초록 ▼

체내에서 대부분의 약물은 주로 간에서 대사가 일어나며, 간에서의 약물대사는 CYP450효소가 중요하게 관여한다. 최근의 의약품은 다제병용을 고려하여 개발해야 되기 때문에, 약물의 대사에 어떤 CYP450효소가 관여하여 약물상호작용이 일어나는지를 평가하는 것은 매우 중요하다 할 수 있다. 이에 따라 각국의 규제기관에서는 신약개발과정에서 어떻게 약물상호작용연구를 해야 되는지에 관한 가이드라인을 마련하고 있다. 관련 연구를 통하여 최근 개정된 내용에는 특정 기질을 이용한 간접측정방식인 효소활성측정법 뿐만 아니라, 세포수준에서 직접 측정이

체내에서 대부분의 약물은 주로 간에서 대사가 일어나며, 간에서의 약물대사는 CYP450효소가 중요하게 관여한다. 최근의 의약품은 다제병용을 고려하여 개발해야 되기 때문에, 약물의 대사에 어떤 CYP450효소가 관여하여 약물상호작용이 일어나는지를 평가하는 것은 매우 중요하다 할 수 있다. 이에 따라 각국의 규제기관에서는 신약개발과정에서 어떻게 약물상호작용연구를 해야 되는지에 관한 가이드라인을 마련하고 있다. 관련 연구를 통하여 최근 개정된 내용에는 특정 기질을 이용한 간접측정방식인 효소활성측정법 뿐만 아니라, 세포수준에서 직접 측정이 가능한 유전자발현측정법도 활용 가능함을 제시하고 있다.
본 연구에서는 시험관계에서 임상결과를 예측할 수 있는 모델로 알려진 사람일차간세포를 활용하여, 약물대사에 관여하는 주요 CYP450 효소(CYP1A2, CYP2B6, CYP2C9 및 CYP3A4)의 유도능을 평가할 수 있는 유전자발현측정법을 RT-PCR을 이용하여 확립하였다. 이를 보편화된 방법인 LC-MS/MS를 이용한 효소활성측정법과 비교평가를 진행하였다. 나아가, 신속하고 정확한 약물유도능 평가가 필요한 신약개발 초기단계를 위하여 약물대사효소 유전자발현 동시분석법을 개발하고자 하였으며, 다중PCR법을 이용하여 CYP450 동질효소 4종의 동시분석법을 개발하였다. 그리고 마이크로어레이법을 이용하여 권장기질에 의해 유의하게 발현하는 유전자를 검색하여, 신약개발 초기단계에 약물유도능을 확인할 수 있는 방법으로 제안하였다. 이를 표준작업지침서로 작성하여 의약품의 인∙허가심사의 과학적 근거 및 국내 의약연구자들의 약물상호작용평가연구에 활용하고자 수록하였다. 또한 RFP 요구사항 이외의 추가 연구로, CYP2C9을 추가하여 연구를 진행하였고, 확립한 시험법을 이용하여 폐동맥성 고혈압 치료제인 보센탄의 CYP450 동질효소 4종에 대한 약물유도능을 평가하였다.

Abstract ▼

In vivo metabolism of most drugs occurs primarily in the liver, and in the liver CYP450 enzyme is importantly involved in the drug metabolism. Since recent drugs should be developed with consideration of poly pharmacy, it is very important to evaluate which CYP450 enzyme is involved in drug metaboli

In vivo metabolism of most drugs occurs primarily in the liver, and in the liver CYP450 enzyme is importantly involved in the drug metabolism. Since recent drugs should be developed with consideration of poly pharmacy, it is very important to evaluate which CYP450 enzyme is involved in drug metabolism to cause drug interaction. Thus, regulatory agencies in each country have established guidelines on drug interaction studies during the development of new drugs. Through related research, the latest guideline is presented the possibility utilizing the mRNA expression measurement which can directly measure it at the cellular level as well as the enzyme activity measurement using specific-substrate which is the indirect measurement.
This study established mRNA expression measurement by using RT-PCR which could assess the induction potential of major CYP450 enzymes (CYP1A2, CYP2B6, CYP2C9 and CYP3A4) involved in drug metabolism by using primary human hepatocyte known as the model to predict clinical results in vitro. It was compared with enzyme activity measurement using LC-MS/MS which was the common method. Furthermore, for the early stage of development of new drug requiring rapid and accurate drug induction potential, we would like to develop the simultaneous determination of mRNA expression of CYP450 isozymes (CYP1A2, CYP2B6, CYP2C9 and CYP3A4) using multiplex-PCR. In addition, we searched genes which were significantly expressed by preferred substrate through microarray and proposed it as the method which could identify induction potential in early stage of development of new drugs.
We prepared and added them on standard operating procedures (SOP) to be utilized in scientific basis for licensing review of pharmaceutical products and studies on drug interaction assessment by domestic pharmaceutical researchers. In addition to RFP requirements, we added CYP2C9 as an additional study and conducted the research. We evaluated the induction potential for 4 kinds of CYP450 isozymes of bosentan as pulmonary arterial hypertension drug by using the established test method.

목차 Contents

• 표지 ... 1
• 자체연구개발과제 최종보고서 ... 2
• 국문 요약문 ... 3
• Summary ... 4
• 목차 ... 5
• Ⅰ. 연구개발과제 연구결과 ... 6
• 제1장 연구개발과제의 개요 ... 6
• 제2장 연구개발과제의 국내․외 연구개발 현황 ... 10
• 제3장 연구개발과제의 연구수행 내용 및 결과 ... 13
• 제4장 연구개발과제의 연구결과 고찰 및 결론 ... 64
• 제5장 연구개발과제의 목표달성도 및 관련분야에의 기여도 ... 70
• 제6장 연구개발과제 연구개발 결과 활용계획 ... 72
• 제7장 참고문헌 ... 74
• 제8장 첨부서류 ... 82
• 끝페이지 ... 89