보고서 정보
주관연구기관 |
고려대학교 Korea University |
보고서유형 | 최종보고서 |
발행국가 | 대한민국 |
언어 |
한국어
|
발행년월 | 2009-04 |
과제시작연도 |
2008 |
주관부처 |
농림부 Ministry of Agriculture and Forestry |
등록번호 |
TRKO201400022475 |
과제고유번호 |
1545000225 |
사업명 |
농림기술개발 |
DB 구축일자 |
2014-11-10
|
초록
○ 연구결과
국내에 재배되고 있는 식물자원들을 최적추출법을 통해 추출한 후 각각의 in vitro assay를 통해 acetylcholinesterase 저해활성, 뇌신경 보호활성, 간암억제 활성을 가지고 있는 시료로 각각 탱자, 석류, 유기농 녹차를 선정하였고, 활성성분을 분리·정제하는 과정에서 in vivo assay를 통해 효능을 확인하였으며, 각각 독성검사 결과 무독성의 물질임을 확인하였다. 또한 각각의 시료를 이용하여 시제품을 만들어 공업적 실용화 가능성을 확인하였다.
Abstract
▼
Alzheimer’s disease (AD) was discovered by Dr. Alois Alzheimer in 1907, and is described as a degenerative disease of the central nervous system with many cognitive and neuropsychiatric manifestations that result in progressive disability and eventual incapacitation. AD is not just among the leading
Alzheimer’s disease (AD) was discovered by Dr. Alois Alzheimer in 1907, and is described as a degenerative disease of the central nervous system with many cognitive and neuropsychiatric manifestations that result in progressive disability and eventual incapacitation. AD is not just among the leading causes of senile dementia, but it is also the most prevalent neurodegenerative disease affecting populations worldwide, and thus is an increasingly threatening international health problem. According to the report from the Alzheimer’s Association, one in eight Americans over the age of 65 and about half of Americans over the age 85 currently suffer from this disease. Moreover, the annual economic cost of AD health care expenses and lost wages for both patients and caregivers are estimated to be approximately 80-100 billion dollars. With the present rate of growth among the elderly population, it is predicted that around 16 million seniors will be affected by 2050. AD patients present with a progressive loss of cholinergic synapses in brain regions associated with higher mental functions, mainly the hippocampus and neocortex. In the AD patients a decrease in acetylcholine (ACh), a neurotransmitter, appears to be a critical element in the development of dementia; this finding has led to research on ways to enhance diminished levels of cholinergic neurotransmitter. Hence, AD and other forms of dementia could be treated by the use of agents that restore the level of acetylcholine through inhibition of both two major forms of cholinesterase: acetylcholinesterase (AChE) and butyrylcholinesterase (BChE). Moreover, the inhibition of AChE plays a key role not only in enhancing cholinergic transmission in the brain, but also in reducing the aggregation of amyloid beta peptide (Ab) and the formation of the neurotoxic fibrils in AD. Thus far, AChE inhibitors approved by the U.S. Food and Drug Administration for the treatment of symptomatic patients with mild to moderate AD are tacrine, donepezil, and rivastigmine.
Despite intensive advancement in research, effective therapeutic options against AD are limited, and have thus increased demand for new drugs. Polyphenolic compounds from fruits and vegetables are currently gaining interest for their beneficial effects, including antioxidative, antiviral, anticancer, and anti-inflammatory effects, as well as the prevention of cardiovascular diseases. However, previous interest in these phytochemicals, with respect to their health-promoting effects, has primarily been focused on examining their roles in protection against cancers and ischemic heart disease. Few studies have investigated their effects on brain functions and neurodegenerative diseases.
In this research project, various Korean plants were screened in a search for effective AChE inhibitors. Among these plants, the ethanol extract of Poncirus trifoliate was selected for the isolation and purification of an AChE inhibitor because it showed the highest inhibitory activity. To separate the active compound from the extract of Poncirus trifoliate, solvent partition, open column chromatography, thin layer chromatography (TLC), and high performance liquid chromatography (HPLC) were also utilized. The isolated compound was then analyzed by EI-MS and 13C/1H-NMR to elucidate the putative chemical structure. To confirm the attenuating effect of the extract of Poncirus trifoliate against trimethyltin (TMT)-induced learning and memory impairment, in vivo behavior tests, i.e. Y-maze test and passive avoidance test, were performed.
