초록 ▼

○ 연구 결과
1차년도:
(1) Vero세포에서의 바이러스역가가 같은 조건에서 시험된 mouse유래세포인 BALB/3T3세포나 C3H/3T3에 비해 10배 정도 높게 나오는 것으로 관찰되었지만 판독이 용이한 Vero 세포를 지속적으로 이용하기로 결정하였다. Acyclovir와 ganciclovir의 항바이러스효과는 같은 조건에서 Vero세포보다 mouse유래세포들에서 50배이상 크게 나타났다.
(2) 다양한 감염동물법 확립을 목적으로 mouse 피부감염을 이용한 zosteriform모델과 비강감염, 복강감염 및 대뇌

○ 연구 결과
1차년도:
(1) Vero세포에서의 바이러스역가가 같은 조건에서 시험된 mouse유래세포인 BALB/3T3세포나 C3H/3T3에 비해 10배 정도 높게 나오는 것으로 관찰되었지만 판독이 용이한 Vero 세포를 지속적으로 이용하기로 결정하였다. Acyclovir와 ganciclovir의 항바이러스효과는 같은 조건에서 Vero세포보다 mouse유래세포들에서 50배이상 크게 나타났다.
(2) 다양한 감염동물법 확립을 목적으로 mouse 피부감염을 이용한 zosteriform모델과 비강감염, 복강감염 및 대뇌감염방법을 확립하였다. 5 주령의 BALB/c mouse 사용을 기본으로 했는데, 복강감염의 경우 mousecp중에 따라 감염효과가 크게 달라짐이 확인되었고, 대뇌감염의 경우 병원성이 강하여 다른 감염법보다 1/200-1/1000 낮은 바이러스 접종량을 이용했다.
(3) 확립된 감염법을 이용하여 acyclovir의 in vivo 항바이러스효과를 조사했다. 하루 2회 복강투여시 부작용을 나타내는 지표인 LD₅₀는 56.2 mg/kg, 항바이러스약효 지표인 ED₅₀는 피부 감염, 비강감염, 대뇌감염순으로 각각 7.1,<5.0, 12.7mg/kg이었다. 세포배양체계에서 ACV의 독성지표인 CC₅₀는 세종류의 세포 모두 >100 ug/ml이었고, 항바이러스효과를 표시하는 EC₅₀는 Vero, BALB/3T3, C3H/3T3 세포순으로 각각 0.8, 0.012, 0.008 ug/ml이었다.
2차년도:
(1) 감염mouse로부터 적출된 조직의 바이러스역가를 Vero세포에서 plaque 검사법으로 조사했다.
(2) 최고 6 X 10⁵ PFU까지 검출되었고 비강, 대뇌 및 피부감염법 등 모델에 따라 바이러스증식이 활발히 일어나기 시작되는 시간 및 조직이 다르며, 진행정도도 다름을 알 수 있었다. 피부감염의 경우 뇌염모델인 비강 및 대뇌 감염과 전혀 다른 유형을 나타냄을 알 수 있었다.
비강감염의 경우 trigerminal nerves와 눈과 brain stem 등에서, 대뇌감염의 경우 대뇌와 소뇌에서, 피부감염에서는 일차 및 이차 감염부위의 피부에서 바이러스 증식이 활발함을 알 수 있었다
(3) 투여된 ACV 의 체내 조직내 바이러스 증식에 끼치는 영향은 IN에서 강력하게 나타났으며, 소량의 바이러스로도 질병정도 및 진행이 신속한 대뇌감염의 경우 바이러스역가도 감염후 가장 빨리 높아지기 시작하고 ACV치료효과도 가장 낮음을 확인할 수 있었다. ACV의 혈중농도를 측정하기 위하여 약물투여후 채취된 혈액내 약물농도에 따라 세포배양체계에서 바이러스증식을 저해력이 차이가 있는 점을 근거로 EC₅₀값을 희석배수로 산출하는 bioassay법을 확립하였다. HPLC로 분석한 결과와 상당히 유사하여 지속적으로 이용될 수 있음을 확인하였다. 또한 ACV 경구투여의 경우 흡수가 거의 되지 않음을 확인하였고, 피하 투여보다는 복강투여가 더 우수함을 확인할 수 있었다. 복강투여의 경우 45 분에서 90 분 사이에 최고 농도에 이르며 2시간 이후에는 급격히 감소하는 것을 확인할 수 있었다
3차년도 :
(l) Guinea pig 유래세포인 JH4세포에서의 바이러스 역가는 Vero세포에서와 유사하였다.
세포내에서의 acyclovir의 활성화 정도를 확인하기 위해 Vero, 143B, FTK143B 세포에서의 ACV-mono, di, triphosphate의 생성량을 deoxythymdine과 비교한 결과 ACV의 활성 에 바이러스 thymidine kinase의 중요성을 확인했다.
(2) Guinea pig 피부감염모댈을 확립하기 위하여 HSV을 피부감염시켰는데, 감염부위에 lesion이 형성되었으나 mouse와 달리 zosteriform을 형성하지 않고 털을 깎아야 하며 예민한 피부 반응 때문에 lesion score 결정이 어려웠으며,mouse model이 쉽고 뚜렷한 결과를 나타냄을 확인했다.
(3)Mouse xosterimodel에서의 ACV의 국소투여하여 약효를 조사했다.

