보고서 정보
주관연구기관 |
부경대학교 Pukyong National University |
보고서유형 | 최종보고서 |
발행국가 | 대한민국 |
언어 |
한국어
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발행년월 | 2007-09 |
과제시작연도 |
2005 |
주관부처 |
해양수산부 Ministry of Oceans and Fisheries |
등록번호 |
TRKO201400022769 |
과제고유번호 |
1520001245 |
사업명 |
특정수산기술개발 |
DB 구축일자 |
2014-11-10
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초록
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Ⅳ. 연구개발 결과
1. Vibrio spp.와 E. tarda의 β-lactamase
다양한 bla gene에 대한 primer를 이용하여 PCR을 실시한 결과 1997년부터 2003년까지의 한국내 penicillin resistant Vibrio spp. 36에서 모두 negative 결과를 보여 주었다. 새로운 bla gene의 cloning에서 우리는 Vibrio alginolyticus KV-3 로부터 bla VAK-1을 얻을 수 있었다. 이 유전자의 존재를 1997년으로부터 분리된 penicillin 내성의 3
Ⅳ. 연구개발 결과
1. Vibrio spp.와 E. tarda의 β-lactamase
다양한 bla gene에 대한 primer를 이용하여 PCR을 실시한 결과 1997년부터 2003년까지의 한국내 penicillin resistant Vibrio spp. 36에서 모두 negative 결과를 보여 주었다. 새로운 bla gene의 cloning에서 우리는 Vibrio alginolyticus KV-3 로부터 bla VAK-1을 얻을 수 있었다. 이 유전자의 존재를 1997년으로부터 분리된 penicillin 내성의 36 strains 에 대하여 PCR 분석을 실시하여 한국 내 spreading에 대한 추측을 할 수 있게 하였다. 이 유전자는 nonmobile로, chromosome에 존재하는 것으로 확인되었으며 Phylogenetic analysis에서 class A에 속하였다.
Edwardsiella tarda의 penicillin 내성 유전자 특성 분석을 위하여 1993년부터 2003년까지 동해안, 남해안, 제주 등지에 위치한 양어장의 병어에서 115개의 내성균을 분리 하였고 이 중 12개의 균주가 ampicillin에 256㎍/㎖ 이상의 MIC 값을 나타내었다. 분석 결과 ampicillin에 내성을 나타내는 Edwardsiella tarda에서의 β-lactam 계열 항균제 MIC 값은 penicillin 계열에서는 매우 높게 나타났지만 cephalosporins 계열에서는 상대적으로 낮은 MIC 값을 나타내었다. 이것은 E. tarda에서의 ESBL gene은 아직 존재하지 않는다는 것을 의미하며 광범위 β-lactam 항균제가 훌륭한 치료제가 될 수 있음을 암시한다.
또한 12개의 ampicillin 내성 E. tarda 중에서 10개에서 TEM-1 gene이 확인 되었다. TEM-1 gene이 확인된10개 균주 중 8개 균주에서 transformant가 확인 되었다. 이것으로 TEM-1 gene이 이동성이 있는 plasmid에 존재 하는 것을 알 수 있으며 양식 어장에서 ampicillin에 내성을 나타내는 E. tarda가 발생 할 때 빠른 시간 내에 내성균의 비율이 증가 될 수 있음을 예상 할 수 있다. 그리고 TEM gene의 promoter에는 P3, Pa/Pb, P4, P5 등 4가지 형태가 있다고 알려져 있는데 이것은 promoter 부위의 nucleotide가 한 개 내지 두개가 변화 하여 생긴 것으로 P3가 가장 약하고 P5가 가장 강력한 promoter로 알려져 있다. 본 연구에서 E. tarda에 확인된 TEM-1 gene은 모두 P3의 약한 promoter를 가지고 있어 그 내성 level의 위험성 정도는 비교적 완화된 형태로 존재함을 확인 하였다. 그러므로 본 part에서의 결론은 우리나라 Pe 내성균은 아직 유전적 측면에서 매우 위험한 level로까지 진화하였다고 보기는 어렵다고 할 수 있다.