On the other hand, the amyloid peptide (A ) accumulates β β in the AD brain. And many researchers believe this peptide plays central role to the pathogenesis of this disorder. In addition, AD brains are characterized by extensive oxidative stress. That is manifested by lipid peroxidation, free radical formation, protein oxidation and DNA/RNA oxidation.
Overproduction of Aβ by genetic [i.e. mutations in APP or in presenilins or the presence of apolipoprotein E4 allele (ApoE4)] or other mechanisms (i.e. oxidative stress) leads to Aβ-associated free-radical oxidative stress. This oxidative stress is manifested by reactive oxygen species (ROS) formation, lipid peroxidation and subsequent modification of proteins by the reactive lipid peroxidation products such as 4-hydroxy-2-trans-nonenal (HNE) and acrolein. Other consequences of Aβ-associated oxidative stress are free fatty-acid (FFA) release, protein oxidation, Ca2+ dyshomeostasis (with subsequent alterations in mitochondrial function, oxidative stress, activation of phospholipase A2, cytoskeletal proteins, and induction of apoptosis pathways), mitochondrial impairment, peroxynitrite formation, inflammatory response, apoptosis and other cellular responses. Ultimately, the neuron dies.
Antioxidants are able to interfere with most, if not all, of these processes, including the neurotoxicity. This is consistent with the concept of Aβ-associated oxidative stress and neurodegeneration in AD brain.
To search for a protector against Aβ-induced oxidative stress, we screened various plant material extracts. The ethanol extract of Punica granatum L. was selected by screening. The ethanol extract of Punica granatum L. was partitioned with hexane, chloroform and ethyl acetate, respectively. The fraction of ethyl acetate showed the highest protective effect against oxidative stress. The fraction was subjected to silica-gel open column chromatography. The eighth fraction (second fraction of chloroform and ethanol = 80:20, v/v) of thirty three fractions was selected. The fraction was separated by TLC. The fifth band (Rf value 0.47) represented the highest activity. Then the obtained sample was dissolved in ethanol and separated on HPLC using C18 μ-BondapakTM column. The peak appeared at 236.8 ㎚. A significant single peak was measured at 41 min. The isolated sample was analyzed by EI-MS and 13 C/1 H-NMR to predict chemical structures. The protector was identified as the 2,4-Di-tert-butylphenol. In vivo experiment, treatment with the ethanol extract of Punica granatum L. ameliorated the Aβ1-42-induced learming and memory impariment in both Y-maze and passive avoidance test.
We also evaluate the anti-metastatic effect and hepatoprotective activity of Ulmus Davidiana plancn. japonica Nakai (UDN) which has been used widely as Korean traditional medicine for edema and inflammation. It was shown that UDN ethanol extract (UDNe) was most active in the induction of hepatocarcinoma apoptosis and inhibited the expression of MMP-2 and -9. UDNe showed the highest activity among all the various fractions in a cell viability study. In in vitro and in vivo studies to test the hepatoproective activities, UDNe increased the activity of alcohol dehydrogenase (ADH; 105%). Whereas the levels of total cholesterol, TG, LDL cholesterol, AST and ALT of serum of rats were decreased by feeding UDNe, HDL cholesterol level was significantly increased (20 ㎎/㎗). In addition, the levels of hepatic total cholesterol, LDL cholesterol and TG of UDNe group were lower than that of ethanol treated group. The amount of liver injuries were measured by histopathological studies. UDNe group showed a decline in liver tissue damages and TG contents (40%) as compared with the ethanol group. These results suggest that UDNe has strong protective activity against the liver disease induced by ethanol. These findings could provide the therapeutic potential of ethanol extracts of UDN on the metastasis and alcohol-induced disease, and it should be meaningful to develop new effective functional foods on diseases related with fatty liver, cardiovascular diseases, cirrhosis, hypertension, obesity and liver cancer.
The bio-reactive compounds of selected samples, Poncirus trifoliate, Punica granatum L. and Ulmus Davidiana plancn. japonica Nakai were isolated and purified with industrial-level procedure. Extracts of each samples were decolorized with low cost absorbents and purified by ultrafiltration using Milipore masterflex system. Finally, each purified bio-reactive compounds was formulated as the types of beverage, capsule and granule.
