초록 ▼

IV. 연구개발결과
。질려자 추출물의 지표물질 설정 및 유효성분 분리
질려자 주출물로부터 지표성분을 quercetin-3-gentiobioside로 설정하고 N-trans-ρ-caffeoyl tyramine, tribulusamide D 등의 유효성분을 포함하여 총 23종의 화합물을 분리정제 하였음

。표준화된 최적 공정 확립
질려자 용매별 추출을 실시하고, 각 추출물별 효능을 검증하여 최적 수율 및 효능을 검토하고 질려자 추출물 제조의 최적 공정을 확립하였음.

。대량생산 공정을 통한 Pil

IV. 연구개발결과
。질려자 추출물의 지표물질 설정 및 유효성분 분리
질려자 주출물로부터 지표성분을 quercetin-3-gentiobioside로 설정하고 N-trans-ρ-caffeoyl tyramine, tribulusamide D 등의 유효성분을 포함하여 총 23종의 화합물을 분리정제 하였음

。표준화된 최적 공정 확립
질려자 용매별 추출을 실시하고, 각 추출물별 효능을 검증하여 최적 수율 및 효능을 검토하고 질려자 추출물 제조의 최적 공정을 확립하였음.

。대량생산 공정을 통한 Pilot 추출물 확보
표준화된 최적 공정법을 이용하여 질려자의 대량생산 공정을 실시하였고 pilot 추출물을 확보하였음.

。최적 추출물속 유효성분 분리 및 분석 완료
최적 추출물로부터 지표 및 유효성분을 포함하여 총 23종의 화합물을 분리정제 하였으며 HPLC를 이용하여 최적 분석 조건을 확립 하였다. 유효성분 및 지표물질들의 HPLC 등 분석기기를 이용한 최적 분리 및 분석 조건을 확립함.

。원료 규격 표준화 및 원료 validation
HPLC를 이용하여 지표성분의 최적 분석 조건을 확립하고 원료 및 지표성분에 대한 분석법 validation을 통해서 원료 규격 표준화를 실시하였음.

。안정성 평가
시제품에 사용될 제형의 물리 화학적 장기보존 평가 진행

。원료표준화 자료 지속적인 보완
원료 표준화에 필요한 추가 자료 보완 및 자료에 대한 수정을 실시하였음.

。질려자 추추물 및 유효물질의 항염증 활성
질려자 추출물 및 유효물질인 N-trans-ρ-caffeoyl tyramine, tribulusamide D를 lipopolysaccahride (LPS)에 의해 유도된 RAW 264.7 세포주에 처리하여 NO 분비 억제 효과를 관찰하였으며, MTT 결과로부터 뚜렷한 세포독성은 나타나지 않음.

。질려자 추출물 및 유효물질의 염증관련 인자 발현수준 분석 질려자 추출물 및 유효물질인 N-trans-ρ-caffeoyl tyramine, tribulusamide D를 처리하여 염증관련 유전자인 IL-6, IL-10, TNF-α의 발현이 농도 의존적으로 감소하는 것이 관찰되었음.

。C0X-2 발현수준 분석
질려자 추출물 및 유효물질인 N-trans-ρ-caffeoyl tyramine, tribulusamide D를 처리하여 C0X-2 유전자 발현 수준을 RT-PCR을 통해, 단백질 발현수준을 western blot을 통해 확인한 결과, 농도 의존적으로 그 발현양이 감소하는 것을 관찰함.

。PGE₂ 발현수준 분석
질려자 추출물 및 유효물질인 N-trans-ρ-caffeoyl tyramine, tribulusamide D를 처리하여 PGE₂ 단백질 발현수준을 ELISA로 확인한 결과, 농도 의존적으로 그 발현양이 감소하는 것을 관찰함.

。관절염 동물모델에서의 골소주 분석
골소주 분석결과 초과 추출물이 골관절염의 보호 효과를 갖는 것을 확인할 수 있었음. 초과 추출물 투여군에서 bone이 차지하는 비율을 의미하는 BV/TV 항목과, 해면골의 두께를 의미하는 ‘Tb/Th’ 항목에서 높은 수치를 보였음. 또한 골의 표면적을 의미하는 ‘Tb.Sp’ 항목에서 낮은 수치를 보였음.

(출처 : 요약문 4p)

Abstract ▼

IV. The results of Research and Development
o Determination of marker compounds and isolation of bioactive components from T. terrestris extract.
o Determination of marker compounds (quercetin-3-gentiobioside) and isolation of 23 compounds including bioactive components (N-trans-ρ-caffeoyl ty

IV. The results of Research and Development
o Determination of marker compounds and isolation of bioactive components from T. terrestris extract.
o Determination of marker compounds (quercetin-3-gentiobioside) and isolation of 23 compounds including bioactive components (N-trans-ρ-caffeoyl tyramine, Tribulusamide D)
o Data supplementation of standardizing of raw materials Data supplementation and revision of standardizing of raw materials
o The anti-inflammatory activities of ETT (Ethanol extract of T. terrestris) and compounds
ETT and N—trans-ρ-caffeoyl tyramine and Tribulusamide D prohibited NO production in LPS—stimulated RAW 264.7 cells without affecting its cell viability.

