초록 ▼

1. 말라리아 진단용 LDH 단클론항체 및 진단키트 개발을 위한 형광체 대량 생산
가. 말라리아의 LDH 단백질의 항원 반응성이 좋은 부위에 대해 단클론항체를 제조하였음.
나. 제조된 단클론항체를 대량 생산(20 mg)하였음.
다. 형광면역진단법 개발에 활용될 소형 광원 기반 형광체를 대량 생산(200 mg)하였음.
2. 열대열 및 삼일열말라리아에 대한 유용성 평가(민감도 및 특이도 평가)
가. 아프리카 우간다와 아시아 미얀마로부터 열대열말라리아 환자 혈액 샘플을 총 53개 확보함.
나. 한국질병관리

1. 말라리아 진단용 LDH 단클론항체 및 진단키트 개발을 위한 형광체 대량 생산
가. 말라리아의 LDH 단백질의 항원 반응성이 좋은 부위에 대해 단클론항체를 제조하였음.
나. 제조된 단클론항체를 대량 생산(20 mg)하였음.
다. 형광면역진단법 개발에 활용될 소형 광원 기반 형광체를 대량 생산(200 mg)하였음.
2. 열대열 및 삼일열말라리아에 대한 유용성 평가(민감도 및 특이도 평가)
가. 아프리카 우간다와 아시아 미얀마로부터 열대열말라리아 환자 혈액 샘플을 총 53개 확보함.
나. 한국질병관리본부 국립보건원 말라리아기생충과로부터 삼일열말라리아 혈액 샘플을 총 30개 확보함.
다. 확보된 삼일열 및 열대열말라리아 환자의 혈액을 이용해 현미경진단법, PCR, RDT, ELISA test를 통해 양성 진단을 평가함.
라. 개발된 형광체-단클론항체 축합체를 이용해 확진된 양성 샘플에 대해 FLISA 방식으로 진단민감도를 측정한 결과 100%의 진단민감도를 얻었음.
마. 다양한 원충 혈증을 보이는 삼일열말라리아 환자 샘플로 FICT를 수행한 결과, 높은 진단 민감도를 확인할 수 있었음.
바. 혈액 내에 원충의 수가 결정된 미얀마 환자의 열대열말라리아 표준 샘플을 이용해 정량적 형광면역진단을 수행한 결과, 원충의 수가 증가할수록 형광값이 증가함을 확인하였음.
3. 말라리아 감염 여부의 형광면역진단을 위한 정량 기기 설계 및 제작
가. 형광체의 wavelength에 맞는 광원을 사용하여 설계하였음.
나. 고감도 PMT를 수광소자로 사용하여 설계하였음.
다. 분석용 PC 소프트웨어를 제작하여 정량적 분석이 가능하도록 설계하였음.
라. 혈액 시료 샘플을 이용하여 형광 peak이 나오는 것을 확인하였음.

Abstract ▼

1. The mass production of Plasmodium falciparum lactate dehydrogenase (PfLDH) specific monoclonal antibodies and fluorophore for malaria diagnosis
A. We have analyzed the antigenic activitied of several peptides in PfLDH.
B. We have produced about 20 mg of PfLDH specific monoclonal antibodies.

1. The mass production of Plasmodium falciparum lactate dehydrogenase (PfLDH) specific monoclonal antibodies and fluorophore for malaria diagnosis
A. We have analyzed the antigenic activitied of several peptides in PfLDH.
B. We have produced about 20 mg of PfLDH specific monoclonal antibodies.
C. We have produced about 200 mg of fluorophore for FLISA diagnosis.
2. The evaluation of malaria patient (FLISA and FICT-based diagnosis)
A. Fifty three samples of P. falciparum patients collected from Uganda and Myanmar have been used for evaluation of our detection system.
B. Thirty samples of P. viviax patients collected from Korea CDC have been used for evaluation of detection system.
C. Microscopic method, PCR, RDT and ELISA test have been used to detect malaria parasites from malaria patient blood samples.
D. We have tested malaria clinical samples with FLISA using bioconjugate of coumarin-MAb #2 and its sensitivity of test was 100%.
E. FICT has been conducted using P. viviax patient samples and its sensitivity was high.
F. The quantitative FLISA has been performed using standard blood samples of P. falciparum from Myanmar and we have found the relative fluorescence was increased by the number of parasites.
3. The development of quantitative measurement system for fluorescence signals
A. Light source has been applied for suitable wavelength of fluorophore.
B. PMT has been adapted for fluorescence accepting device.
C. PC software has been managed to quantitative/y analyze the fluorescent signal.
D. Serially diluted fluorescent solution has been analyzed with system and the fluorescent peaks have been successfully observed with corresponding intensities.

목차 Contents

• 표지 ... 1
• 질병관리본부 학술연구용역사업 최종결과보고서 ... 3
• 목차 ... 4
• 최종결과보고서 요약문 ... 5
• Summary ... 6
• 학술연구용역사업 연구결과 ... 7
• 제1장 최종 연구개발 목표 ... 7
• 제1.1절 목표 ... 7
• 제1.2절 목표달성도 및 관련분야에 대한 기여도 ... 13
• 제1.3절 국내·외 기술개발 현황 ... 13
• 제2장 최종 연구개발 내용 및 방법 ... 14
• 제2.1절 연구개발 내용 ... 14
• 제2.2절 연구개발 방법 ... 15
• 제3장 최종 연구개발 결과 ... 19
• 1. 말라리아 원충 LDH 단클론항체 생산 ... 19
• 2. Coumarin 형광체 대량 생산 및 축합체 제작 ... 19
• 3. 삼일열말라리아 및 열대열말라리아 감염자 혈액을 이용한 유용성 평가 ... 19
• 4. 형광면역분석을 위한 광학 모듈 설계 ... 24
• 제4장 연구결과 고찰 및 결론 ... 26
• 1. 말라리아 진단용 LDH 단클론항체 및 형광체의 대량 생산 ... 26
• 2. 열대열말라리아 및 삼일열말라리아에 대한 진단 민감도 및 특이도 평가 ... 26
• 3. 형광진단을 위한 정량 기기 설계 및 제작 ... 26
• 제5장 연구성과 및 활용계획 ... 27
• 제5.1절 활용성과 ... 27
• 제5.2절 활용계획 ... 28
• 제6장 기타 중요변경사항 ... 28
• 제7장 연구비 사용 내역 ... 29
• 7.1 연구비 사용 내역 ... 29
• 7.2 연구분담표 ... 30
• 제8장 참고문헌 ... 30