초록 ▼

1) NK cell의 NK 활성화 수용체 발현에 대한 HDAC 저해제의 기능 규명
◯ HDAC 저해제를 NKG2D ligand를 종양에서 유도하는 농도로 NK cell에 처리 하였을때 NK cell 표면위의 NKG2D 발현이 감소하는 결과를 확인하고 NCR(natural killer cell cytotoxcity receptor)인 NKp46의 발현이 HDAC 저해제에 의해 감소 되는것을 관찰함.
◯ 유전자 수준에서 NKG2D의 발현과 동반발현이 조절되는 DAP10의 발현이 HDAC 저해제에의해 감소되는 것을 관찰함.

1) NK cell의 NK 활성화 수용체 발현에 대한 HDAC 저해제의 기능 규명
◯ HDAC 저해제를 NKG2D ligand를 종양에서 유도하는 농도로 NK cell에 처리 하였을때 NK cell 표면위의 NKG2D 발현이 감소하는 결과를 확인하고 NCR(natural killer cell cytotoxcity receptor)인 NKp46의 발현이 HDAC 저해제에 의해 감소 되는것을 관찰함.
◯ 유전자 수준에서 NKG2D의 발현과 동반발현이 조절되는 DAP10의 발현이 HDAC 저해제에의해 감소되는 것을 관찰함.
◯ HDAC 저해제가 직접적으로 이들 단백질의 생산에 작용하여 NK cell의 살상능을 감소하는지 RT-PCR을 통해 mRNA 수준에서 단백질의 생산을 먼저 조사함. NK cell이 perforin 과 granzyme mRNA에 변화가 없었음. 따라서 perforin 과 granzyme의 생산에 HDAC 저해제는 전혀 영향을 미치지 않음을 알수 있었음.
◯ NK cell cytotoxicity assay는 NK cell의 기능적인 측면에서 살상능을 측정하는 방법임. NK cell line에 각각의 HDAC 저해제를 처리하고 K562에 대한 살상능을 측정한 결과 HDAC 저해제에의해 살상능이 저해되는 결과를 얻음.
◯ NKG2D ligand가 발현되어 NKG2D매개한 살상능 측정에 사용되는 것으로 보고된 CCRF-CEM target을 사용하여 HDAC 저해제에 의한 NKG2D발현 감소에 따른 살상능 감소임을 증명함.
◯ 정상인으로부터 얻어낸 혈액속의 NK cell을 분리하여 HDAC 저해제에 의한 NK cell의 활성화 수용체의 발현감소에 따른 NK cell 상상능 감소를 검증함. CCRF-CEM target을 사용하여 검증한 결과 NKG2D 매개의 반응이 감소함을 증명함
2) NK cell의 기능에 대한 NK 활성화 수용체 발현 감소를 유발하는 HDAC 저해제 효과 검증 및 활성화 수용체 발현감소 기전 규명.
◯ NK cell에 TSA 100nM을 처리하고 western blot을 통해 JNK 의 인산화에 HDAC 저해제가 관여하는지 관찰함. TSA를 처리 후 약5분경부터 JNK의 인산화가 감소하기 시작하여 30분에 회복됨. HDAC 저해제가 NK cell의 JNK pathway에 영향을 미치는 것을 확인함.
◯ western blot을 통해 확인한 JNK pathway의 상관관계를 좀더 검증하기위해 JNK pathway를 지속적으로 활성화 시키는 것으로 알려진 anisomycin을 처리하여 JNK pahway의 조절이 HDAC 저해제에의해 NKG2D 발현 감소를 위해 이루어짐을 검증함.
◯ NK 활성화 수용체 발현에 중요한 역할을 하는 IL-2 receptor의 발현을 조사함. HDAC 저해제를 NK cell에 처리한 결과 IL-2 receptor의 alpha,beta 그리고 IL-2 signal 전달에 중요한 gamma receptor 모두가 HDAC 저해제에의해 감소됨을 발견함.
3) NK 활성화 수용체 발현을 감소하는 HDAC 저해제 효과를 제어하는 조절 기전 규명 및 in vivo 동물 모델에서 HDAC 저해제의 NK cell 조절 기전을 규명하고 제어 기전을 검증.
◯ Nude mouse에 A549 종양을 이식한 후 항암제로써 HDAC 저해제를 처리한후 NK cell을 투여하는 항암 protocol을 in vivo model에서 실시함. HDAC 저해제와 NK cell을 동시 투여 하였을 때 종양의 크기가 감소되지 않았으나 HDAC 저해제 처리후 일주일 뒤에 NK cell을 투여한결과 현저한 종양 크기 감소 효과를 관찰함.