초록 ▼

연구의 목적 및 내용
간흡충의 담즙화학주성을 매개하는 도파민 수용체를 증명하고 분자생물학적 특성과 세포생물학적 기능 분석을 수행하여 간흡충의 담즙화학주성과 관련된 도파민 매개 분자기전의 기초적 정보를 확보하고자 하였다. 간흡충 도파민 수용체의 분자생물학적 특성과 세포생물학적 기능을 분석하였다. 간흡충 도파민 수용체의 전장 cDNA를 확보하고 간흡충 조직 내 분포와 발육단계별 발현양상을 분석하였다. 포유동물세포주 세포에 간흡충 도파민 수용체 단백질을 발현시키고 활성을 검정하였다. 간흡충에서 도파민 수용체의 발현을 RNAi로 억제

연구의 목적 및 내용
간흡충의 담즙화학주성을 매개하는 도파민 수용체를 증명하고 분자생물학적 특성과 세포생물학적 기능 분석을 수행하여 간흡충의 담즙화학주성과 관련된 도파민 매개 분자기전의 기초적 정보를 확보하고자 하였다. 간흡충 도파민 수용체의 분자생물학적 특성과 세포생물학적 기능을 분석하였다. 간흡충 도파민 수용체의 전장 cDNA를 확보하고 간흡충 조직 내 분포와 발육단계별 발현양상을 분석하였다. 포유동물세포주 세포에 간흡충 도파민 수용체 단백질을 발현시키고 활성을 검정하였다. 간흡충에서 도파민 수용체의 발현을 RNAi로 억제시키는 연구을 수행하였다.

연구결과
간흡충의 생물정보학적 데이터베이스를 분석하여 간흡충 도파민 수용체의 유전자 정보를 확보하고 도파민 수용체 2종의 전장 cDNA를 확보하였다(CsD1, 1656 bp, 551 aa; CsD2, 1509 bp, 502 aa). 두 종류 모두 7개의 막통과영역을 가지고 있었으며, 계통분류학적 분석에서 각각 D₁-like receptor (CsD1)과 D₂-like receptor (CsD2)으로 구분되었다. 두 종류의 도파민 수용체 유전자는 모두 성충보다 피낭유충에서 74.8배 및 84.9배 더 높게 발현되었다. CsD1과 CsD2의 재조합단백질, 면역혈청을 생산하여 면역 조직염색을 실시하였다. 도파민 수용체는 간흡충 성충의 구흡반, 표피하조직, 장벽에 분포하였다. 포유동물세포주 세포를 2종의 간흡충 도파민 수용체로 각각 형질전환시키고 안정적 세포주(HEK293-CsD1, HEK293-CsD2)를 생산한 다음, 도파민을 처리하여 도파민 수용체의 활성을 평가하였다. HEK293-CsD1은 도파민에 의해 cAMP의 농도가 증가하였고, HEK293-CsD2의 경우는 감소하였다. 간흡충 성충을 dsRNA가 포함된 배지에 soaking 시키는 방법으로 간흡충 성충에서 도파민 수용체의 발현을 억제시켰다.

연구결과의 활용계획
- 간흡충 도파민신경 및 담즙화학주성 조절 기능의 세계 최초 규명은 기생연충의 숙주 내 기생부위 선택 및 이동의 분자기전을 이해할 수 있는 원천 지식 제공과 새로운 학문적 이론의 확립에 기여
- 기생연충 신약 개발 표적물질 또는 후보물질 발굴로 의생명과학관련 산업 발전을 촉진하고 효율적인 기생충증 관리와 인류 건강증진에 기여

(출처 : 한글요약문 4p)

Abstract ▼

Purpose& contents
The aims of this study are to prove the presence of the dopamine receptor in Clonorchis sinensis and to analyze the molecular and biological mechanisms of C. sinensis migration mediated by dopamine receptor. In current study, characteristic features of two receptors (CsD1 and Cs

Purpose& contents
The aims of this study are to prove the presence of the dopamine receptor in Clonorchis sinensis and to analyze the molecular and biological mechanisms of C. sinensis migration mediated by dopamine receptor. In current study, characteristic features of two receptors (CsD1 and CsD2) in C. sinensis were investigated at the level of molecular, structural and cell biology. Mammalian cells stably expressing CsDs were generated, and functions of CsDs were analyzed. And we performed a study to inhibit the expression of CsDs in C. sinensis worms with RNAi.

Result
In this study, cDNA of C. sinensis dopamine receptor was cloned and analyzed on molecular biological characters. cDNA clones of C. sinensis dopamine receptors (CsDs) were retrieved from C. sinensis transcriptome data base. CsD1 deduced polypeptide consisted of 551 amino acids and CsD2 of 502 amino acids, both of which were predicted to have 7 transmembrane domains. CsD recombinant proteins were produced and purified using bacterial expression system. In order to check developmental expression levels of CsDs, cDNA of C. sinensis metacercariae and adult worms. CsD1 was expressed 74.8 times higher in C. sinensis adults than in metacercariae, while CsD2 was 84.9 times higher in adults than in metacercariae. Immune sera were produced against both recombinant proteins in mice. By immunohistochemical staining, both transporters were localized in oral suckers, subtegumental region, and intestinal wall of C. sinensis adult. The signaling mechanism of CsDs were investigated by expressing the cDNA in cultured mammalian cells and measuring the effect of receptor activation on cAMP. Intracellular cAMP levels in the cell line expressing CsD1 was increased by dopamine treated. The expression of dopamine receptors in C. sinensis adults was suppressed by soaking in the a medium containing dsRNA.

Expected Contribution
Direct evidence on dopaminergic neuron of C. sinensis and understanding its molecular mechanism in bile-chemotaxis of C. sinensis will provide a new academic concept on dopaminergic neuron system in helminth parasites and an important basic information for development of new anthelmintic drugs.

(출처 : SUMMARY 5p)

목차 Contents

• 표지 ... 1
• 목차 ... 2
• 연구계획 요약문 ... 3
• 연구결과 요약문 ... 4
• 한글요약문 ... 4
• SUMMARY ... 5
• 연구내용 및 결과 ... 6
• 1. 연구개발과제의 개요 ... 6
• 2. 연구수행 내용 및 결과 ... 9
• 3. 목표달성도 및 관련분야에의 기여도 ... 20
• 4. 연구결과의 활용계획 ... 21
• 5. 주관연구책임자 대표적 연구실적 ... 22
• 6. 참고문헌 ... 22
• 7. 연구성과 ... 23
• 8. 국가과학기술지식정보서비스에 등록한 연구시설‧장비 현황 ... 23
• 9. 기타사항 ... 23
• 끝페이지 ... 23