보고서 정보
주관연구기관 |
충남대학교 Chungnam National University |
연구책임자 |
서경원
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보고서유형 | 최종보고서 |
발행국가 | 대한민국 |
언어 |
한국어
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발행년월 | 2017-06 |
과제시작연도 |
2016 |
주관부처 |
과학기술정보통신부 Ministry of Science and ICT |
등록번호 |
TRKO201800004243 |
과제고유번호 |
1345248525 |
사업명 |
이공학개인기초연구지원 |
DB 구축일자 |
2018-04-28
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DOI |
https://doi.org/10.23000/TRKO201800004243 |
초록
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1. 개의 자연발생한 고형암으로부터 primary cell culture를 실시하여 췌장, 비강, 방광, 항문, 구강 종양으로부터 각각 인슐린종, 상피암종, 이행상피암종, 육종, 흑색종 세포를 분리하였고, 각각의 세포에 면역염색을 실시하여 Pan-cytokeratin에 양성, Vimentin에 음성임을 확인하였으며, 도립현미경을 이용하여 세포의 형태를 관찰하고 doubling time을 측정하였다. 또한 누드마우스의 미정맥에 세포를 접종하여 폐에 종양이 유발되는 것을 확인하고 H&E염색도 실시하였다.
2. Primary cel
1. 개의 자연발생한 고형암으로부터 primary cell culture를 실시하여 췌장, 비강, 방광, 항문, 구강 종양으로부터 각각 인슐린종, 상피암종, 이행상피암종, 육종, 흑색종 세포를 분리하였고, 각각의 세포에 면역염색을 실시하여 Pan-cytokeratin에 양성, Vimentin에 음성임을 확인하였으며, 도립현미경을 이용하여 세포의 형태를 관찰하고 doubling time을 측정하였다. 또한 누드마우스의 미정맥에 세포를 접종하여 폐에 종양이 유발되는 것을 확인하고 H&E염색도 실시하였다.
2. Primary cell culture를 통해 얻어낸 이행상피암종 세포와 중피세포종에 걸린 개의 흉수를 원심분리하여 얻어낸 중피세포종 세포를 배양한 다음 Tyrosine Kinase Inhibitor인 Imatinib, Sunitinib, Toceranib을 처리했을 때, 전자의 경우 세 약물 모두에서 dose-dependent 하게, 후자의 경우 Sunitinb과 Toceranib 8uM 이상의 농도에서 세포성장이 유의적으로 저해되는 것을 확인하였다.
3. 일본 도쿄대로부터 네 종류의 흑색종 세포주를 (CMeC1, CMeC2, KMeC, LMeC), 미국 캘리포니아대로부터 다섯 종류의 흑색종 세포주를 (UCDK9M1, UCDK9M2, UCDK9M3, UCDK9M4, UCDK9M5) 분양받았으며, 이들 중 전이소가 아닌 구강과 피부 원발 종양으로부터 분리된 세포주인 CMeC1, KMeC, UCDK9M3, UCDK9M4를 실험에 사용하였다. SMO 저해제인 cyclopamine과 GLI 저해제인 GANT61을 세포에 처리했을 때 WST-1 assay, cell counting을 통하여 농도에 비례하여 세포성장이 억제되는 것을 확인하였고, colony formation assay를 통하여 콜로니 형성 능력이 감소하는 것을 확인하였다.
4. 흑색종의 신호전달체계를 밝히기 위한 대조군으로 개의 정상 피부조직으로부터 melanocyte를 분리하여 실험에 사용하였다. 네 개의 흑색종 세포주로부터 단백질을 분리하여 Melanocyte에서 분리한 단백질과 비교하였을 때 KMeC, CMeC1, UCDK9M3 순으로 Sonic Hedgehog 단백질 발현이 높게 확인되었다. 한편, CMeC1, CMeC2, KMeC, LMeC 세포주에서 Sonic Hedgehog 신호전달체계에 관여하는 SHH, SMO, GLI1, GLI2 PTCH1에 대한 RNA 발현을 분석하였을 때 SHH의 경우 LMeC에서, SMO, GLI1, GLI2, PTCH1의 경우 CMeC1과 KMeC에서 높게 발현되는 것을 확인하였다. Melanocyte를 대조군으로 한 RNA와 단백질 발현의 분석은 진행 중에 있다.
5. 개의 심장사상충증 치료약물로 사용되고 있는 Melarsomine dihydrochloride는 비소를 포함하고 있다. 이 약물을 개 흑색종 세포주에 처리하였을 때 세포 성장이 저해되는 것을 확인하였다. 또한 약물을 처리하지 않은 세포(대조군)와 처리한 세포(실험군)로부터 RNA를 추출하여 real time RT-PCR을 실시하였을 때 대조군에 비해 실험군에서 GLI 유전자의 발현이 감소한 것을 확인하였다. 이를 토대로 실제 임상에서 수술적 제거가 불가능하거나 재발한 개 흑색종 환축에 본 약물이 적용가능한지에 대한 추가적인 연구가 필요하다.
6. 부가적으로 개 흑색종 세포주에 고농도의 비타민C를 처리하였을 때 농도 의존적으로 세포 활성이 감소하였고 early apoptotic cell과 late apoptotic/necrotic cell이 증가하였다. 또한 catalase를 처리하였을 때 고농도의 비타민C에 의한 세포 활성 저해가 일어나지 않는 것을 통해 고농도의 비타민C가 활성산소를 만들어 냄으로써 항종양효과를 가지는 것을 확인하였다. 정상 비글견에 고농도의 비타민C를 점적주사 하였을 때 부작용이 있는지, 혈액수치가 변하는지 등의 안정성을 평가 중에 있으며, 흑색종을 유발한 마우스에 고농도의 비타민C를 투여하여 안정성과 치료효과를 평가하고 있다. 실제로 사람 암환자에 적용하고 있는 고농도 비타민C 치료요법이 수술이 불가능하거나 특별한 치료약이 없는 개 종양 환축에서도 적용 가능할 것으로 기대된다.
(출처 : 요약문 4p)
목차 Contents
- 표지 ... 1
- 목차 ... 3
- Ⅰ. 연구결과 요약문 ... 4
- Ⅱ. 연구내용 및 결과 ... 5
- 1. 연구과제의 개요 ... 5
- 2. 국내외 기술개발 현황 ... 5
- 3. 연구수행 내용 및 결과 ... 6
- 4. 목표 달성도 및 관련 분야에의 기여도 ... 8
- 5. 연구결과의 활용계획 ... 8
- 6. 연구과정에서 수집한 해외과학기술정보 ... 9
- Ⅲ. 연구성과 ... 10
- 끝페이지 ... 18
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