초록 ▼

본 과제에서는 약 200여개의 ARS 관련 유전자들에 대한 RNAi library를 제작하고, 이들로부터 RNAi trigger(유전자 발현 억제 효과가 높은 siRNA/shRNA) 발굴을 목적으로 수행하고 있음.

cDNA, genomic DNA, 또는 oligonucleotides library를 시작으로 필요한 RNAi library를 제작하는 기술 및 RNAi trigger 발굴 기술을 ARS 관련 유전자들을 모델로 개발하고자 함. 따라서 본 연구는 유전체에 존재하는 모든 유전자들에 대한 RNAi trigger들로

본 과제에서는 약 200여개의 ARS 관련 유전자들에 대한 RNAi library를 제작하고, 이들로부터 RNAi trigger(유전자 발현 억제 효과가 높은 siRNA/shRNA) 발굴을 목적으로 수행하고 있음.

cDNA, genomic DNA, 또는 oligonucleotides library를 시작으로 필요한 RNAi library를 제작하는 기술 및 RNAi trigger 발굴 기술을 ARS 관련 유전자들을 모델로 개발하고자 함. 따라서 본 연구는 유전체에 존재하는 모든 유전자들에 대한 RNAi trigger들로 구성된 genome-wide RNAi library의 자체 제작을 가능케 함. 또한 연구단내 유전체 및 단백질체 연구자들을 포함한 target 발굴 그룹의 연구를 통해서 얻어진 새로운 ARS 관련 유전자들에 대한 RNAi library 제작 및 RNAi trigger 발굴을 효과적으로 할 수 있게 함.

1단계 2년차에서 시작한 본 과제는 기존의 방법과 구별되는 RNAi library 제작 기술을 확립하였고, 22개 ARS 유전자들에 대한 RNAi library를 제작하였고, siRNA/shRNA 발현을 조절할 수 있는 inducible 또는 constitutive-expression lentiviral vector들을 개발하고 있으며, Cre recombinase/loxP의 site-specific recombination을 이용해서 target 유전자와 fusion된 형광 물질의 발현 시스템을 개발하는 연구, 또한 이들 3가지 요소들을 결합해서 RNAi library에서 RNAi trigger를 발굴하는 방법을 정립하는 연구를 1년 동안 수행하고 있음.

(출처 : 보고서 요약서 3p)

Abstract ▼

IV. Results

☞ Development of a new technique that constructs RNAi library from cDNA, genomic DNA or oligonucleotide templates containing only sense strand, which is different from the current technique that assembles RNAi libraries by cloning PCR products amplified from the oligonucleotide te

IV. Results

☞ Development of a new technique that constructs RNAi library from cDNA, genomic DNA or oligonucleotide templates containing only sense strand, which is different from the current technique that assembles RNAi libraries by cloning PCR products amplified from the oligonucleotide templates of 'sense strand-hairpin loop-antisense strand.’
☞ Preparation of a RNAi library of 20 ARS genes.
☞ Development of inducible and constitutive-expression lentiviral vectors to express siRNA/shRNA
☞ Development of a system to express target gene-fluorescence molecules using Cre recombinase/loxP. We tested BFP, RFP, iRFP, membrane-bound myc5 tandem repeat/Cy5, membrane-bound myc10 tandem repeat/Cy5 fluorescence molecules.
☞ Establishment of a protocol to identify RNAi triggers, combining the target expression system and RNAi library, working with integrin β1 as a model system.

(출처 : SUMMARY 6p)

목차 Contents

• 표지 ... 1
• 제출문 ... 2
• 보고서 요약서 ... 3
• 요약문 ... 4
• SUMMARY ... 6
• CONTENTS ... 7
• 목차 ... 8
• 제1장 연구개발과제의 개요 ... 9
• 제1절 연구개발의 목적 ... 9
• 제2절 연구개발의 필요성 및 범위 ... 9
• 1. 연구개발의 과학기술, 사회경제적 중요성 ... 9
• 2. 연구개발의 필요성 ... 10
• 3. 연구개발의 범위 ... 11
• 제2장 국내외 기술개발 현황 ... 12
• 제1절 국내외 기술개발 현황 ... 12
• 1. siRNA 치료제의 연구 ... 12
• 2. RNAi trigger 응용분야 ... 12
• 제2절 연구결과가 국내외 기술개발 현황에서 차지하는 위치 ... 14
• 제3장 연구개발수행 내용 및 결과 ... 15
• 제1절 이론적, 실험적 접근 방법 ... 15
• 1. RNAi trigger 발현 vector의 종류 ... 15
• 2. RNAi library 제작 및 RNAi trigger sequence를 vector에 cloning 하는 방법 ... 16
• 3. 3가지 종류의 RNAi trigger 발현에 필요한 viral vector들의 제작 ... 18
• 4. RNAi trigger 발굴을 위한 target 유전자 발현 system ... 19
• 5. FACS를 이용한 RNAi trigger 발굴 system ... 20
• 제2절 연구내용 및 결과 ... 21
• 1. ARS 유전자들에 대한 RNAi library 제작 ... 21
• 2. 현재 사용되고 있는 RNAi library 제작 방법에 대한 error rate 측정 및 이를 대체할 수 있는 새로운 제작 방법 개발을 위한 예비 실험 ... 23
• 3. 105 종류의 oligonucleotide로 구성된 microarray plate에서 subpopulation을 amplification 하기 위한 multiplex PCR ... 25
• 4. siRNA/shRNA 발현을 조절할 수 있는 inducible 또는 constitutive-expression lentiviral vector들의 개발 ... 26
• 5. Cre recombinase/1oxP의 site-specific recombination 및 target 유전자와 funsion된 형광 물질의 발현을 이용한 target 유전자 발현 시스템 개발 ... 27
• 6. RNAi library에서 RNAi trigger를 발굴하는 방법을 ARS 유전자들 및 integrin β1을 대상으로 정립 ... 28
• 제4장 목표달성도 및 관련분야에의 기여도 ... 31
• 제1절 연구개발의 목표달성도 ... 31
• 1. 연구개발의 최종목표 ... 31
• 2. 연구개발 목표 및 내용 ... 31
• 3. 연구개발 목표달성도 ... 32
• 제2절 관련분야의 기술발전에의 기여도 ... 32
• 제5장 연구개발결과의 활용계획 ... 33
• 제1절 추가연구의 필요성 ... 33
• 1. RNAi library 제작 ... 33
• 2. RNAi trigger 발굴 ... 33
• 제2절 타연구에의 응용 ... 33
• 제3절 기업화 추진방안을 기술 ... 33
• 제6장 연구개발과정에서 수집한 해외과학기술정보 ... 34
• 제7장 연구시설, 장비 현황 ... 35
• 제8장 참고문헌 ... 36
• 끝페이지 ... 37