초록 ▼

III. 연구개발의 내용 및 범위
단백질 측정표준 체계구축 사업은 4개의 세부과제로 구성되어 있으며 각 세부별 연구개발의 범위는 다음과 같이 구성되어 있다.
가. 단백질 표준물질 생산기반 구축
- 단백질 시료확보를 위한 외부협력 및 자체 생산기술 확보
- 단백질 (hGH, EPO) 정량 및 생화학적 분석 기술 개발
- 단백질 시료 조작의 유효성 및 안정성 평가기술 개발
- 단백질 절대정량을 위한 내부표준물질용 안정동위원소 표지 단백질 생산 및 정제기술 개발
- 새로운 단백질 정량법으로서 Kjel

III. 연구개발의 내용 및 범위
단백질 측정표준 체계구축 사업은 4개의 세부과제로 구성되어 있으며 각 세부별 연구개발의 범위는 다음과 같이 구성되어 있다.
가. 단백질 표준물질 생산기반 구축
- 단백질 시료확보를 위한 외부협력 및 자체 생산기술 확보
- 단백질 (hGH, EPO) 정량 및 생화학적 분석 기술 개발
- 단백질 시료 조작의 유효성 및 안정성 평가기술 개발
- 단백질 절대정량을 위한 내부표준물질용 안정동위원소 표지 단백질 생산 및 정제기술 개발
- 새로운 단백질 정량법으로서 Kjeldahl 질소 정량법 구축
나. 단백질 정량표준 확립 분야
- 아미노산 기반 hGH 분석법 확립
- 아미노산 기반 단백질 분석을 통한 botulinum toxin 단백질의 흡광계수 결정
- 혈청 중 hGH의 펩타이드 기반 분석법을 위한 기반데이터 확보
- 아미노산 인증표준물질 3종 개발
- 단백질 측정 관련 기술 개발 (고능률 단백질 당쇄분석 기술 및 CE-MS 아미노산 분석기술)
다. 단백질 특성 분석기술 확립
- 하향식 단백질 서열 및 PTM 분석기술 확립
- hGH 안정성 평가방법 연구
- CIEF 및 MS를 이용한 단백질 불순물 분리분석 기술 확립
- EPO의 특성 분석
- 원소표지 이용 단백질 정량기술 기초 연구
라. 단백질 품질관리 기반 구축
- 숙주세포 유래 핵산 불순물 정량 분석 기술 개발 및 표준물질 개발
- 숙주세포 유래 단백질 불순물 정량 분석 기술 개발
- 세포 기반 hGH 활성 측정
- hGH 활성 예측을 위한 분광학적 연구

Abstract ▼

III. Contents and Scope
Development of protein measurement standards project consists of 4 sub projects and the contents and scope of each project were as follows.
A. Establishment of production platform for protein reference materials
(1) Establishment of own production technology and exte

III. Contents and Scope
Development of protein measurement standards project consists of 4 sub projects and the contents and scope of each project were as follows.
A. Establishment of production platform for protein reference materials
(1) Establishment of own production technology and external collaboration for large amount of protein samples
(2) Quantitation of EPO and evaluation of biochemical protein analysis methods
(3) Evaluation of efficacy and stability of protein sample manipulation
(4) Development of production and purification technologies for stable isotope labeled internal reference material
(5) Establishment a new method for protein quantitation
B. Establishment of Measurement standards for protein quantitation
(1) Establishment of the procedure for quantification of hGH based on amino acid composition analysis using HPLC-ID/MS
(2) Determination of UV-absorption coefficient of botulinum toxin protein based on its amino acid composition analysis
(3) Acquisition of basic skills and materials to quantify hGH in serum matrix
(4) Development of amino acid CRMs
(5) Development of protein measurement methods (glycan analysis and CE-MS)
C. Development of protein characterization technologies
(1) Development of top-down protein analysis method for amino acid sequence and PTM analysis
(2) Methodology development for hGH stability study
(3) Protein impurity analysis method using CIEF and MS
(4) Characterization of EPO
(5) Survey study for absolute quantification of protein using element-specific analysis
D. Establishment of standards for quality assessment of proteins
(1) Optimization of the real time whole genome amplification method for quantification of trace-level DNA
(2) Development of reference materials 'CHO cell DNA in hGH' for quantitative analysis of host cell DNA impurity
(3) Development of an analytical method for quantification of host cell protein impurities in bio-pharmaceutical agents
(4) Establishment of a cell-based assay system for measurement of hGH activity
(5) Spectroscopic approaches for estimation of structures and activities of hGH samples

목차 Contents

• 표지 ... 1
• 제출문 ... 3
• 보고서 요약서 ... 5
• 요약문 ... 7
• SUMMARY ... 12
• CONTENTS ... 17
• 목 차 ... 19
• 제1장 연구개발 과제의 개요 ... 21
• 제1절 연구개발의 필요성 ... 21
• 제2절 국내외 연구 및 기술개발 동향 ... 26
• 제3절 연구개발의 범위 ... 30
• 제2장 단백질 표준물질 생산기반 구축 ... 32
• 제1절 서 론 ... 32
• 제2절 EPO 정량 및 생화학적 분석 ... 34
• 제3절 단백질 내 염기성 아미노산을 이용한 Bradford assay 해석 ... 46
• 제4절 단백질 절대정량을 위한 내부표준물질용 안정동위원소 표지단백질 생산 및 정제기술 개발 ... 65
• 제5절 새로운 단백질 정량법 구축 ... 90
• 제6절 침고문헌 ... 94
• 제3장 단백질 정량 측정표준기술의 개발 ... 96
• 제1절 서 론 ... 96
• 제2절 아미노산 기반 단백질 정량기술 개발 ... 99
• 제3절 펩타이드 기반 단백질 정량기술 개발 ... 119
• 제4절 아미노산 인증표준물질의 개발 ... 134
• 제5절 단백질 측정기술의 개발 ... 161
• 제6절 참고문헌 ... 182
• 제4장 단백질 특성 분석 기술의 개발 ... 185
• 제1절 서 론 ... 185
• 제2절 EPO 단백질 특성분석 연구 ... 188
• 제3절 하향식 단백질 서열 및 modification 분석 ... 220
• 제4절 CIEF 및 MS를 이용한 단백질 불순물 분리분석 기술 연구 ... 242
• 제5절 hGH 안정성 분석 기술 연구 ... 254
• 제6절 원소표지 단백질 정량기술 기초 연구 ... 260
• 제7절 결론 ... 267
• 제8절 참고문헌 ... 268
• 제5장 단백질 품질관리 기반 구축 ... 269
• 제1절 서론 ... 269
• 제2절 숙주세포 유래 핵산 불순물 정량 분석 ... 272
• 제3절 숙주세포 유래 단백질 불순물 정량 분석 ... 293
• 제4절 세포 기반 단백질 활성 측정 ... 309
• 제5절 Human Growth Hormone의 활성평가를 위한 분광학적 특성 연구 ... 325
• 제6절 참고문헌 ... 342
• 제6장 목표달성도 및 관련분야에의 기여도 ... 344
• 제7장 연구개발 결과의 활용계획 ... 348
• 제1세부: 단백질 표준물질 생산기반 구축 ... 348
• 제2세부: 단백질 정량 측정 기술 개발 ... 349
• 제3세부: 단백질 특성 분석 기술 개발 ... 350
• 제4세부: 단백질 품질 관리 체계 구축 ... 351