신속·정확하게 신증후출혈열을 조기에 진단할 수 있는 키트 개발 Development of diagnosis kit for early and accurate detection of hemorrhagic fever with renal syndrome (HFRS) by rapid method원문보기
신증후출혈열은 Hantavirus 속에 속하는 Hantaan virus, Seoul virus 등에 의한 바이러스성 급성전염병으로 발열, 출열, 신장병변이 특징이며, 적절히 치료를 받지 못하면 사망률이 5-50% 인질환이다. 국내에서 유행하는 급성열성질환(신증후출혈열, 발진열, 쯔즈가무시병 및 랩토스피라증)은 발병증세가 서로 유사하여 임상적으로는 정확한 분별 진단이 불가능하다. 각 질환은 원인균이 다르기 때문에 치료방법은 다르나, 조기진단으로 조기 치료시 쉽게 완치가 가능하다. 따라서 본사에서는 신증후출혈열을 신속·정확하게 조기에
신증후출혈열은 Hantavirus 속에 속하는 Hantaan virus, Seoul virus 등에 의한 바이러스성 급성전염병으로 발열, 출열, 신장병변이 특징이며, 적절히 치료를 받지 못하면 사망률이 5-50% 인질환이다. 국내에서 유행하는 급성열성질환(신증후출혈열, 발진열, 쯔즈가무시병 및 랩토스피라증)은 발병증세가 서로 유사하여 임상적으로는 정확한 분별 진단이 불가능하다. 각 질환은 원인균이 다르기 때문에 치료방법은 다르나, 조기진단으로 조기 치료시 쉽게 완치가 가능하다. 따라서 본사에서는 신증후출혈열을 신속·정확하게 조기에 진단할 수 있는 진단키트를 제작하고자 하였다. 민감도와 특이성이 높은 제품을 만들기 위해, 고대 의대 미생물학교실과의 공동연구를 통하여 Apodemus peninsufae로부터 분리된 Sucheong virus (Hantavirus에 소속)의 주요항원 단백질인 뉴클레오캡시드 단백질에 대하여 그 구조유전자의 분석을 실시하였다. 분석에 따라 Hantaan 및 Seoul virus 에 반응할 수 있도록, Sucheong virus의 뉴클레오캡시드 단백질을 곤충바이러스 발현시스템을 이용하여 재조합 단백질 형태로 발현시켰다. Hantaan, Seoul, Puumala 그리고 Prospect Hill virus에 감염된 랫드 혈청을 가지고 재조합 단백질의 항원성을 실험한 결과 Hantaan 및 Seoul virus에서는 반응을 하나, 그 외 다른 virus와는 반응하지 않는 것을 확인하였다. 본사에서는 시제품 수준에서 금접합체들 이용한 lateral flow assay 방법을 이용하여 진단키트(Rapid Dia~nostic Kit; RDK)를 제작하였다. 이 RDK는 Hantaan 또는 Seoul virus 에 감염된 환자 혈청 1 ul를 가지고 5분내에 바이러스 특이 IgG 및 IgM을 판별할 수 있다. 면역형광항체법(IFA)에서 감염환자라고 판명된 혈청을 RDK (IgG or IgM)로 테스트를 한 결과, 97%의 민감도를 나타내었으며, 99%의 특이도를 보였다. 특이사항으로는 IFA (IgM)에서는 38%정도 판별이 가능하나, RDK (IgM)에서는 72% 를 판별하였다. 본사에서 개발한 신증후출혈열 RDK에서는 표준진단방법인 IFA보다 Ig4M의 발견율이 매우 높으므로, 조기 진단이 가능할 것으로 보인다.
Abstract▼
Hemorrhagic fever with renal syndrome (HFRS) caused by Hantaan VIrus (HTNV) and Seoul virus is one of the febrile illnesses such as tsutsugamushi disease, leptospirosis and murine typhus. We newly isolated Sucheong virus (SCV) from Apodemus pemnsuiae and it is thought to be a new species of Hantavir
Hemorrhagic fever with renal syndrome (HFRS) caused by Hantaan VIrus (HTNV) and Seoul virus is one of the febrile illnesses such as tsutsugamushi disease, leptospirosis and murine typhus. We newly isolated Sucheong virus (SCV) from Apodemus pemnsuiae and it is thought to be a new species of Hantavirus showing 95.8% amino acid sequence identity to nucleocapsid protein (NP) of strain 76-118 of HTNV, the prototype of Hantavirus. To obtain antigens for HFRS diagnosis, the SCV-NP was expressed by a recombinant baculovirus system. A rat was infected with Hantaan, Seoul, Puumala or Prospect Hill virus and used to monitor the antigenic characteristics of SCV -NP. Our results suggest that SCV -NP had full antigenicity against HTNV and Seoul virus but not against Puumala and Prospect Hill virus. We developed a lateral flow assay (LFA) for the diagnosis of HFRS using the SCV-NP. This LFA kit could detect the specific IgG and IgM to HTNV and Seoul virus in 1㎕ of patient's serum as short as In 5 minutes. For sera that were positive In immunofluorescence assay (IFA) IgG at 1:32 dilutions, the LFA kit detected the specific antibody with about 81% accuracy at 1:80 dilutions. For sera that were positive in IFA (IgG) at 1:80 dilutions or in IFA (IgM) at 1:20 dilutions, the LFA test kit detected the specific IgG or IgM with 97% accuracy at 1:100 dilutions. Furthermore, the LFA kit (IgM) detected 72% of the previously diagnosed HFRS patients while the IFA (IgM) did only 38%, suggesting that the LF A kit can serve as an early diagnosis tool of HFRS. Only 1 % of the control sera from patients with leptospirosis, mUrIne typhus, tsutsugamushi disease, fever of unknown origin and healthy person showed positive reaction with the LFA kit. Therefore, these results suggest that this LFA kit can be used for rapid, accurate and early diagnosis for HFRS.
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