초록 ▼

제1형 당뇨병은 인슐린을 분비하는 췌장의 베타세포가 파괴되어 발생하는 질병으로 최근 사람줄기세포를 체외에서 인슐린 분비능이 있는 세포로 분화 시킨 후 환자의 체내에 이식하여 베타세포로서의 기능을 하도록 하는 새로운 당뇨세포치료제로서의 사용이 현실화되고 있음. 그러나 체외배양방법에 따라 인슐린분비세포로의 분화 정도가 각각 다르기 때문에 치료효과가 달리 나타날 수 있으므로, 효과적인 당뇨세포치료제에 대한 최소한의 분화 기준을 제시하는 시험법이 확립되어야 함. 따라서 본 연구에서는 사람의 양막 및 지방유래 줄기세포를 인슐린분비세포로 분화

제1형 당뇨병은 인슐린을 분비하는 췌장의 베타세포가 파괴되어 발생하는 질병으로 최근 사람줄기세포를 체외에서 인슐린 분비능이 있는 세포로 분화 시킨 후 환자의 체내에 이식하여 베타세포로서의 기능을 하도록 하는 새로운 당뇨세포치료제로서의 사용이 현실화되고 있음. 그러나 체외배양방법에 따라 인슐린분비세포로의 분화 정도가 각각 다르기 때문에 치료효과가 달리 나타날 수 있으므로, 효과적인 당뇨세포치료제에 대한 최소한의 분화 기준을 제시하는 시험법이 확립되어야 함. 따라서 본 연구에서는 사람의 양막 및 지방유래 줄기세포를 인슐린분비세포로 분화 유도한 후 체외에서의 인슐린분비세포의 확인 및 역가시험법을 검증함. 본 연구를 통해 얻은 양막 및 지방줄기세포유래 인슐린분비세포의 역가시험법(안)은 효과적인 당뇨세포치료제에 대한 최소한의 분화 기준으로 제시될 것으로 기대됨.
이와 함께 제1형 당뇨병 모델을 이용한 인슐린분비세포의 체내 역가시험법을 검증을 위해 지방 및 양막유래 줄기세포로부터 분화 유도된 인슐린분비세포를 제1형 당뇨쥐로 이식한 후 치료 효과를 검증할 수 있는 기준을 제시하였음. 본 연구 결과 성체줄기세포를 이식 받은 당뇨쥐의 몸무게의 증가, 혈당의 감소 및 이식세포의 제거 후 혈당 증가의 검증이 필요하며, 당부하검사 및 조직, 병리학적 검증이 이루어져야 할 것임. 또한 이식된 혈청에서 사람의 인슐린과 C-peptide 의 분석을 통해 당뇨치료 효과가 이식받은 세포에 의한 것임을 입증해야 함.
세포치료제로의 적용 시 필요한 동결보존 방법이 인슐린분비세포에 적용될 수 있는지 검증을 위해 미분화 줄기세포 및 분화된 인슐린분비세포의 동결보존에 따른 특성을 검증하였으며, 본 연구 결과 지방 및 양막유래 줄기세포는 최대 2년 동안 동결보존 기간 동안 줄기세포의 특성의 변화를 일으키지 않는 것으로 나타났으며, 분화된 인슐린분비세포는 냉동보존 후 인슐린분비능의 특성을 유지하는 것으로 검증되었음. 이를 통해 동결-해동된 줄기세포 및 인슐린분비세포의 임상 적용 가능성을 제시하였음.

Abstract ▼

Insulin dependent-diabetes is caused by the destruction of pancreatic β cells. Many attempts have been made to develop stem cell-based therapy to replace insulin injection. However, the differentiation efficiency of human adult stem cells into pancreatic beta cells is very variable depend on organiz

Insulin dependent-diabetes is caused by the destruction of pancreatic β cells. Many attempts have been made to develop stem cell-based therapy to replace insulin injection. However, the differentiation efficiency of human adult stem cells into pancreatic beta cells is very variable depend on organization. The purpose of this study was to suggest the identity and potency method of cell therapy products for type 1 diabetes. In order to study the identify test of insulin-secreting cells derived from human adipose and amniotic membrane, we evaluated both RT-PCR and immunocytochemistry method by pancreatic beta cells-specific makers. And insulin and C-peptide ELISA were evaluated for the potency of cells in vitro. These results suggest the identity and potency method of insulin-secreting cells to ensure the therapeutic effect for type 1 diabetic mice model. Moreover, we examined the therapeutic effects of insulin-secreting cells following transplantation into type 1 diabetic mice model. We suggest that body weight, blood glucose and serum insulin/C-peptide of transplanted diabetic mice should be observed to verify the cell therapy products for type 1 diabetic. In addition, this study assessed the characteristics of frozen-thawed adult stem cells and insulin-secreting cells. Results showed that frozen-thawed adult stem cells and insulin-secreting cells can be used as cellular product. The identity and potent method developed in the present study will be help to make standard method for clinically applicable cellular product for the treatment of type 1 diabetes.

목차 Contents

• 용역연구개발과제 최종보고서 ... 1
• 제 출 문 ... 2
• 목 차 ... 3
• 총괄연구개발과제 연구결과 ... 4
• Ⅰ. 총괄연구개발과제 요약문 ... 5
• 국문 요약문 ... 5
• Summary ... 7
• Ⅱ. 총괄연구개발과제 연구결과 ... 9
• 제1장 총괄연구개발과제의 목적 및 필요성 ... 9
• 제2장 총괄연구개발과제의 내용 및 방법 ... 17
• 제3장 총괄연구개발과제의 최종결과 및 고찰 ... 23
• 제4장 총괄연구개발과제의 연구성과 ... 45
• 제5장 총괄주요연구 변경사항 ... 47
• 제6장 총괄참고문헌 ... 47
• 제7장 총괄첨부서류 ... 49