초록 ▼

엔도톡신시험은 백신을 포함한 모든 주사용의약품의 안전한 품질관리를 위해 필요한 시험으로 Limulus Amebocyte Lysate (LAL)시약을 이용한 시험법이며 세부적으로 여러시험방법이 존재하고 그 중 키네틱비탁법(KTA)와 키네틱비색법(KCA)이 대표적인 정량시험법으로 사용되어지고 있다. 하지만 이 방법들은 표준엔도톡신을 이용하여 매 시험마다 표준곡선을 그려야하고, 이것은 표준엔도톡신의 vortexing 시간과 시험자의 숙련도에 따라 영향을 받을 수 있다. 그리고 세부시험법을 선정하는 근거가 미비한 실정이다.
이번 연구

엔도톡신시험은 백신을 포함한 모든 주사용의약품의 안전한 품질관리를 위해 필요한 시험으로 Limulus Amebocyte Lysate (LAL)시약을 이용한 시험법이며 세부적으로 여러시험방법이 존재하고 그 중 키네틱비탁법(KTA)와 키네틱비색법(KCA)이 대표적인 정량시험법으로 사용되어지고 있다. 하지만 이 방법들은 표준엔도톡신을 이용하여 매 시험마다 표준곡선을 그려야하고, 이것은 표준엔도톡신의 vortexing 시간과 시험자의 숙련도에 따라 영향을 받을 수 있다. 그리고 세부시험법을 선정하는 근거가 미비한 실정이다.
이번 연구에서는 새로운 백신의 엔도톡신 국가검정시험법으로서 자동화된 cartridge 시험법이 적합한지를 확인하고 기존방법(KTA, KCA)과 상관성이 있는지를 평가하였다. 그리고 엔도톡신 세부시험법을 선정하는 과학적 근거를 마련하고자 백신에 사용되는 첨가제들이 엔도톡신시험에 미치는 영향을 세부시험법별로 살펴보았다.
새로운 cartridge 시험법에 대해 Method Validation 수행결과, 밸리데이션 항목인 정확성, 정밀성, 특이성, 직선성에 대해 모두 만족하는 결과를 보였다. 또한 새로운 cartridge 시험법과 기존 시험법(KTA, KCA)간의 비교 결과 높은 상관성을 확인할 수 있어 새로운 cartridge 시험법이 백신의 엔도톡신시험법으로 적합함을 알 수 있었다.
그리고 백신 첨가제의 엔도톡신시험 간섭효과를 평가하였으며, 그 결과 4가지 첨가제가 간섭작용이 있음을 확인하였다. 특히 이 중에서 수산화알루미늄의 경우 희석액으로 DPBS와 50mM phosphate buffer를 사용할 때 간섭작용이 극복되는 것을 확인하였다.
결론적으로, 백신의 엔도톡신시험법으로 cartridge system을 이용한 새로운 시험법을 확립하였으며, 이는 사용의 편리성과 결과도출이 신속하다는 장점을 가지고 있다. 그리고 첨가제의 간섭효과 연구를 통해 엔도톡신 세부시험법 선정에 대한 과학적 근거를 마련할 수 있었다.
이로써 cartridge 시험법에 대한 새로운 SOP를 제정하였으며 이는 향후 백신의 국가검정 시험법으로 사용될 것이며 또한 품질관리 능력 향상 및 국민 보건 향상에 기여할 것으로 여겨진다.

Abstract ▼

The bacterial endotoxin test is required for all parenteral drugs including vaccines to qualify the safety. Limulus Amebocyte Lysate (LAL) is used in the endotoxin test and a variety of LAL assay options are available. The kinetic turbidimetric assay (KTA) and the kinetic chromogenic assay (KCA) are

The bacterial endotoxin test is required for all parenteral drugs including vaccines to qualify the safety. Limulus Amebocyte Lysate (LAL) is used in the endotoxin test and a variety of LAL assay options are available. The kinetic turbidimetric assay (KTA) and the kinetic chromogenic assay (KCA) are popular quantitative methods. However, these methods require a standard curve in each test, which is influenced by the vortexing time of SE and by technical ability of each analyst. And also there is no reasonable basis to select LAL assay options.
In this study, we intended to check a suitability of automated cartridge system as a new Lot release method to detect endotoxin in vaccines and to evaluate the correlation between existing kinetic methods(KTA & KCA) and new method(cartridge system). And to prepare the scientific basis on the selection of LAL assay options, we studied the effect of adding materials in vaccines on the LAL assay options.
The method validation study was conducted on this new cartridge system. All validation parameters including accuracy, precision, specificity and linearity were checked and satisfied the acceptance criteria. And we also conducted the comparative analysis between new cartridge system and the existing methods, KTA and KCA. As a result, the new cartridge system is considered to be proper method to detect endotoxin in vaccines.
And we examined the effect on the interfering action of adding materials in vaccines.
As results, we found four adding materials as interference factors on the endotoxin test.
Especially among these, the interfering action of aluminum hydroxide could be suppressed when sample solutions were prepared in DPBS of 50mM phosphate buffer.
In conclusion, we establised the new method using cartridge system as the endotoxin test in vaccines which has several advantages like convenience, simplicity of use and speed of result output. And testing the interference effect of adding materials, we prepared the scientific basis on the selection of LAL assay options. Hence, SOP for the new method using cartridge system was prepared. This new method will be used for Lot release of vaccines as a official test and also contribute to improvement of quality control and public health.

목차 Contents

• 자체연구개발과제 최종보고서 ... 1
• 표지 ... 2
• 국문 요약문 ... 4
• Summary ... 5
• 목차 ... 6
• Ⅰ. 연구개발과제 연구결과 ... 7
• 제1장 연구개발과제의 개요 ... 7
• 제2장 연구개발과제의 국내·외 연구개발 현황 ... 9
• 제3장 연구개발과제의 연구수행 내용 및 결과 ... 9
• 제4장 연구개발과제의 연구결과 고찰 및 결론 ... 36
• 제5장 연구개발과제의 목표달성도 및 관련분야에의 기여도 ... 38
• 제6장 연구개발과제 연구개발 결과 활용계획 ... 40
• 제7장 참고문헌 ... 42