2. Edwardsiella tarda의 quinolone 내성 관련 유전자들
E. tarda의 quinolone 내성 획득의 원인을 분석하기 위하여 여러 균들의 gyrA, B gene을 비교하여 degenerated primer를 제작하였고 이 primer를 이용한 PCR로 QRDR의 염기서열을 결정하였으며, cassette ligation-mediated PCR법으로 gyrA와 B의 전체 염기서열을 결정할 수 있었다. 또한 parC와 parE에 대한 모든 유전적 정보도 획득 하였다. 이렇게 결정된 gyrA gene을 바탕으로 1994년부터 2003년까지 우리나라 양어장의 감염어로부터 분리된 E. tarda의 QRDR을 분석한 결과 83번 아미노산의 변이를 확인 할 수 있었으며, 인위적인 실험에 의해서 획득된 내성균에서는 87번 아미노산의 변이를 확인할 수 있었다.
이는 E. coli를 포함하는 다수 그람 음성균과 같은 결과로 GyrA의 83, 87번 아미노산의 변이가 quinolone 내성 획득에 주요한 원인 중의 하나임을 알 수 있었다. 결론적으로 본 part의 연구에서는 E. tarda gyrA, B par C, E gene 의 총 4개 quinolone 관련 모든 유전자에 관한 최초의 보고로서 그 mutation의 특성과 내성의 진화에 대하여 정밀 분석 하였다.
3. Multiplex PCR을 이용한 어병 세균의 tet 유전자 분석
우리나라 양식현장의 병어로부터 분리한 어병 세균 중에 tetracycline에 대한 내성균의 비율을 분석하였으며, 이들 내성균이 갖는 내성 유전자 분석을 위하여 tet A, B, C, D, E, 그리고 G에 대해 그 크기가 구별되는 specific primers를 제작한 후 PCR기법으로 어병 세균의 Tc 내성 유전자의 분포와 기원을 간접적으로 추정하고자 하였다. 1993년부터 2003년까지 우리나라 양식장에서 분리된 대부분의 어병 세균은 E. tarda와 Vibrio spp.로 나타났으며, tetracycline에 대한 내성균의 비율은 각각 15%, 26%임을 확인할 수 있었다.
그리고 이러한 내성균들에는 어떤 종류의 tet gene이 분포하고 있는지 분석한 결과 E. tarda에서 8균주는 tet A, 7균주는 tet D, 2균주는 tet B, 그리고 tet A․D, tet A․G와 같이 두 종류의 gene을 가진 균주가 각각 2, 1로 나타났으며, Vibrio sp. 균주는 모두 tet B를 가짐을 확인할 수 있었다. 그리고 나머지 A. hydrophila의 두 균주에서는 tet E․C, tet C, P. micrabilis의 두 균주는 모두 tet C, 그리고 Acinetobacter lwoffii는 tet B가 있음을 확인할 수 있었다. 양어장 환경에서 채집된 시료를 분석한 결과, 양식장 주변 해수에서는 6.7%, 저질에서는 24.4% 그리고 net의 부착물질에서는 30.7%의 내성균 빈도를 보였으며, 항생제를 투여한 조피볼락의 장내 세균에서의 내성균 빈도는 2.83%, 항생제를 투여하지 않은 조피볼락은 0.25%의 내성균 빈도를 보여 항생제를 투여한 어류가 항생제를 투여하지 않은 어류에 비하여 높게 나타났다. 분리된 내성균에는 tet B, tet C만을 확인할 수 있어 대부분이 두 종류의 내성 유전자에 편중되게 나타났다. 항생제를 투여한 후 조피볼락의 장내 세균에서의 내성 변화를 관찰한 결과 항생제 투여가 끝난 후 1, 4일째까지는 85, 83%로 내성균의 빈도가 증가하다가 그 후로는 감소하는 경향을 보였으며, 실험 마지막 날인 20일에는 항생제를 투여하기 전과 같은 내성균의 빈도를 나타냈다. 검출된 내성균으로부터 whole cell bacteria를 분리하여 어떤 종류의 tet gene이 존재하는지 PCR을 실시한 결과 tet B, tet C를 확인할 수 있었다. 즉 우리나라의 Tc 내성균은 net의 부착물질에 가장 많고 유전자는 tet B를 가장 많이 활용하고 있으며 종류에 있어서는 비교적 제한적이라고 할 수 있다.