Abstract ▼

○ Results
1) Test tube-and cell-based study
ㆍMouse-dervived and guinea pig-dervived cell cuture systems were establsihed.
ㆍVirus titration of the virus-infected mouse tissues were performed.
ㆍEx vivo induction of virus reactivation from the latency and detection of reactivated viruses by

○ Results
1) Test tube-and cell-based study
ㆍMouse-dervived and guinea pig-dervived cell cuture systems were establsihed.
ㆍVirus titration of the virus-infected mouse tissues were performed.
ㆍEx vivo induction of virus reactivation from the latency and detection of reactivated viruses by cell-based assay were performed
ㆍMeasurement of plasma concentration of acyclovir was performed by HPLC assay and also by cell-based assay
ㆍIntracellular concentration of acyclovir and its metabolites was measured by using HPLC method
2) Establishiment of infectious herpes simplex virus animal models
ㆍVarious mouse infection models for HSV-1 were established: cutaneous (zosteri), intranasal, intraperitoneal and intracerebral model
ㆍGuinea pig cutaneous model was established.
ㆍMouse tissue isolation for virus titeration and ex vivo reactivation was performed.
3) Studies on in vivo drug efficacy
ㆍIn vivo efficay of acyclovir was investigated in clinical aspects
ㆍIn vivo efficay of acyclovir was investigated in virological aspects
ㆍIn vivo efficay of acyclovir was investigated in establishment of latency
Part of results are summerized : To investigate viral pathogenesis and in vivo efficacy of acyclovir (ACV) in mouse HSV-1 encephalitis models, female BALB/c mice aged 5 weeks were inoculated with strain F either intranasally(IN) or intracerebrally (IC). ACV-treatment by intraperitorneal injection with 0, 5, 10 and 25 mg/kg b.i.d. for 5 days was commenced 1h after infection. Body weight and signs of clinical disease were noted daily up to 2 weeks.
ED₅₀ of ACV in IN infection was <5 mg/kg and 14.1 mg/kg in IC infection. Tissues of central nervous system were collected from 2 mice per group everyday up to 5 day p.i. and the virus titers were measured. In IN infection model, high titers in eyes and trigeminal nerves were observed. ACV-treatment showed significant reduction of the titers in all the isolated. In IC infection model, cerebrum, cerebellum and brain stem showed high virus titers. ACV-treatment showed less significant reduction of virus titers than that in IN infection model. Reactivation of explanted trigeminal nerves from mice 30 day p.i. was monitored. In all of ACV treated mice reactivation was observed, i.e. even the highest dose of ACV did not inhibit the establishment of viral latency.

목차 Contents

• 표지 ... 1
• 제출문 ... 3
• 목차 ... 4
• 연구개발사업 최종보고서 요약문 ... 6
• Project Summary ... 8
• 총괄연구개발과제 연구결과 ... 10
• 1. 총괄연구 개발과제의 최종 연구개발 목표 ... 10
• 2. 총괄연구 개발과제의 최종 연구개발 내용 및 결과 ... 12
• 3. 총괄연구개발과제의 연구결과 고찰 및 결론 ... 14
• 4. 총괄연구개발과제의 연구성과 및 목표달성도 ... 15
• 5. 총괄연구개발과제의 활용계획 ... 18
• 6. 첨부서류 ... 18
• 제1세부연구개발과제 연구결과 ... 19
• 1. 제1세부연구개발과제의 최종 연구개발 목표 ... 20
• 2. 제1세부연구개발과제의 연구대상 및 방법 ... 22
• 3. 제1세부연구개발과제의 최종 연구개발결과 ... 26
• 4. 제1세부연구개발과제의 연구결과 고찰 및 결론 ... 49
• 5. 제1세부연구개발과제의 연구성과 및 목표달성도 ... 51
• 6. 제1세부연구개발과제의 활용계획 ... 52
• 7. 참고문헌 ... 52
• 끝페이지 ... 54