보고서 정보
주관연구기관 |
식품의약품안전평가원 National Institute of Food and Drug Safety Evaluation |
연구책임자 |
서수경
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참여연구자 |
류승렬
,
김호
,
엄준호
,
백정희
,
이보연
,
우정남
,
신희성
,
엄장현
,
김사랑
,
홍영기
,
유지혜
|
보고서유형 | 최종보고서 |
발행국가 | 대한민국 |
언어 |
한국어
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발행년월 | 2016-12 |
과제시작연도 |
2016 |
주관부처 |
식품의약품안전처 Ministry of Food and Drug Safety |
등록번호 |
TRKO201700017659 |
과제고유번호 |
1475009360 |
사업명 |
의약품등안전관리 |
DB 구축일자 |
2017-11-25
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키워드 |
재조합의약품.표면플라즈몬공명원리.호르몬제제.검증연구.recombinant products.Surface Plasmon Resonance.hormonal drug.validation.
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DOI |
https://doi.org/10.23000/TRKO201700017659 |
초록
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에리스로포이에틴(EPO)은 신장에서 만들어져 적혈구 생성을 유도하는 호르몬으로, 암젠사에서 유전자재조합기술을 이용하여 제품을 출시한 이후, 저분자량 바이오의약품 시장에 있어서 성장호르몬과 더불어 주요한 부분을 차지하고 있다. 특히 분자량이 작아 효능효과를 증대시킨 바이오베터 개발도 활발히 이뤄지는 제품이다. 대표적인 바이오베터로, EPO 내의 일부 아미노산을 치환하여 체내반감기를 증대시킨 제품인 다베포에틴알파는 환자의 투여횟수를 줄임으로써 투약 편의성을 증대시켰다. 이러한 재조합호르몬류는 항체의약품에 비하여 분자량이 작다 하더라도,
에리스로포이에틴(EPO)은 신장에서 만들어져 적혈구 생성을 유도하는 호르몬으로, 암젠사에서 유전자재조합기술을 이용하여 제품을 출시한 이후, 저분자량 바이오의약품 시장에 있어서 성장호르몬과 더불어 주요한 부분을 차지하고 있다. 특히 분자량이 작아 효능효과를 증대시킨 바이오베터 개발도 활발히 이뤄지는 제품이다. 대표적인 바이오베터로, EPO 내의 일부 아미노산을 치환하여 체내반감기를 증대시킨 제품인 다베포에틴알파는 환자의 투여횟수를 줄임으로써 투약 편의성을 증대시켰다. 이러한 재조합호르몬류는 항체의약품에 비하여 분자량이 작다 하더라도, 그 구조 및 활성의 복잡성과 다양성으로 인하여 정확, 신속한 품질평가시험법의 확립이 중요하다. 현재 유럽 약전 등 공정서에 수재된 EPO에 대한 역가시험법은 실험용 쥐를 사용하는 시험법으로 품질평가 결과의 재현성 및 정밀성 뿐만 아니라, 실험동물 사용에 대한 윤리적인 부분의 개선도 요구되고 있다. 본 연구사업에서는 EPO에 대한 품질평가시험법으로써 비표지 분자상호작용 분석기(SPR)를 이용한 시험법을 개발하여 그 활용 타당성을 검증하고자 EPO 국가표준품을 선택하였다. 먼저, SPR을 활용한 시험법에 대하여 recombinant EPO receptor를 리간드로 사용한 시험조건을 확립하였고, 특이성, 직선성, 반복성 등의 검증을 수행하였다. 또한, EPO 국가표준품을 95℃에서 0.5 시간, 1 시간, 2 시간 등 다양한 가혹 조건을 처리하여, 고의로 역가를 포함한 품질을 저하시켰다. 이들 가혹 처리 검체에 대하여, F-36E 세포주를 사용하여 세포 증식을 보는 역가시험, B6D2F1 암컷 7 주령 실험용 쥐를 사용한 유럽 약전에 수재된 역가시험, 그리고 시험법 검증을 완료한 SPR 원리 역가시험을 수행하였다. 이렇게 각 시험법 결과 간의 비교를 통하여, SPR 원리를 사용한 시험법의 역가시험법으로서의 적용타당성을 확인하였다. 뿐만 아니라, SE-HPLC, SDS-PAGE, ELISA 등의 시험법을 통하여, 대상 검체들의 품질을 평가, 비교하여 이들 시험은 역가시험 결과보다는 덜 민감하게 품질저하를 반영하고 있음을 확인하였다. 추가적으로 EPO 제품과 바이오베터인 다베포에틴알파 제품에 대해서도 SPR 기반 시험법을 역가시험으로 적용 가능한지 검증하였다. 세포기반 역가시험과 SPR 시험간의 상관분석을 수행한 결과 EPO 국가표준품, EPO 제품, 다베포에틴 제품 모두 R2 값이 0.995, 0.999, 0.990으로 연관성이 매우 높게 나타났다. 이를 통하여 비표지 분자상호작용 분석기를 사용한 SPR 시험법이 재조합호르몬류의 역가시험법으로도 적용이 타당함을 확인하였다.