4. 수입 해산어와 관상어에서의 Tc 내성 유전자
한국의 수생 환경중의 tet gene의 분포를 PCR 기법으로 결정해보기 위해서, 한국 근해로부터, 수년에 걸쳐 테트라사이클린에 내성을 나타내는 32종의 Vibrio spp.와 16종의 장내 세균을 분리하였다. Efflux gene인 tet(A), tet(B), tet(C), tet(D), tet(E) 그리고 tet(G)을 검출하기 위한 multiplex PCR 방법에 의해 분리 균주들을 테스트한 결과, 장내 세균에서는 다양한 종류의 tet gene이 검출되었으나, Vibrio sp.에서는 여섯 개의 tet gene 중 tet(B) 만이 나타났다. 또 tet(K), tet(L) 및 tet(M)에 대한 특이적인 primer를 사용하여 분리 균주들을 시험해본 결과, 장내 세균 중에서 tet(K)와 tet(M)를 지닌 균이 각각 1균주씩 검출되었고, 놀랍게도 모든 Vibrio spp.에서는 ribosomal protection gene인 tet(M)이 검출되었다. 따라서 한국에서 발견된 모든 Vibrio spp.에서는, tet(B)와 함께 tet(M)이 테트라사이클린 내성 인자로서 존재한다는 것을 알 수 있었다.
두 가지 주요한 tet(M)인 Tn916과 Tn1545의 tet(M)의 염기 서열의 conserved region과 variable region으로부터 증폭산물의 크기가 다르도록 제작된 primer들을 이용하여 multiplex PCR을 실시한 결과, 한국의 수생 환경에서 분리된 모든 Vibrio sp.는 Tn1545에서 유래된 tet(M)을 지니고 있었음이 확인되었다. 반면, 장내세균의 하나인 CJV23의 경우, Tn916으로부터 유래된 tet(M)을 지니고 있었으며, Vibrio spp.와 CJV23의 tet(M)의 염기 서열을 분석하여 보고되어 있는 Tn1545 및 Tn916의 tet(M)과 비교하였다. 그러나, Tn1545-like genes들과 link 되어 있다고 알려져 있는 erm(B)와 aphA3는 Tc-resistant Vibrio spp.뿐만 아니라 erythromycin에 resistant 한 9 Vibrio spp strains에서도 발견되지 않았다.
Tet(B)와 tet(M)에서 제작된 primer들을 조합하여, DNA 선상에서 두 유전자의 방향과 거리에 따라 PCR의 증폭 산물이 생성되도록 하여, tet(B)와 tet(M)의 상대적인 거리에 대해 알아보고자 하였다. 그 결과, tet(B)상의 한 primer와 tet(M)상의 한 primer에 의해 증폭산물이 생성되었으며, 분석 결과, tet(M)은 tet(B)의 3′ end와는 2,536bp 떨어진 거리에 위치하고 있었으며, tet(B)를 포함하고 있는 Tn10의 바로 뒤에 위치하고 있었다. 본 연구는, Vibrio spp.에서의 tet(M)의 발견에 대한 최초의 보고이다.
