초록 ▼

1. 1세부 : 자궁경부암 치료후보물질 in vivo 효능평가를 위한 소동물모델 개발
암 연구를 위한 소동물 모델에는 이식하는 세포의 종류와 이식부위에 따라 많은 종류가 있지만 정확한 치료후보물질의 효능을 평가하기 위하여 환자로부터 적출한 자궁경부암 조직을 정위이식하여 제작한 PDOX 모델이 필수적이나 개발이 미비한 실정임.
PDOX 모델을 제작하기 위하여 필요한 이식기법은 육안 관찰이 용이하도록 GFP-tagging된 자궁경부암 세포주를 이용하여 확보하였으며 임상기관과의 연구협력 관계를 구축하여 임상검체를 확보하였음.<

1. 1세부 : 자궁경부암 치료후보물질 in vivo 효능평가를 위한 소동물모델 개발
암 연구를 위한 소동물 모델에는 이식하는 세포의 종류와 이식부위에 따라 많은 종류가 있지만 정확한 치료후보물질의 효능을 평가하기 위하여 환자로부터 적출한 자궁경부암 조직을 정위이식하여 제작한 PDOX 모델이 필수적이나 개발이 미비한 실정임.
PDOX 모델을 제작하기 위하여 필요한 이식기법은 육안 관찰이 용이하도록 GFP-tagging된 자궁경부암 세포주를 이용하여 확보하였으며 임상기관과의 연구협력 관계를 구축하여 임상검체를 확보하였음.
환자로부터 적출한 자궁경부암 PDOX 모델을 제작하여 환자로부터 유래한 조직과 PDOX 모델로 부터 적출한 조직 간의 유사성을 항암제 감수성 profile, H&E staining을 통한 병리학적 특성과 HPV typing을 비교분석하여 확인함.
제작된 자궁경부암 PDOX 모델을 이용하여 성장하는 암종괴의 성장을 해부하여 육안으로 관찰한 결과와 MRI 영상으로 비교분석하여 치료후보물질의 in vivo 효능평가를 하기 위한 시스템을 최적화 하였음.
본 연구를 통하여 제작된 자궁경부암 PDOX 모델과 최적화된 효능평가 시스템을 이용하여 질병관리본부에서 제시한 치료후보물질을 평가한 결과 자궁경부암 PDOX 모델은 자궁경부암 치료후보무질을 평가하기 위한 좋은 모델이었음을 확인함.

2. 2세부 : HIV 만성감염 치료후보물질 in vivo 효능평가를 위한 소동물모델 개발 및 최적화
현재 humanized mouse 모델 제작에 많이 사용되고 있는 조혈모세포 (HSC)는 제대혈로부터 얻을 수 있으므로 대량의 humanized mouse를 필요로 하는 HIV 바이러스의 특성 및 만성감염 치료 후보물질의 효능을 평가 연구를 수행하는데 어려움이 있음. 그러므로 사람의 혈액으로부터 대량 분리 정제가 가능한 peripheral blood mononuclear cell (PBMC)을 이용하여 제작한 humanized mouse 모델을 CD34+ hematopoietic stem cell을 이용하여 제작한 humanized mouse와 비교 분석한 결과, 두 가지 model 모두에서 HIV-1_DH12와 HIV-1_NL4-3 바이러스에 의해서 human CD4+ T 세포의 감소 및 viral load의 변화를 확인하였음.
정상 PBMC를 이용한 humanized mouse를 사용하여 HIV 감염된 humanized mouse에 HAART 투여에 의한 잠복감염 상태 유도, HIV 만성감염자의 PBMC의 이식, 및 잠복감염 세포주(ACH2 and NCHA)를 이식함으로서 HIV 만성감염 소동물 모델을 제작하고자 하였으나, HAART 투여 중지할 경우에는 HIV 증식이 다시 시작되어 human CD4+ T 세포가 감소되었음. 유도만능줄기세포 (IPS cell)을 사용하여 humanized mouse 제작을 시도하였으나 human cell의 reconstitution을 확인할 수 없었음. 부가적으로 HIV 만성감염 마우스 모델 개발 연구에서 구축된 humanized NSG mice의 HIV 치료후보 물질의 in vivo 효능평가에 대한 유용성을 확인하고자, 한국형 reference HIV-1 바이러스 국내 표준주인 KOR와 외국 reference HIV-1 바이러스 주인 DH12의 중화항체를 사용하여 중 화항체 in vivo 효능을 평가하였음. 그 결과 이들 중화항체의 중화항체능이 in vitro의 결과와 유사하게 나타남으로서 유용성을 확인할 수 있었음.

Abstract ▼

1. Part 1: Development of PDOXl model for efficacy test of Cervical cancer therapeutic candidates
The small animal models for cancer research are many types depending on the type and the implantation site of the implanted cells, but the development of PDOX(patient derived orthotopic xenograft) m

1. Part 1: Development of PDOXl model for efficacy test of Cervical cancer therapeutic candidates
The small animal models for cancer research are many types depending on the type and the implantation site of the implanted cells, but the development of PDOX(patient derived orthotopic xenograft) model for assessing the efficacy of the candidate correct treatment is insufficient.
We secured the implantation technique for making PDOX model using a GFP-tagging a cervical cancer cell lines to facilitate visual observation and contractured the network with clinical institutions for clinical research collaboration.
We made a cervical cancer PDOX model from the patient tissue and confirmed the identity between the tissues derived from the patient and PDOX mode by comparative analysis of chemosensitivity profile, pathological characteristics and HPV typing.
Using the model built cervical PDOX, we optimized the system for the in vivo efficacy of the candidates by comparative analysis between the results of growth of cancer of naked eye and the results of MRI images.
We confirmed that cervical cancer PDOX models and optimized systems are good tools for the evaluation the therapeutic efficacy candidates.