목차 Contents
- 제출문 ... 1
- 요약문 ... 2
- SUMMARY ... 6
- CONTENTS ... 9
- 목차 ... 15
- 제 1 장 연구개발과제의 개요 ... 22
- 제 1절 연구개발의 목적 ... 22
- 제 2절 연구개발 대상 기술의 경제적?산업적 중요성 ... 24
- 1. 기술적 측면 ... 24
- 가. 제 1세부과제: 뇌세포 신호전달성분 분해효소를 억제하는 유효성분의 건강기능 식품화 ... 24
- 나. 제 2세부과제: 뇌신경 세포 상해로부터 뇌세포를 보호하는 유효성분의 건강기능 식품화 ... 24
- 다. 제 3세부과제: 간세포 내의 정보전달 억제를 회복시키는 간암억제 유효성분의 건강기능 식품화 ... 25
- 2. 경제ㆍ산업적 측면 ... 26
- 3. 사회ㆍ문화적 측면 ... 26
- 제 2 장 국내외 기술개발 현황 ... 28
- 제 1절 연구개발 대상 기술의 국내?외 현황 ... 28
- 1. 해외 기술개발 현황 및 수준 ... 28
- 2. 국내 기술개발 현황 및 수준 ... 28
- 제 3 장 연구개발수행 내용 및 결과 ... 31
- 제 1절 뇌세포 신호전달성분 분해효소를 억제하는 유효성분의 건강기능 식품화 ... 31
- 1. 서설 ... 31
- 2. 재료 ... 32
- 3. 실험방법 ... 32
- 가. AChE 저해활성 물질 측정을 위한 in vitro assay계 확립 ... 32
- (1) 1차 검색용 시료 추출조건과 방법 ... 32
- (2) In vitro assay계의 확립 ... 32
- 나. AChE 저해활성을 갖는 시료의 검색 및 선정 ... 33
- 다. In vitro 세포독성 실험 ... 33
- 라. AChE 저해활성 측정을 위한 in vivo assay계 확립, 선정 시료의 활성검사 및 독성검사 ... 34
- (1) In vivo assay계 확립 ... 34
- (2) 최종 선정된 AChE 억제 시료의 in vivo 독성실험 ... 35
- (3) Y-maze ... 35
- (4) Passive avoidance test ... 36
- 마. 추출법 확립 및 예비정제 ... 37
- (1) 추출법 확립 ... 37
- (2) 예비정제법의 확립 ... 37
- (3) Open column chromatography ... 39
- (4) Preparative thin layer chromatography (PLC) ... 39
- (5) High performance liquid chromatography (HPLC) ... 40
- 바. 정제된 AChE 저해 활성물질 구조분석 ... 40
- 사. 선정된 시료로부터 분리한 신경전달물질 분해효소 억제물질의 2차 in vivo test ... 40
- (1) In vivo assay계 확립 및 구조가 밝혀진 활성물질의 활성측정 ... 40
- (2) Y-maze test ... 41
- (3) Passive avoidance test ... 41
- (4) 적출된 뇌 조직을 이용한 AChE activity 측정 및 지질과산화도 측정 ... 41
- (5) 활성물질의 in vivo상의 독성실험 ... 41
- 아. 신경전달물질 분해효소 억제물질의 공업적 실용화 ... 42
- (1) 최종적으로 선정된 시료들로부터 추출조건의 최적화 및 공업적 수준의 정제방법 확립 ... 42
- (2) 연질 캡슐 제작 ... 42
- (3) 드링크제 제작 ... 43
- (4) 과립제 제제 ... 43
- 자. 제품의 외관 및 안정성 검사 ... 43
- 4. 실험결과 ... 43
- 가. AChE 저해활성을 갖는 시료의 검색 및 선정 ... 43
- 나. In vitro 세포독성 실험 ... 47
- 다. AChE 저해활성 측정을 위한 in vivo assay계 확립 과 선정 시료의 활성 및 독성검사 ... 48
- (1) 최종 선정된 AChE 억제 활성물질의 in vivo 독성실험 ... 48
- (2) Y-maze ... 51
- (3) Passive avoidance test ... 53
- 라. Poncirus trifoliata 추출물로부터 AChE 저해 활성물질 탐색 ... 55
- (1) Solvent partition ... 55
- (2) Open column chromatography ... 56
- (3) Preparative thin layer chromatography (PLC) ... 57
- (4) High performance liquid chromatography (HPLC) ... 58
- 마. 정제된 AChE 저해 활성물질 구조분석 ... 59
- 바. 선정된 시료로부터 분리한 신경전달물질 분해효소 억제물질의 2차in vivo test ... 62