그리고 이전 3개월간 항생제를 투여한 적이 없는 우리나라의 양어장으로 부터 얻은 조피볼락과 넙치를 시료로 하여 TCBS, CC 선택배지를 이용한 장내 세균의 분포 분석하였다. 장내 세균의 48~68%, 10~33%는 각각 Vibrionaceae, Enterobacteriaceae 계열로 확인되었으며 이중 Tc, Am, Cm, OA, St, SF에 대하여 Vibrionaceae는 46%, 48%, 33%, 8%, 23%, 53%, Enterobacteriaceae는 10%, 22%, 3%, 8%, 15%, 5%의 내성 비율을 보여 주었다(Table 1). Tc 30㎍/㎖이 첨가된 ST 배지로부터 무작위로 분리한 50개의 내성균이 가지고 있는 tet 유전자를 각각 분석한 결과 tet(A)와 tet(B)가 20%, 60%로써 tet(B)가 major type 으로 확인되었다. 이러한 결과는 장내 세균에 서 높은 출현 빈도를 보이고 Tc에 대해서도 46%의 내성균 비율을 나타내는 Vibrionaceae 계열의 균주에 의하여 큰 영향을 받은 것으로 추정되었다. 그리고 국가감 비교에서 중국의 Tc 내성균 비율은 3~31%로 다양한 내성 비율을 나타내었으며 일본은 33~55%의 내성 비율을 나타내 우리나라나 중국에 비해 다소 높은 경향을 나타내었다. 유사한 분석을 관상어를 대상으로 실시한 결과 Tc의 경우 우리나라에서 양식된 담수 관상어 장내 세균에서 약 39%의 내성 비율이 나타났다. 이는 대만 (7%)을 제외한 싱가폴 48%, 중국 58%, 태국 87%, 인도네시아 88%를 나타낸 수입된 관상어 장내 세균의 내성비율에 비해 다소 낮은 수치이다. 태국, 인도네시아에서 87%와 88%의 높은 Tc내성 비율이 나타난 반면 중국과 싱가폴에서는 우리나라에 비해 약 10%정도 높은 내성수치가 나타났다. 그러므로 외국산 (일본 포함)의 어류는 국내산에 비하여 비교적 높은 항생제 내성 위험성이 있다고 추측 된다.
Abstract
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A. Characterization of the β-lactamase genes from the isolates of Vibrio spp. and E. tarda in Korea
PCR was performed to analyze the bla genes carried by ampicillin resistant Vibrio spp. strains isolated from marine environments from 1997 to 2003 in Korea. Unfortunately all tested 36 strains show
A. Characterization of the β-lactamase genes from the isolates of Vibrio spp. and E. tarda in Korea
PCR was performed to analyze the bla genes carried by ampicillin resistant Vibrio spp. strains isolated from marine environments from 1997 to 2003 in Korea. Unfortunately all tested 36 strains showed negative results in PCR with the primers designed from the nucleotide sequences of various known bla genes. It pushed us to screen the new bla gene that may has not been reported. From the Vibrio alginolyticus KV-3 isolated from the coastal waters of Keoje island of Korea, novel bla gene was cloned. The determined nucleotide sequence (bla VAK) revealed an ORF of 852 bp encoding a protein of 284 amino acids and did not show high homology to any other bla genes in data bases. The deduced 284-amino acid sequence of VAK-1 would consist of 19 signal peptide and 265 matured protein contained highly conserved peptide segments specific to class A blas including the specific amino acid residues STFK (70nd to 73th), SDN (133th to 135th) E (166th), and RTG (234rd to 236th).