2. Part 2: Development of animal model for efficacy test of latent HIV infection therapeutic candidates
Humanized mouse models derived from immune-deficient mice have been the primary tool for studies of human infectious viruses, such as human immunodeficiency virus (HIV). However, the current protocol for constructing humanized mice requires elaborate procedures and complicated techniques, limiting the supply of such mice for viral studies. Here, we report a convenient method for constructing a simple HIV-1 mouse model. NSG mice were intraperitoneally injected with 1X10⁷ adult human peripheral blood mononuclear cells (hu-PBMCs). To examine the usefulness of hu-PBMC-inoculated NSG (hu-PBMC-NSG) mice as a HIV-1 small animal model, we intravenously injected these mice with dual-tropic HIV-1_DH12 and X4-tropic HIV-1_NL4-3 strains. HIV-1-infected hu-PBMC-NSG mice showed significantly lower human CD4⁺ T cell counts and high HIV viral loads in the peripheral blood.
For construction of latent HIV small animal model, we performed the highly active antiretroviral therapy (HAART) treatment to HIV infected hu-PBMC-NSG mice, and hu-PBMC-NSG mice construction with the PBMCs from HAART treated HIV patients and HIV latent cell lines (ACH2 and NCHA). By HAART treatment, HIV-1 replication was significantly suppressed in these hu-PBMC-NSG mice without detectable viremia or CD4⁺ T cell depletion. But the human CD4⁺ T cells were depleted in hu-PBMC-NSG mice by HAART interruption. Moreover, we constructed to humanized mice with induced pluripotent stem (IPS) cell for HIV latent small animal model. But we could not confirmed the reconstitution of human cells in these mice. Although we could not successfully construct the HIV latent small animal model, the usefulness of these hu-PBMC-NSG mice was evaluated with in vivo neutralizing antibodies assay. These results were correlated with that of in vitro assay. Taken together, our results suggest that hu-PBMC-NSG mice may serve as a relevant HIV-1 infection and pathogenesis model that could facilitate in vivo studies of HIV-1 infection and candidate HIV-1 protective drugs.

목차 Contents

• 표지 ... 1
• 학술연구개발용역과제 최종결과보고서 ... 2
• 목차 ... 3
• 연구결과점검보고서 요약문 ... 5
• Summary ... 6
• 학술연구개발용역과제 연구결과 (총괄) ... 7
• 제1장 최종 목표 ... 7
• 제2장 국내외 기술 현황 ... 31
• 제3장 최종 연구 내용 및 방법 ... 36
• 제4장 최종 연구 결과 ... 56
• 제5장 연구결과 고찰 및 결론 ... 125
• 제6장 연구성과 및 활용계획 ... 139
• 제7장 연구용역과제 진행과정에서 수집한 해외과학기술정보 ... 143
• 제8장 기타 중요변경사항 ... 144
• 제9장 연구비 사용 내역(당해년도) 및 연구원 분담표 ... 145
• 제10장 참고문헌 ... 148
• 제11장 첨부서류 ... 153
• 학술연구개발용역과제 당해연도 연구결과 (제1 세부과제) ... 157
• 제1장 제 1세부 연구용역과제의 최종 연구목표 ... 157
• 제2장 제 1세부 연구용역과제의 국내외 기술 현황 ... 158
• 제3장 제 1세부 연구용역과제의 용역과제 내용 및 방법 ... 164
• 제4장 제 1세부 연구용역과제의 최종 용역과제 결과 ... 174
• 제5장 제 1세부 연구용역과제의 연구결과 고찰 및 결론 ... 209
• 제6장 제 1세부 연구용역과제의 연구성과 및 활용계획 ... 217
• 제7장 제 1세부 연구용역과제의 진행과정에서 수집한 해외과학기술정보 ... 220
• 제8장 제 1세부 연구용역과제의 기타 중요변경사항 ... 221
• 제9장 제 1세부 연구용역과제의 연구비 사용 내역 ... 222
• 제2세부 학술연구개발용역과제 연구결과 ... 224
• 제1장 최종 목표 ... 224
• 제2장 국내외 기술 현황 ... 232
• 제3장 최종 연구 내용 및 방법 ... 235
• 제4장 최종 연구 결과 ... 245
• 제5장 연구결과 고찰 및 결론 ... 276
• 제6장 연구성과 및 활용계획 ... 283
• 제7장 연구용역과제 진행과정에서 수집한 해외과학기술정보 ... 287
• 제8장 기타 중요변경사항 ... 288
• 제9장 연구비 사용 내역(당해년도) 및 연구원 분담표 ... 289
• 끝페이지 ... 292