- (1) In vivo assay계 확립 및 methoxsalen의 활성측정 ... 62
- (2) Y-maze test ... 62
- (3) Passive avoidance test ... 64
- (4) 적출된 뇌 조직을 이용한 AChE activity 측정 및 지질과산화도 측정 ... 65
- (5) 활성물질의 acute toxicity 측정을 위한 간독성 실험 ... 67
- 사. 신경전달물질 분해효소 억제물질의 공업적 실용화 ... 69
- (1) 대량 추출 및 대량정제법 확립 ... 69
- (2) 추출물의 공업적 식품화 시험 ... 71
- (3) 제품의 외관 및 안정성 검사 ... 72
- 제 2절 뇌신경세포 상해로부터 뇌세포를 보호하는 유효성분의 건강기능 식품화 ... 75
- 1. 서설 ... 75
- 2. 재료 및 실험 방법 ... 76
- 가. 재료 ... 76
- 나. 실험방법 ... 77
- (1) In vitro assay계의 확립 및 후보식용식물의 1차 선정 ... 77
- (가) 세포배양 ... 77
- (나) 1차 검색용 시료 추출조건과 방법 ... 77
- (다) DCF-DA assay ... 77
- (라) MTT reduction assay ... 79
- (마) 선정된 식용식물자원 대량추출 및 시료조제 ... 81
- (2) 활성 phytochemicals의 분리 및 정제 ... 82
- (가) Solvent partition ... 82
- (나) Open column chromatography ... 83
- (다) Preparative thin layer chromatography (PLC) ... 83
- (라) High performance liquid chromatography (HPLC) ... 83
- (3) 정제된 시료로부터 뇌세포를 보호하는 유효성분의 구조분석 ... 84
- (가) NMR을 통한 구조 분석 ... 84
- (나) Electronic ionization mass (EI-MS)를 통한 분자량 측정 ... 84
- (4) 뇌신경세포 손상 저해활성 측정을 위한 in vivo assay계 확립 과 선정시료의 활성 및 독성검사 ... 84
- (가) In vivo assay계 확립 ... 84
- (나) Punica granatum extract의in vivo 독성실험 ... 84
- (다) Y-maze test ... 84
- (라) Passive avoidance test ... 85
- 3. 결과 ... 85
- 가. In vitro assay계의 확립 및 후보식용식물의 선정 ... 85
- (1) 1차 선정 결과 ... 85
- (2) 시료 최종 선정 및 세포독성 실험 ... 91
- 나. 활성 phytochemicals의 분리 및 정제 ... 93
- (1) Solvent partition ... 93
- (2) 용매분획별 in vitro assay 결과 ... 94
- (가) DCF-DA assay ... 94
- (나) MTT reduction assay ... 95
- (3) Open column chromatography ... 97
- (4) Open column chromatography 분획의 in vitro assay 결과 ... 97
- (가) DCF-DA assay ... 97
- (나) MTT reduction assay ... 99
- (5) PLC ... 102
- (가) DCF-DA assay ... 102
- (나) MTT reduction assay ... 103
- (6) HPLC ... 104
- 다. 정제된 시료로부터 뇌세포를 보호하는 유효성분의 구조분석 ... 105
- (1) NMR을 통한 구조 분석 ... 105
- (2) EI-MS를 통한 분자량 측정 ... 107
- 라. In vivo test를 통한 석류 추출물의 효과확인 ... 108
- (1) 석류 추출물의 in vivo 독성실험 ... 108
- (2) 공간인지능 및 기억학습능력의 1차 in vivo test결과 ... 111
- (가) Y-maze test ... 111
- (나) Passive avoidance test ... 112
- (3) 석류 추출물로부터 분리된 활성물질의 2차 in vivo 독성실험 ... 113
- (4) 석류 추출물로부터 분리된 활성물질의 2차 in vivo 행동실험 ... 118
- (가) Y-maze test ... 118
- (나) Passive avoidance test ... 119
- 마. 활성 물질의 공업적 실용화 ... 120
- (1) 가공 적성 시험 ... 120
- (2) 시작품 제작 ... 121