SDS-PAGE and IEF with the bla functional assay elicited that the Mw and pI of the bla VAK-1 were 30 kDa and close to 5.2 as predicted respectively. In performed PCR with the primers specific to bla VAK-1 gene, four strains in 36 strains isolated in our laboratories from marine environments from 1997 to 2003 in Korea, one Vibrio alginolyticus, one Vibrio chorelae and two Photobacterium damsella spp. generated the specific amplicons and indicating the diversity of bla genes of ampicillin resistant strains in marine environment. In mating experiment, one strains carrying mobile plasmid did not transferred VAK-1 bla gene to E. tarda PPD recipient. Thus such nonmobile characteristic and presence of chromosomal Acyl Co A sequence flanking at the 5 end of KV-3 bla gene allowed us to assume the location of this new bla gene in chromosome rather than mobile plasmid. Antibiotic susceptibility of bla VAK-1 was indicated by the elevated levels of resistance to penicillins but not to cephalosporins in wild type and E. coli DH5α harboring recombinant plasmid pKV-3 compared to those of the host strain alone.
Phylogenetic analysis showed that this bla VAK-1 is a new and separated member of class A.
For the determination of ampicillin resistance in E. tarda, one of the most important bacteria in aquatic industry, we isolated 12 high resistant bacteria to ampicillin from 115 isolates obtained from South sea and Jeju area. MIC to β-lactam antibiotics appeared to be very high to the family of penicillin but not to the family of cephalosporins and suggested the absence of ESBL gene in E. tarda. widespectrum of β-lactam antibiotics may be useful still to the treatment of Edwardsiellosis disease in korea.
Detected TEM-1 gene in 10 isolates among 12 were transferable and implied very fast spreading of the ampicillin resistance to the environmental microorganisms. All these are utilizing P3 promoter known the weakest one in P3, Pa/Pb, P4, P5 promoters for ampicillin resistance.
B. Molecular Cloning and Characterization of Quinolone Resistance gene in Edwardsiella tarda
Knowing the entire sequence of the DNA gyrase subunit A (gyrA, B, par C, E) gene of Edwardsiella tarda (E. tarda) could be very useful for the analysis of quinolone resistance. Degenerate primers for the amplification of gyrA, B were designed by using consensus nucleotide sequences of gyrA, B from nine different gram negative bacteria including Escherichia coli (E. coli). With these primers, DNA segments of the predicted size was amplified from the genomic DNA of E. tarda and then the flanking sequences were determined by a cassette ligation - mediated polymerase chain reaction (PCR). Determined nucleotide sequence was highly homologous with those of other bacterial species gyrA, B in both the whole open reading flame (ORF) and quinolone resistance-determining region (QRDR). The 2637bp gyrA gene encodes a protein of 878 amino acids, preceded by putative promoter, ribosome binding site, and inverted repeated sequences for cruciform structures of DNA. Additionally, we also have determined the full sequence of par C, E genes of E. tarda.
GyrA of E. tarda complemented the GyrA mutated to be sensitive at high temperature E. coli KNK453 strain at 43℃. In the analyzed nucleotide sequence of the flanking region, we could not find regions showing homologies with those of other bacterial DNA gyrase subunit B (gyrB). It suggested that E. tarda contains noncontinuous gyrase genes, gyrA and gyrB, on the chromosome. In 12 quinolone-resistant isolates examined, there was only a single type alteration within the QRDR, Ser-83 to Arg.
We also selected the mutants resistant to quinolones in vitro from quinolone-susceptible E. tarda by exposure to the stepwise increasing concentrations of nalidixic acid and ciprofloxacin. In mutants achieved in vitro selective steps, all resistance mutants examined showed an alteration within the QRDR, Asp-87 to Gly. It suggested clinical isolates and in vitro mutants of E. tarda resistant to quinolones is primarily related to alteration in gyrA.
Additionally in this study an economical and time-efficient mismatch amplification mutation assay (MAMA) PCR was developed to detect mutations in the gyrA gene, and applied to the analysis of mutation occurred in gyrA of clinical isolates and in vitro mutants of E. tarda.
