초록 ▼

1. 연구목표
AMP-activated protein kinase (AMPK)의 활성조절 약물들 (Compound C, AICAR, phenformin, metformin)의 Akt 인산화 및 상위 신호전달 기전에 미치는 영향을 조사하고 이들에 의한 세포증식 조절의 분자적 기전을 밝혀서 노화 및 종양과 같은 질병의 예방과 치료에 활용하고자 함.
2. 연구내용
(1) AMPK 활성 조절 약물이 다양한 세포주 (HDFs, MRC-5, Beas-2B, VSMC, A172, 4T1, B16-F1, Renca 등)에서 MTT

1. 연구목표
AMP-activated protein kinase (AMPK)의 활성조절 약물들 (Compound C, AICAR, phenformin, metformin)의 Akt 인산화 및 상위 신호전달 기전에 미치는 영향을 조사하고 이들에 의한 세포증식 조절의 분자적 기전을 밝혀서 노화 및 종양과 같은 질병의 예방과 치료에 활용하고자 함.
2. 연구내용
(1) AMPK 활성 조절 약물이 다양한 세포주 (HDFs, MRC-5, Beas-2B, VSMC, A172, 4T1, B16-F1, Renca 등)에서 MTT assay를 이용하여 cell viability에 미치는 영향 조사
(2) Propidium iodide로 세포 DNA를 염색한 후 cell cycle(Go/G1, S, G2/M)에 따른 DNA content의 변화를 flow cytometry로 분석하였고, cell cycle regulators (PCNA, P-pRb, Cdks, Cyclins, CDK inhibitors, p53 등)에 미치는 영향을 Western blotting을 이용하여 조사
(3) HDFs와 다른 정상 세포들(MRC-5, Beas-2B, VSMC), 그리고 암세포주들(A172, Renca, B16-F1, 4T1)에서 혈청(FBS)과 성장인자 (PDGF, EGF, IGF)에 의한 Akt 인산화 (Thr308과 Ser473) 및 Akt의 downstream에 있는 GSK-3β와 upstream에 있는 PI3K, ERK1/2, PLCγ1, 성장인자 수용체 등의 활성 및 인산화에 미치는 영향을 Western blotting을 이용하여 조사
(4) In vitro kinase assay system을 이용하여 Akt 및 성장인자 수용체 tyrosine kinase 활성 자체에 미치는 영향 연구 - 양쪽 끝에 두 종류의 형광물질을 부착시킨 peptide 기질의 FRET 현상과 Z´-LYTE biochemical assay kit를 이용하여 기질의 인산화 여부를 확인함으로써 PDGFRβ, EGFR, IGFR의 in vitro receptor tyrosine kinase 활성을 조사
(5) AMPK 단백질 발현 및 활성을 유전적으로 조절, AMPK 활성의 관련성 여부 확인
- AMPK 촉매소단위인 α1 또는 α2 또는 α1/α2를 knockdown시킨 MEF를 이용하여 Compound C나 phenformin의 PDGFR 신호전달에 미치는 효과를 조사
(6) 성장인자와 성장인자 수용체간의 상호작용에 미치는 영향 연구 - BS3로 cross-link시키고 PDGFR dimer의 양을 Western blotting으로 비교, immunohistochemistry 및 confocal microscopy를 이용해 PDGFR의 이동경로 조사, ProteOn XPR36를 활용하여 PDGF와 PDGFR의 상호 관계를 나타내는 상수 Rmax와 친화력 조사
(7) HUVEC cell의 증식, 이동 및 분화에 미치는 영향 연구 - VEGF에 대한 VEGF 수용체의 인산화와 하위 신호전달 단백질들(ERK1/2, PI3K, Akt, p38, PKCs)의 양과 활성 조사, HUVEC cells의 migration, in vitro tube formation 조사
3. 기대효과
● 효소 활성 조절물질의 기전을 분명히 이해함으로써 이 물질들에 의한 부작용과 새로운 활용 가능성을 타진하여 다양한 세포 기능 조절에 활용할 수 있음.
● 암과 같은 질병의 예방 및 치료에 활용하여 의료비 절감이 가능하고 삶의 질 향상에 기여함.
● 국내외 학술발표 및 논문게재를 통해 타지역 및 국가 간의 연구 교류를 할 수 있음.

목차 Contents

• 일반연구자지원사업 최종(결과)보고서 ... 1
• 목 차 ... 2
• Ⅰ. 연구결과 요약문 ... 3
• Ⅱ. 연구내용 및 결과 ... 4
• 1. 연구과제의 개요 ... 4
• 2. 국내·외 기술개발 현황 ... 4
• 3. 연구수행 내용 및 결과 ... 5
• 4. 목표 달성도 및 관련 분야에의 기여도 ... 7
• 5. 연구결과의 활용 계획 ... 8
• 6. 연구과정에서 수집한 해외과학기술정보 ... 8
• Ⅲ. 연구성과 ... 10