- (가) 연질 캡슐 제작 ... 121
- (나) 농축액 및 드링크제제 제작 ... 122
- (다) 과립제 제작 ... 123
- (3) 제품의 외관 및 안정성 검사 ... 124
- 제 3절 간세포 내의 정보전달 억제를 회복시키는 간암억제 유효성분의 건강기능 식품화 ... 126
- 1. 서설 ... 126
- 2. 재료 및 실험방법 ... 127
- 가. 천연소재의 간암억제활성 검색 ... 127
- (1) 용매추출에 의한 간암 억제 효능을 갖는 추출물 제조법 확립 ... 127
- (2) 항산화 활성 조사법 ... 128
- (3) 활성성분 정량 ... 128
- (4) In vitro 세포독성 조사 ... 128
- (5) 활성검색방법 확립 ... 129
- (가) 세포간 정보전달 회복효과 측정 ... 129
- (나) FOX assay ... 129
- (다) MMP 억제능을 통한 암전이 억제효과 측정 ... 129
- 나. 선정된 활성 추출물로부터 유효성분의 확보를 위한 특성 검토 및 추출물 전 처리 조건 확립 ... 130
- (1) 유근피의 항암 및 항암전이 효과 ... 130
- (가) 천연물 추출 조건 ... 130
- (나) MTT assay ... 130
- (2) 암전이 억제효과 검색 ... 131
- (가) Gelatin zymography ... 131
- (3) 세포간 갭결합 신호전달 회복효과 검색 ... 131
- (4) 활성물질의 생물학적유용성 및 혈관 신생성 억제효과 검토 ... 131
- (가) Caco-2 human intestinal model ... 132
- (나) Chorioallantoic membrane (CAM) assay ... 132
- (5) 항산화 효과 입증 및 부분정제 유효성분 함량 분석 ... 133
- (가) 항산화 효과 검토 (DPPH assay) ... 133
- (나) 활성성분 분석 ... 133
- (6) 추출물의 활성 물질의 규명 ... 133
- (가) MTT assay를 이용한 용매별 분획의 활성 입증 ... 133
- (나) 용매 Fraction의 Molecular Weight에 의한 분획물질의 활성 입증 ... 134
- (다) HPLC를 통한 최종 활성 분획 물질의 분리 ... 134
- (7) 알코올에 의한 간 손상에 대한 보호 능력 입증 ... 134
- (가) 알코올 분해효소인 alcohol dehydrogenase와 aldehyde dehydrogenase의 활성 측정 ... 134
- (나) 동물실험을 통한 간 보호 능력 측정 ... 134
- 다. 추출물의 간암 활성 입증 ... 135
- (1) CAA (Cellular Antioxidant Activity) assay를 통한 유근피 추출물의 활성 측정 ... 135
- (2) Annexin V-PI staining을 통한 apoptosis 유도 현상 관찰 ... 136
- (3) ELISA법을 이용한 간암전이 지표 효소인 MMP-2와 MMP-9 정량 ... 136
- 라. 파래의 항암 효과 ... 136
- (1) MTT assay ... 136
- (2) 파래의 항혈전 효과 ... 136
- (가) 추출 용매에 따른 항응고 활성 검토 ... 137
- (나) 알칼리 추출 농도에 따른 항응고 활성 검토 ... 137
- (다) Activated partial thromboplastin time (APTT)에 의한 항응고 활성측정 ... 137
- 마. 유근피 추출물로부터 간암억제 유효성분의 공업적 실용화 ... 137
- (1) 유근피 추출물을 이용한 연질 캡슐 제작 ... 137
- (2) 유근피 추출물을 이용한 드링크제 제작 ... 138
- (3) 유근피 추출물을 이용한 과립제 제제 ... 138
- 바. 제품의 외관 및 안정성 검사 ... 138
- 3. 결과 ... 138
- 가. 용매추출에 의한 간암 억제 효능을 갖는 추출물 최적조건 확립 ... 138
- 나. 복합물질에 대한 항산화 활성 비교법 확립 ... 139
- 다. In vitro 세포독성 조사 ... 141
- 라. 활성검색방법 확립 ... 142
- (1) 세포간 정보전달 회복효과 측정 ... 142
- (2) 암전이 억제효과 측정 ... 144
- 마. 선정된 활성 추출물로부터 유효성분의 확보를 위한 특성 검토 및 추출물 전 처리 조건 확립 ... 144
- (1) 간암세포 증식 억제효과 ... 145
- (2) 암전이 억제효과 검색 ... 146
- (3) 세포간 갭결합 신호전달 회복효과 검색 ... 147
- (4) 항산화 효과 입증 및 부분정제 유효성분 함량 분석 ... 149
- (5) 부분정제 획분의 활성유지 확인 ... 150