o The effects of ETT and compounds on the expression of inflammatory cytokines
ETT and N-trans-ρ-caffeoyl tyramine and Tribulusamide D suppressed the expression of LPS-induced inflammatory cytokines such as interleukin-6, interleukin-10, and tumor necrosis factor-α in LPS-stimulated RAW 264.7 cells.

o The effects of ETT and compounds on inhibition of COX-2 expression
ETT and compounds treatment resulted in the dose-dependent suppression COX-2 mRNA expression by RT-PCR and COX-2 protein expression by Western blot.

o The effects of ETT and compounds on inhibition of PGE₂ expression
ETT treatment resulted in the dose-dependent suppression PGE₂ protein expression by ELISA assay.

o Morphometric parameters of subcondral bone in the MIA-induced model
Morphometric parameters analysis showed protective effects of ETT on trabecular bone ETT tended to increase in trabecular thickness(Tb.Th) and trabecular bone volume fraction(BV/TV). Treatment with EAA significantly decreased the level of trabecular spacing(Tb.Sp).

(출처 : SUMMARY 11p)

목차 Contents

• 표지 ... 1
• 제 출 문 ... 2
• 요 약 문 ... 3
• SUMMARY ... 10
• CONTENTS ... 17
• 목차 ... 18
• 제1장 연구개발과제의 개요 ... 19
• 제1절 연구개발의 목적 ... 19
• 제2절 연구개발의 필요성 ... 19
• 제3절 연구개발의 범위 ... 20
• 제2장 국내외 기술개발 현황 ... 22
• 제1절 국내외 관련 기술의 현황과 문제점 ... 22
• 1. 관절건강 도움 및 관절염 완화 보조제로서의 기능 식품들의 현황 ... 22
• 2. 천연물 유래 관절염 치료제 및 관절건강에 관한 건강기능식품의 현황 ... 23
• 3. 질려자로부터 관절건강 관련 건강기능 식품의 개발 가능성 ... 24
• 4. 원료 사용량 및 농가수익에 대한 예측, 분석을 구체화하여 제시 ... 24
• 제3장 연구개발수행 내용 및 결과 ... 25
• 제1절 질려자 추출물의 성분연구 ... 25
• 1. 질려자의 산지별 추출 용매에 따른 수율(%) 평가 ... 25
• 2. 질려자 추출물로부터 항염활성 물질의 분리 및 구조규명 ... 25
• 제2절 질려자 추출물의 원료표준화 및 pilot scale 추출공정 연구 ... 50
• 1. 지표물질 설정[원문불량 ... p.51]
• 2. 원료 규격 표준화 및 원료 validation ... 52
• 3. 질려자 pilot 추출 공정개발 및 추출물 제조와 관련 질려자 추출물 연구용 재공품 제조기록서 ... 72
• 제3절 질려자 추출물의 안정성 시험 ... 75
• 1. 가속시험, 장기보존시험 실시 : initial, 2, 4, 6개월간 실시 ... 75
• 제4절 대식세포에서 질려자 추출물의 항염증 활성 ... 105
• 1. 대식세포에서 염증 억제 활성 평가 방법 ... 105
• 2. 대식세포에서 염증 관련 유전자 및 단백질 발현수준 분석 방법 ... 105
• 3. 질려자 추출물의 세포내 항염증 활성 결과 ... 106
• 3. 질려자 80% 주정 추출물과 질려자에서 분리된 유효물질의 항염증 활성 ... 116
• 4. 질려자 80% 주정 추출물과 유효물질의 in vitro 항염증 활성 실험 결과 ... 118
• 제5절 염증동물모델에서의 질려자 추출물의 염증 억제 평가 ... 124
• 1. 급성 염증 동물모델 구축 ... 124
• 2. MIA 동물모델을 이용한 관절개선 in vivo 평가 ... 128
• 제6절 질려자 추출물의 동물내 안전성 평가 ... 132
• 1. sprague-Dawley 랫드를 이용한 단회 경구투여 독성시험 ... 132
• 제7절 질려자 추출물 영양성분검사 ... 137
• 1. 영양성분 검사가 가능한 공인기관에 의뢰하여 실시 ... 137
• 제8절 인체적용시험 및 IRB 승인 ... 138
• 1. 제형 연구 및 시제품 제작 ... 138
• 2. 인체적용시험 계획서 ... 139
• 2. IRB 승인 ... 145
• 제4장 목표달성도 및 관련분야에의 기여도 ... 146
• 제1절 목표달성도 ... 146
• 제2절 관련분야에의 기여도 ... 147
• 제5장 연구개발 성과 및 성과활용 계획 ... 148
• 제1절 연차별 연구성과 목표 및 성과 ... 148
• 1. 연구성과 ... 148
• 제2절 성과 활용 계획 ... 153
• 1. 성과활용계획 ... 153
• 2. 사업화 계획 ... 154
• 제6장 참고문헌 ... 155
• 끝페이지 ... 155