With the cloning of the gyrA, full length of genes encoding gyrB parC and parE were also cloned from E. tarda by amplification with primers of the QRDR, followed by cassette ligation-mediated PCR. The E. tarda gyrB, parC and parE code for proteins of 100, 200 and 300 amino acids, respectively. The topoisomerase genes, parC/parE are contiguous in the chromosome of E. tarda. The gyrB, parC and parE were most closely related to E. coli (gyrB) and Klebsiella (parC) and Vibrio spp. (parE). To analyze the role of DNA gyrase and topoisomerase IV in quinolone resistance of E. tarda, we analyzed the resistant isolates in Korea and found that point mutations both in the gyrB and parC QRDRs were detected in strains with high-level resistance. These results suggest that gyrA and parC are the important targets for quinolone in E. tarda.
C. Application of multiplex PCR for the analysis and Characterization of tet genes in fish pathogenic bacteria from Korea
Multi-drug resistant isolates carrying tetracycline resistance gene were obtained from various locations in Korea and were analyzed the distribution and origin of the tet genes. Frequency of tetracycline resistance bacteria found in E. tarda and Vibrio spp. as major fish pathogenic isolates from 1993 to 2002 was 15% and 26%, respectively.
Specific primer pairs were designed to determine of tet A, B, C, D, E and G commonly found in Gram-negative organism by PCR. With the developed multiplex PCR method, it was found that Edwardsiella tarda isolates contained diverse tet genes, tet A, tet D, tet B, tet A․D and tet A․G, in contrast Vibrio spp. contained only tet B. Additionally, multiplex PCR with the mixture of an one sense primer derived from the conserved region of six different tet genes and six antisense primers specific to each different tet gene was developed to analyze the tet genes in a single tube with one reaction. Multiplex PCR should result in significant savings in terms of labour and cost in analysis of a large number of strains when compared with using an individual PCR for targeting each gene. It may also be a useful method to differentiate the types of tetracycline resistance when used as an additional market for the purpose of outbreak investigation and surveillance. Most of tet genes of the analyzed 18 E. tarda isolates found in plasmid, while tet B gene of two E. tarda isolates was localized on chromosome. The frequency of oxytetracycline resistance in the aquatic environmental bacteria were monitored from the farms in field. The frequency of Tc resistant bacteria present in the seawater, sediment and net was 6.7%, 24.4% and 30.7%, respectively. The analyzed Tc resistant frequency in intestinal microflora of rockfish treated OTC before 1 week of sampling was 2.83% compared with the 0.25% in rockfish without antibiotics treatment at least before 3 months of sampling. Rockfish were held in experimental tanks and oxytetracycline-HCl was administered at 125mg/kg body weight per day for 10 day via medicated feed. The changes of oxytetracycline resistance was monitored in samples taken from the intestinal contents of the fish. The range of the mean frequencies of resistance of the intestinal flora in the period before medication (6~27%) were lower than the frequency of resistance in the microflora after medication (32~85%).
D. Characterization of tetracycline resistance genes in the isolates from marine and ornamental fishes
Understanding of molecular characterization of tet genes is important to anlyze the appearance of tetracycline resistant bacteria in fish pathogenic bacteria. Total of 16 Enterobacteria and 32 Vibrio spp. were isolated from the intestinal tract of marine fish and aquatic environments of Korea to determine the dissemination of the tet genes using a polymerase chain reaction (PCR) assay. Unlike the Enterobacterial isolates appeared to contain various types of tet gene, all Vibrio spp. were positive for only tet(B) in multiplex PCR that can discriminate six different tet genes, tet(A), tet(B), tet(C), tet(D), tet(E) and tet(G) encoding the efflux proteins. The most unexpected finding in further analysis for tet(K), tet(L) and tet(M) was that all Vibrio spp. examined also carried tet(M) with tet(B). Thus in Vibrio spp., found in Korea, both tet(B) and tet(M) genes are highly disseminated as a determinant of tetracycline resistance. Additionally, by the different sizes of the amplicons, multiplex PCR with the primers derives from the variable and conserved regions of two major prototypes of tet(M) gene, Tn1545 and Tn916, allowed us to confirm that all tetracycline resistant isolates of Vibrio spp. from the aquatic environments of Korea carried tet(M) gene derived from the conjugative transposon Tn1545, whereas an enterobacterial strain CJV23 derived from Tn916. The full length DNA nucleotide sequence of tet(M) in Vibrio spp. and CJV23 and compared with that of tet(M) present in Tn1545 and Tn916. However, erm(B) and aphA3, known to be linked to Tn1545-like genes, were not detected in Tc-resistant Vibrio spp., even in 9 strains resistant to erythromycin.
