5ml and stored at ≤-20℃ and ≤-70℃. The test methods used for the base line data before the storage, quantitative NAT techniques (Cobas $Amplicor^{R}$ analyzer Roche, Switzland), CLIA for HBsAg ($PRISM^{R}$, Abbott, USA) and EIA for anti-HCV and, anti-HIV (BeFree, Dade $Behring^{R}$, Switzland). The samples containing different viral titers would be stored for 10 years at different temperature and would be analysed by at defined time points. All samples were analysed in duplicate(except WHO Int. standards, which is triplicated). The test results were analysed by Linear mixed statistical model using SAS® 9.1 for windows. The results of baseline test showed variable range of viral load ( $10^{1}$ ~$10^{7}$IU/ml). And serological test reveal also wide range of optical density (S/CO 3.0~500). NAT positive samples with low S/CO was very rare and hard to collect it.
The results for the storage samples after 6 month did not show significant difference compare to the previous data.
For the effective use of blood donation samples, standardized operating manual and documents should be revised to contain 1) restriction of indiscreet retrieval of samples, 2) assignment of authorized personnel 3) subdivided codes for retrieval of samples. And further more a proper computerization system to mange it should be supplemented.
As a results, we gained the original goal of this study to establish a new experimental scheme including the attainment of enough samples to verify the effect of current storage system using the comparative and long term follow-up studies.
목차 Contents
- 표지 ... 1
- 목차 ... 2
- 최종결과보고서약문 ... 3
- Summary ... 4
- 제1장 최종 연구개발 목표 ... 5
- 1.1 목표 ... 5
- 1.2 목표달성도 ... 6
- 제2장 최종 연구개발 내용 및 방법 ... 8
- 2.1 연구내용 ... 8
- 2.2 연구방법 ... 8
- 제3장 최종 연구개발 결과 ... 11
- 3.1 국내 헌혈자 보관검체 보존현황 조사 ... 11
- 3.2 국외 헌혈자 보관검체 보존현황 조사 ... 14
- 3.3 헌혈자 보관검체의 보존방법에 따른 실험적 검증 ... 32
- 제4장 연구결과 고찰 및 결론 ... 68
- 제7장 참고문헌 ... 73
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