(출처 : 국문요약문 3p)
Abstract
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Erythropoietin(EPO) produced in kidney is a glycoprotein hormone that controls erythropoiesis. After the EPO products had been released by Amgen, EPO have accounted for a considerable proportion among low molecular biopharmaceutical market. Efficiency-improved bio-betters of EPO are being actively d
Erythropoietin(EPO) produced in kidney is a glycoprotein hormone that controls erythropoiesis. After the EPO products had been released by Amgen, EPO have accounted for a considerable proportion among low molecular biopharmaceutical market. Efficiency-improved bio-betters of EPO are being actively developed due to the low molecular weight of it. Darbepoetin-alfa, a representative bio-better of EPO, is an engineered product by recombinant protein technology to increase a biological half-life. It is essential to establish a quick and accurate quality evaluation system for the recombinant hormones because of its structure, complexity of activity and variation even though the molecular weight of those is small. Written in the European Pharmacopoeia, the potency test using mice for EPO not only presents poor reproductivity and accuracy of quality evaluation results, but also causes ethical problem of lab-animals. We proposed a testing method using surface plasmon resonance(SPR) as a quality evaluation method for EPO. To verify validity of the method, we used an EPO reference standard. First of all, we established SPR assay condition using rEPO receptor and conducted verification for specificity, linearity and reproductivity of the method. For comprehensive analysis of the EPO reference standard, some samples were treated with heating at 95℃ for 30 min, 60 min or 120 min that causes aggregation of EPO. To determine whether SPR-based assay is valid as a potency test for EPO, we carried out three kinds of potency tests; (1) cellular proliferation assay using a F-36E cell line, (2) animal-based assay using B6D2F1 mice, (3) SPR-based assay. Analyzing the results from each assay, the results of those methods showed a significant correlation. Moreover, we confirmed the results of SPR assay for the one of EPO products and the one of darbepoetin-alfa protducts is correlated with the previous potency test results. Taken together, we confirmed that SPR-based assay is applicable as a potency testing method for the recombinant hormones.
(출처 : Summary 4p)
목차 Contents
- 표지 ... 1
- 자체연구개발과제 최종보고서 ... 2
- 국문요약문 ... 3
- Summary ... 4
- 목차 ... 5
- 제1장 연구개발과제의 개요 ... 6
- 제1절 연구개발과제의 목표 ... 6
- 제2절 연구개발과제의 필요성 ... 6
- 제2장 연구개발과제의 국내·외 연구개발 현황 ... 9
- 제3장 연구개발과제의 연구수행 내용 및 결과 ... 11
- 제1절 연구수행 내용 ... 11
- 제2절 연구결과 ... 29
- 제4장 연구개발과제의 연구결과 고찰 및 결론 ... 57
- 제5장 연구개발과제의 목표달성도 및 관련분야에의 기여도 ... 58
- 제1절 목표달성도 ... 58
- 제2절 관련분야에의 기여도 ... 58
- 제6장 연구개발과제의 연구개발 결과 활용계획 ... 60
- 제1절 활용성과 ... 60
- 제2절 활용계획 ... 60
- 제7장 참고문헌 ... 61
- 제8장 첨부서류 ... 64
- 끝페이지 ... 79
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