The relative location of tet(B) and tet(M) were examined using the PCR method with the different combination of primer sets derived from tet(B) and tet(M) to produce amplicons depend upon the orientation and distance of these two genes on DNA. The amplicon was generated using the one primer designed from the nucleotide sequences of tet(B) gene and other from tet(M) genes. It came out that tet(M) gene was located 2,536bp apart from the 3' end of tet(B) gene or just 3'end of IS10 sequence of Tn10 contained tet(B) gene.
The tet genes were analyzed in the normal microflora in the bacteria of intestinal tract of the fish that have never exposed to Tc at least for 3 months before this analysis. Dominant micoorganisms were Vibrionaceae, Enterobacteriaceae showing (46%, 48%, 33%, 8%, 23%, 53%) and (10%, 22%, 3%, 8%, 15%, 5%) resistant to Tc, Am, Cm, OA, St, SF respectively. Determined tet genes of 20%, 60% proportions in the intestinal tract organisms were appeared to be tet(A) and tet(B) respectively. However, Ent-lac+ were utilizinf tet(A) as a dominant tet gene and different from that of Vibrionaceae. In terms of the level of Tc resistant bacteria, imported fish from Japan were carrying the highest level of resistant bacteria compared to that of Korea or China.
Enterobacterial Tc resistant bacteria from the intestinal tract of the imported ornamental fish were also isolated using CC agar palte contained Tc. Microflora obtained from the imported fish showed higher level of resistant bacteria compared to that of the flora from domestic fish, especially imported fish from Taiwan, Indonesia and Brazil were carrying the flora of the highest level of resistant bacteria. Specifically, proportion of the Tc resistant bacteria were 39%, 7%, 48%, 58%, 87% and88% in the flora of the fish cultured in Korea, Taipei, Singapore, China and Indonesia respectively.
목차 Contents
- 제 출 문 ... 1
- 요 약 문 ... 2
- SUMMARY ... 11
- CONTENTS ... 19
- 목 차 ... 20
- 제 1 장 연구개발과제의 개요 ... 21
- 제 2 장 국내외 기술개발 현황 및 과학기술정보 ... 23
- 제 3 장 연구개발수행 내용 및 결과 ... 25
- 제 1 절 Vibrio spp.에서의 $\beta$-lactamase 유전자 조사 ... 25
- 제 2 절 Edwardsiella tarda에서의 $\beta$-lactamase 유전자 조사 ... 49
- 제 3 절 E. tarda의 quinolne 계 항생제에 대한 내성과 관련 유전자의 cloning과 특성 분석 ... 59
- 제 4 절 Tetracycline 내성 유전자 분석을 위한 multiplex PCR의 응용과 양식현장 Tc 내성균의 유전적 특성 분석 ... 88
- 제 5 절 Vibrio spp.에서의 tet 유전자 분석을 통한 Tc 내성 유전자의 발현 특성 ... 105
- 제 6 절 수입산 어류의 장내 세균에서의 항생제 내성균 비율과 tet 유전자 분석 ... 130
- 제 4 장 연구개발 목표달성도 및 관련분야에의 기여도 ... 139
- 제 5 장 연구개발결과의 활용계획 ... 140
- 제 6 장 참고문헌 ... 141
- 끝페이지 ... 150
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