초록 ▼

Ⅳ. 연구개발결과
○ SLA 유래 HLA-A2 제한성 peptide의 생체내 항원성 비교 분석
- 컴퓨터 모델링 및 시험관내 시험을 통하여 HLA-A2와 결합력이 높은 것으로 발굴된 SLA 유래 peptide 3종을 대상으로 HLA-A2 transgenic mouse에서 생체내 항원성을 조사한 결과, Pep-35 만이 CD8 cytotoxcic T cell 반응을 강력히 유도함을 확인함.
- Pep-35는 MHC class II 제한성 helper epitope의 도움이 없이는 Pep-35 특이적 CD8 T 세포반응

Ⅳ. 연구개발결과
○ SLA 유래 HLA-A2 제한성 peptide의 생체내 항원성 비교 분석
- 컴퓨터 모델링 및 시험관내 시험을 통하여 HLA-A2와 결합력이 높은 것으로 발굴된 SLA 유래 peptide 3종을 대상으로 HLA-A2 transgenic mouse에서 생체내 항원성을 조사한 결과, Pep-35 만이 CD8 cytotoxcic T cell 반응을 강력히 유도함을 확인함.
- Pep-35는 MHC class II 제한성 helper epitope의 도움이 없이는 Pep-35 특이적 CD8 T 세포반응을 유도하지 못함.
- Pep-35가 HLA-A2 transgenic mouse에서 강력한 항원성을 보이는 이유는 다른 peptide들 보다도 amphiphilic한 특성을 갖고 때문인 것으로 보임.
○ 돼지세포를 이용한 peptide 특이 T 세포반응 유도 효능 분석
- 돼지세포 LLC-PK1를 HLA-A2 transgenic mice에 주사할 경우, Pep-35 특이 CD8 T 세포반응이 유의성 있게 증가됨을 확인함.
- 돼지세포 MPK를 HLA-DR4 transgenic mice에 주사할 경우, Pep-10 및 Pep-11 특이 CD4 T cell 반응이 강력히 증가됨을 확인함.
- 돼지세포 MPK cell에서 SLA class I 분자가 높게 발현됨을 확인하였고, SLA class I 특이 단클론 항체 (74-11-10 antibody)를 생산하는 hybridoma를 확보하였으며, 이 단클론 항체를 이용하여 SLA class I 분자를 분리 정제함.
○ 면역관용 수지상세포 (tolerogenic DC) 생산법 확립 및 특성분석
- 생쥐 골수세포를 GM-CSF 및 IL-4와 더불어 Compound-M을 이용하여 면역관용 수지 상세포로 생산하는 방법을 처음으로 확립
- Compound-M을 이용하여 생산한 면역관용 수지상세포의 세포 표현형적 특성 규명
- Compound-M을 이용하여 생산한 면역관용 수지상세포는 정상 수지상세포 보다 항원 제시능, cytokine 생성능은 감소되어 있으나, 항원 탐식능에서는 차이가 없음을 확인.
- 생체내 실험에서, Compound-M을 이용하여 생산한 면역관용 수지상세포는 정상 수지상 세포 및 rapamycin을 이용하여 생산한 면역관용 수지상세포 보다도 allogenic T cell 반응 유도능력 및 항원 특이 T cell 반응 유도능력이 현저히 감소되어 있음을 확인.
○ Peptide 특이 면역관용 유도 기술 개발
- Compound-M을 이용하여 생산한 면역관용 수지상세포에 Pep-11을 pulse하여 주사한 생쥐에서 분리한 T cell은 정상 수지상세포나 rapamycin을 이용하여 생산한 면역관용 수지 상세포에 Pep-11을 pulse하여 주사한 생쥐에서 분리한 T cell과 비교하여 Pep-11을 pulse한 정상 수지상세포로 자극할 경우 증식이 크게 저하됨을 관찰함.
- 이러한 결과는 Compound-M을 이용하여 생산한 면역관용 수지상세포에 항원성 peptide (Pep-11)을 pulse하여 주사하는 방법으로 항원성 peptide 특이 생체내 T cell response가 면역관용 될 수 있음을 입증하는 것임.

Abstract ▼

III. Results of the study
○ Identification of HLA-A2-restricted immunogenic peptide derived from SLA
- Computer modeling analysis and in vitro tests were used to predict SLA derived peptides with HLA-A*0201-binding motifs.
- Three peptides, Pep-35, Pep-43 and Pep-43, were identified to exer

III. Results of the study
○ Identification of HLA-A2-restricted immunogenic peptide derived from SLA
- Computer modeling analysis and in vitro tests were used to predict SLA derived peptides with HLA-A*0201-binding motifs.
- Three peptides, Pep-35, Pep-43 and Pep-43, were identified to exert potent binding capacity to HLA-A*0201 in cell-base binding assays.
- Among these, Pep-35 was shown to induce potent CD8 T-cell responses in HLA-A*0201 transgenic mice when immunized with HBV-derived helper epitope.
○ Evaluation of peptide-specific T cell response-inducing capacity using swine cells
- HLA-A2-transgenic mice that were immunized with swine cell line LLC-PK1 significantly induced Pep-35-specific CD8 T cell responses.
- HLA-DR4-transgenic mice that were immunized with swine cell line MPK significantly induced Pep-10- and Pep-11-specific CD4 T cell responses.
- We were also able to purify SLA class I molecules in large quantity using SLA class I-specific monoclonal antibody 74-11-10.
○ Establishment of the generation methods and characterization of phenotypic and functional characteristics of the tolerogenic dendritic cells (DCs)
- Tolerogenic DCs were generated from mouse bone marrow cells using mGMCSF and mIL-4 in the presence of compound-M (Tol-DCs).
- Tol-DCs expressed lower levels of MHC and costimulatory molecules compared with normal DC.
- Tol-DCs were decreased in the MHC class II-restricted presentation, cytokine production, and the allogenic T cell stimulatory activity.
○ Development of strategies for the peptide-specific T cell immune tolerance
- Injection of tolerogenic DCs that were generated in the presence of compound-M and then pulsed with Pep-11 into HLA-A*0201 transgenic mice induced Pep-11 specific T cell tolerance in vivo.
- The peptide-specific T cell tolerance-inducing activity of tolerogenic DCs that were generated in the presence of Compound-M was more prominent compared with the tolerogenic DCs that were generated using rapamycin.