초록 ▼

3. 연구개발사업의 연구결과
PPAR-γ 의 antagonist를 screening 하기 위해 먼저 RXR과 PPAR-γ의 상호작용을 이용하는 yeast two-hybrid system 검색방법을 개발하였다. 이것을 사용하여 8000여주의 방선균 배양액을 조사한 결과, 대조군과 비교시 PPAR-γ와 RXR이 transformation 된 효모에만 성장 저지원을 형성시키는 16개의 시료를 얻었으나 개발된 다른 검색법을 사용하여 조사한 결과 모두 독성올 나타내는 것으로 판명되었다. 곰팡이 배양액의 경우는 1800여 주에 대해서 실

3. 연구개발사업의 연구결과
PPAR-γ 의 antagonist를 screening 하기 위해 먼저 RXR과 PPAR-γ의 상호작용을 이용하는 yeast two-hybrid system 검색방법을 개발하였다. 이것을 사용하여 8000여주의 방선균 배양액을 조사한 결과, 대조군과 비교시 PPAR-γ와 RXR이 transformation 된 효모에만 성장 저지원을 형성시키는 16개의 시료를 얻었으나 개발된 다른 검색법을 사용하여 조사한 결과 모두 독성올 나타내는 것으로 판명되었다. 곰팡이 배양액의 경우는 1800여 주에 대해서 실험을 수행하였으나 활성을 나타내는 후보 시료를 얻지 못하였다. 그러나, 생약 추출물의 경우는 500개의 시료중 대조군과 비교하여 성장 저해능을 보이는 생약을 선별할 수 있었다. 그 중 천궁 (Cnidium offinicinale) 이 활성이 있음이 밝혀져서 이것을 여러 분획으로 나누어 분리 정제를 시행하였다. 그 결과, 두 가지 물질 (CO-6-A) 와 (CO-20-C) 이 RXR과 PPAR-γ의 상호작용에 영향을 주는 후보물질로 선정되었다. 한편 유기 화합물 라이브러리에서도 screeninng을 진행하여 S-10, S-18이라는 물질에서도 활성이 나타났다. 선정된 후보물질들이 지방세포로 분화되는 과정을 억제하는지를 조사하기 위해, pre-adipocyte로 알려진 3T3-L1 cell에 insulin, dexamethason, IDMX를 처리하여 adipocyte로 분화되도록 하는 방법을 확립하였다. 이 방법을 이용하여 실험한 결과, CO-20-C가 약한 활성을 나타냈으며, S-18의 경우는 강한 활성을 나타냈다.
결과 1. Yeast two-hybrid system을 이용한 PPAR-γ 억제제 탐색법 개발 및 이를 사용하여 후보 물질 탐색완료.
결과 2. 활성이 있는 생약으로부터 분리 정제를 시행하고 후보 물질의 구조를 결정함.
결과 3. 배양 세포를 이용한 지방 세포 분화법을 확립하고 후보 물질이 지방세포분화 억제능력이 있음을 확인함.

Abstract ▼

3. Results
To the purpose of the screening for PPAR-γ inhibitor, we have developed the Y2H system which is based on the interaction of RXR and PPAR-γ. Using this screening method, we have searched the 8000 culture broth from Streptomyces species, 1800 fungal culture extracts and 500 plant extract

3. Results
To the purpose of the screening for PPAR-γ inhibitor, we have developed the Y2H system which is based on the interaction of RXR and PPAR-γ. Using this screening method, we have searched the 8000 culture broth from Streptomyces species, 1800 fungal culture extracts and 500 plant extracts. There was no active candidates of the PPAR-γ inhibitors from the Streptomyces culture broth and fungal culture extracts. But we could find out active candidates from the plant extract of Cnidium offinicinale. The isolation and purification were proceeded, and finally the sσuctures of two active compounds, CQ-6-A and CQ-20-C, were determined. Also from the chemical library, we have found active compounds, S-10 and S-18, in Y2H system. To know the effects of these compounds on obesity, especially adipocyte differentiation which is related with PPAR-γ activation, we tested the established differentiation method which is induced from pre-adipocyte 3T3-L1 by adding the insulin, dexamethason, IBMX to the culture media. We have found the S-18 has a great inhibitory activity against the adipocyte differentiation, meanwhile CO-20-C has a little effect on the adipocyte differentiation.
Result 1. We have developed the Y2H system for screening PPAR-γ inhibitor, and applied to find the candidates from culture broth, plant extracts and organic compounds.
Result 2. We have found some active candidates for the PPAR-γ inhibitor, and purified them and the structures were determined.
Result 3. We have established the adipocyte differentiation method and found out that the active compounds showed the inhibitory effects on adipocyte differentiation.

목차 Contents

• 표지 ... 1
• 제출문 ... 3
• 목 차 ... 4
• 연구개발사업 최종보고서 요약문 ... 5
• Project Summery ... 7
• II.총괄연구개발과제 연구결과 ... 9
• 1. 총괄연구개발과제의 최종 연구개발 목표 ... 9
• 2. 연구개발내용의 우수성 및 창의성 ... 10
• 3. 총괄연구개발과제의 최종 연구개발 내용 및 결과 ... 12
• 4. 총괄연구개발과제의 연구결과 고찰 및 결론 ... 53
• 5. 총괄연구개발과제의 연구성과 및 목표달성도 ... 54
• 6. 총괄연구개발과제의 활용계획 ... 56
• 7. 참고문헌 ... 57
• 끝페이지 ... 60