초록 ▼

■ 연구목표
1. 수산물 중 해양생물독소(설사성 패류독소)의 사전안전관리 기반 마련을 위한 분석법 개발
2. 개발된 분석법을 기반으로 이매패류 (100 건) 실태조사

■ 연구내용
1. 펙테노톡신 및 예소톡신 분석법에 대한 국내외 자료조사 및 비교 검토
- LLE, FLF, SPE를 비롯한 추출정제 방법 비교 검토
2. 이미패류 등 매트릭스별 특성을 반영한 전처리 조건 확립
- Freezing-lipid filteration을 통한 효과적인 지질제거 방법 선정
3. 수산물(이매패류)

■ 연구목표
1. 수산물 중 해양생물독소(설사성 패류독소)의 사전안전관리 기반 마련을 위한 분석법 개발
2. 개발된 분석법을 기반으로 이매패류 (100 건) 실태조사

■ 연구내용
1. 펙테노톡신 및 예소톡신 분석법에 대한 국내외 자료조사 및 비교 검토
- LLE, FLF, SPE를 비롯한 추출정제 방법 비교 검토
2. 이미패류 등 매트릭스별 특성을 반영한 전처리 조건 확립
- Freezing-lipid filteration을 통한 효과적인 지질제거 방법 선정
3. 수산물(이매패류) 중 펙테노톡신 및 예소톡신 기기분석법 (LC-MS/MS) 확립
- 이동상 및 컬럼 조건 비교를 통한 분리분석법 확립
- 텐덤 질량분석 기법을 활용한 MRM 분석법 개발 (최적 MRM transition 선정)
- 독소성분의 화학적 특성 및 크로마토그래피 분리도를 고려한 동시검출법 적용 (time segment polarity switching mode)
4. 수산물(이매패류) 중 설사성 패류독소 동시분석법(오카다익산, DTX-1, 펙테노톡신, 예소톡신) 검토
- OA, DTX-1, 2, PTX-2, YTX, homo-YTX를 포함한 6 종의 설사성 패류독소 동시분석법 개발
5. 분석법 타당성 검토
- 검출한계, 정량한계, 직선성, 정확도, 정밀도, 회수율
- certified reference material (CRM 201304) 분석을 통한 정확도 검증
6. 국내 유통 수산물(이매패류)중 펙테노톡신 및 예소톡신 시험법 적용성 확인
- 본 연구에서 개발된 6 종의 설사성 패독 동시분석법을 활용하여 시중에 유통되는 이매패류 중 106 여건 분석결과 국제규제 농도이상의 해양독소는 검출되지 않았음.

■ 기대성과
1. 수산물 중 펙테노톡신 및 예소톡신을 비롯한 6 종의 설사성 패류독소에 대한 신속 동시 분석법 개발
2. 시중 유통 중인 이매패류에서 미량의 생물독소성분 정량으로 유해성평가 기반자료 제공
3. 표준작업지침 (SOP) 제공으로 인한 수산물 중 설사성 패류독소 선제적 안전관리 기반 마련

(출처 : 국문요약문 5P)

Abstract ▼

Diarrhetic shellfish poisoning (DSP) is a gastrointestinal illness caused by intake of shellfish contaminated with DSP toxins. Especially, six typical DSP biotoxins such as okadaic acid (OA), dinophysistoxin-1 and 2 (DTX-1, DTX-2), yessotoxin (YTX), homo-yessotoxin (OH-YTX), and pectenotoxin-2 (PTX-

Diarrhetic shellfish poisoning (DSP) is a gastrointestinal illness caused by intake of shellfish contaminated with DSP toxins. Especially, six typical DSP biotoxins such as okadaic acid (OA), dinophysistoxin-1 and 2 (DTX-1, DTX-2), yessotoxin (YTX), homo-yessotoxin (OH-YTX), and pectenotoxin-2 (PTX-2) have been frequently occurred in Korea. We developed ultra-performance liquid chromatography tandem mass spectrometry (UPLC-MS/MS) to determine trace amounts of marine biotoxins in bivalves. Analysis of these toxins in bivalves is confronted with several limitations due to their low concentration and physiochemical properties and the coexistence of lipid matrices. Extraction of biotoxins from bivalves was carried out by ultrasonication using methanol. For the cleanup of extract, three methods (liquid-liquid partition, freezing lipid filtration, and freezing lipid filtration combined with SPE) were readily examined with the observation of lipid contents by fast atom bombardment-MS (FAB-MS). As result, freezing-lipid filtration and SPE cleanup was shown to be the best effective lipid elimination method. During freezing-lipid filtration, about 77% of the lipids extracted from the bivalves were easily removed without any significant losses of marine toxins. For further cleanup, Strata-X-SPE cartridge could successfully purified biotoxins from remaining interferences using 1% ammonium hydroxide in methanol. Also, these biotoxins could be simultaneously determined by UPLC-ESI-MS/MS combined with time segment polarity switching mode, based on high separation capacity between acidic toxins (OA, DTX-1 and 2, YTX, and homo-YTX) and neutral toxin (PTX-2) under optimized UPLC conditions. Method validation through certified reference material (CRM 201304) and spiking experiments was carried out to determine the recovery, precision, accuracy, and limits of detection (LOD) and quantification (LOQ) of the method. The method was deemed satisfactory by inter- and intra-day validation and exhibited both high accuracy and precision (relative standard deviation < 14.44%). Overall limits of detection and quantitation of marine biotoxins were approximately 7–40 ng/mL at a signal-to-noise ratio (S/N) of 3 and were about 20–125 ng/mL at a S/N of 10 for all bivalves. The overall recovery was above 86% in the spiked mussel sample at EU permitted level (160 μg/kg and 1000 μg/kg). The developed method was successfully applied for the determination and quantification of marine toxins in several kinds of bivalves collected from Korean fishery markets, ensuring food safety.

(출처 : Summary 7P)

목차 Contents

• 표지 ... 1
• 제 출 문 ... 2
• 목차 ... 3
• Ⅰ. 총괄연구개발과제 요약문 ... 5
• 국문 요약문 ... 5
• Summary ... 7
• Ⅱ. 총괄연구개발과제 연구결과 ... 9
• 제1장 총괄연구개발과제의 목적 및 필요성 ... 9
• 제2장 총괄연구개발과제의 내용 및 방법 ... 62
• 제3장 총괄연구개발과제의 최종결과 및 고찰 ... 80
• 제4장 총괄연구개발과제의 연구성과 ... 124
• 제5장 총괄주요연구 변경사항 ... 125
• 제6장 총괄참고문헌 ... 126
• 제7장 총괄첨부서류 ... 130
• 끝페이지 ... 143