초록 ▼

- EPC의 부착 배양시 나타나는 노화를 방지하기 위해 단핵구 세포를 비부착 배양했을 때 노화를 억제하면서 EPC 증폭이 가능함을 입증하였음.

- 단핵구 세포, CD34 음성 세포, CD34 양성세포를 비부착 배양하였을 때, CD34 음성 세포는 증폭이 안되었고, 단핵구 세포 분획 보다 CD34 양성세포 분획이 EPC 증폭에 효율적임을 제시하였음.

- 여러 cytokine 조합을 배양 조건중 적합한 EPC 체외 증폭 연구를 실시하여 증식인자와 분화 인자를 조사하였고, 배양 조건을 확립하였음.

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- EPC의 부착 배양시 나타나는 노화를 방지하기 위해 단핵구 세포를 비부착 배양했을 때 노화를 억제하면서 EPC 증폭이 가능함을 입증하였음.

- 단핵구 세포, CD34 음성 세포, CD34 양성세포를 비부착 배양하였을 때, CD34 음성 세포는 증폭이 안되었고, 단핵구 세포 분획 보다 CD34 양성세포 분획이 EPC 증폭에 효율적임을 제시하였음.

- 여러 cytokine 조합을 배양 조건중 적합한 EPC 체외 증폭 연구를 실시하여 증식인자와 분화 인자를 조사하였고, 배양 조건을 확립하였음.

- in vitro 연구 결과를 in vivo에서 입증하기 위해서 murine hindlimb ischemia 모델을 확립하여 증폭된 세포들의 세포 치료 효과를 검증하였음.

(출처:보고서 요약서 p.3 )

Abstract ▼

Endothelial progenitor cells have been proven in a great number of pre-clinical and clinical studies to be employed for the cell therapy for the treatment of local ischemia such as limb ischemia and myocardial infarction. However, the number of EPCs for cell therapy is limited. Since hematopoietic s

Endothelial progenitor cells have been proven in a great number of pre-clinical and clinical studies to be employed for the cell therapy for the treatment of local ischemia such as limb ischemia and myocardial infarction. However, the number of EPCs for cell therapy is limited. Since hematopoietic stem cells from cord blood have been transplanted successfully, expansion of EPCs derived from cord blood will be highly expected. In addition, characterization of EPCs has not been fully established, and basic studies on EPCs themselves are also required. In particular, ex vivo expansion method of adhesive culture of EPCs on fibronectin-coated dishes leads cells to rapidly proceed into senescence with differentiation upon adhesion onto extracellular matrix. Therefore, in this study, an efficient expansion method was investigated in an attempt to amplify the number of EPCs by inducing proliferation with limited differentiation. Firstly, we proved that EPC expansion was possible with suppression of senescence, when mononuclear cells were cultured in a floating condition in order to prevent senescence due to adhesive culture method. Secondly, when mononuclear cells, CD34 positive cells, and CD34 negative cells were cultured in a floating culture condition, respectively, we found that CD34 negative cell fraction does not show any EPC expansion, and that EPC expansion from CD34 positive fraction is much higher than that from mononuclear cell fraction. Next, we investigated additional cytokine combinations in a floating condition, and found that several factors are involved in proliferation or in differentiation, thereby establishing a more improved expansion culture condition. Finally, after establishment of a murine hindlimb ischemia model, we performed the in vivo experiments to prove the therapeutic effects of expanded EPCs in accordance with the precedent in vitro experiments. These results will contribute to improvement of cell therapy for ischemic disease and to more understanding of EPCs.

(출처:SUMMARY p.6)

목차 Contents

• 표지 ... 1제 출 문 ... 2보고서 요약서 ... 3요 약 문 ... 4SUMMARY ... 6CONTENTS ... 7목차 ... 8제 1 장 연구개발과제의 개요 ... 9제 2 장 국내외 기술개발 현황 ... 11제 3 장 연구개발수행 내용 및 결과 ... 14 1. MNC를 이용한 비부착성 배양 조건 확립 및 기능적 EPC 수 측정방법 확립 ... 14 2. 확립된 비부착 조건에서 각종 성장인자, cytokine, 약물을 대상으로 MNC로부터 EPC 분화 조사 ... 15 3. MNC, CD34 양성 및 음성 세포의 증폭 적합성 조사: CD34+, CD133+ 세포를 이용한 유효성 검증 ... 25 4. CD34+ cell fraction에 대한 최적화된 증식, 분화인자 조합 발굴 및 형질 조사 ... 43 5. 전사조절인자의 발현 조절에 의한 EPC 분화/증식 조절 ... 48 6. Murine hindlimb ischemia model에서의 in vivo 효능 검증: 현재 진행중 ... 48제 4 장 목표달성도 및 관련분야에의 기여도 ... 51제 5 장 연구개발결과의 활용계획 ... 54제 6 장 연구개발과정에서 수집한 해외과학기술정보 ... 55제 7 장 참고문헌 ... 56끝페이지 ... 58