- 바. 알코올에 의한 간 손상에 대한 보호 능력 입증 ... 151
- (1) 알코올 분해효소인 alcohol dehydrogenase와 aldehyde dehydrogenase의 활성 측정 ... 151
- (2) 동물실험을 통한 간 보호 능력 측정 ... 152
- (가) In vivo assay계 확립 및 유근피 추출물의 활성 측정 ... 152
- (나) 혈청분석에따른aspartate aminotransferase (AST), alanine aminotransferase (ALT), serum triglyceride(STG), total cholesterol, low density lipoprotein (LDL) cholesterol, high density lipoprotein (HDL) cholesterol의활성측정 ... 152
- (다) 조직 분석에 따른 hepatic triglyceride (STG), total cholesterol, low density lipoprotein (LDL) cholesterol, high density lipoprotein (HDL) cholesterol의 활성 측정 ... 155
- (라) 조직 절편 분석을 통한 세포 손상도 측정 및 triglyceride 측정 ... 156
- 사. 추출물의 간암 활성 입증 ... 158
- (1) CAA(Cellular Antioxidant Activity) assay를 통한 유근피 추출물의 활성 측정 ... 158
- (2) Annexin V-PI staining을 통한 Apoptosis 유도 현상 관찰 ... 159
- (3) ELISA법을 이용한 간암전이 지표 효소인 MMP-2와 MMP-9 정량 ... 160
- 아. 추출물의 활성 물질의 규명 ... 160
- (1) MTT assay를 이용한 용매별 분획의 활성 입증 ... 160
- (2) 용매 fraction의 molecular weight에 의한 분획물질의 활성 입증 ... 161
- (3) HPLC를 통한 최종 활성 분획 물질의 분리 ... 162
- 자. 파래의 항암, 항혈전 효과 ... 163
- (1) 파래 추출물의 HepG2의 생존율에 미치는 영향 ... 163
- (2) 파래 추출물의 B16/F10의 생존율에 미치는 영향 ... 164
- (3) 파래 추출물의 HT1080의 생존율에 미치는 영향 ... 165
- (4) 파래 추출물의 MCF7의 생존율에 미치는 영향 ... 166
- (5) 파래의 항혈전 효과 ... 167
- (가) 추출 용매에 따른 항응고 활성 검토 ... 167
- (나) 농도에 따른 항응고 활성의 검토 ... 169
- 차. 유근피 추출물로부터 간암억제 유효성분의 공업적 실용화 ... 170
- (1) 유근피 추출물을 이용한 연질 캡슐 제작 ... 170
- (2) 유근피 추출물을 이용한 드링크제 및 농축액 제작 ... 171
- (3) 유근피 추출물을 이용한 과립제 및 캡슐 제제 ... 172
- 카. 제품의 외관 및 안정성 검사 ... 172
- 제 4장 목표 달성도 및 관련분야에의 기여도 ... 175
- 제 1절 연구 개발 목표의 달성도 ... 175
- 1. 연차별 연구 개발 목표 달성도 ... 175
- (1) 1차년도 연구 개발 목표 달성도 ... 175
- (2) 2차년도 연구 개발 목표 달성도 ... 176
- (3) 3차년도 연구 개발 목표 달성도 ... 177
- 2. 평가 착안점 ... 178
- 제 2절 관련 분야에의 기여도 ... 179
- 1. 학문ㆍ기술적 측면 ... 179
- 2. 경제ㆍ산업적 측면 ... 179
- 제 5장 연구개발결과의 활용계획 ... 180
- 제 1절 추가연구의 필요성 ... 180
- 제 2절 타 연구에의 응용 ... 180
- 제 3절 기업화 추진방안 ... 180
- 제 6장 연구개발 과정에서 수집한 해외과학기술정보 ... 182
- 1. Measurement of oxidative stress (DCF-DA method) ... 182
- 2. Assessment of cell viability (MTT reduction assay) ... 182
- 3. Assessment of AChE activity (Ellman ... 182
- 4. Evaluation of learning and memory capacity using in vivo model ... 183
- 가. Y-maze test ... 183
- 나. Passive avoidance test ... 183
- 제 7장 참고문헌 ... 184
- 부 록 ... 187
- 끝페이지 ... 216
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