초록 ▼

연구의 목적 및 내용
생체내 미량 존재하는 주요 생리활성 인지질인 혈소판 활성화 인자 및 이의 유사지질,플라즈마로겐 및 포스포이노시티드들은 골다공증, 당뇨병 및 암 등 관련 질병의 이해 및 신약개발 타켓에 있어 중요한 것으로 알려져 있음. 이러한 생리활성 인지질의 정량은 기초 및 임상연구에 있어 필수적이나, 아직 분석법이 정립되어 있지 않음. 따라서 본 연구자는 생체조직 및 혈액에서 상기 생리활성 인지질의 여러 이성체들을 정량할 수 있는 질량분석기 기반의 분석법을 개발하고,표준 프로토콜로 정립하였고, 다양한 생체시료에 적용하였

연구의 목적 및 내용
생체내 미량 존재하는 주요 생리활성 인지질인 혈소판 활성화 인자 및 이의 유사지질,플라즈마로겐 및 포스포이노시티드들은 골다공증, 당뇨병 및 암 등 관련 질병의 이해 및 신약개발 타켓에 있어 중요한 것으로 알려져 있음. 이러한 생리활성 인지질의 정량은 기초 및 임상연구에 있어 필수적이나, 아직 분석법이 정립되어 있지 않음. 따라서 본 연구자는 생체조직 및 혈액에서 상기 생리활성 인지질의 여러 이성체들을 정량할 수 있는 질량분석기 기반의 분석법을 개발하고,표준 프로토콜로 정립하였고, 다양한 생체시료에 적용하였음.

연구결과
1) 분석법 개발을 위한 타겟 생리활성 인지질
• 에탄올아민 플라즈마로겐과 콜린 플라즈마로겐 (plasmalogens)
• 혈소판 활성화 인자와 혈소판 활성화 인자 유사지질 (PAF and PAF like lipids)
• 포스포이노시티드: PI, PI3P, PI(3,4)P₂, PI(3,4,5)P₃ (Phosphoinositides)(포스포이노시티드 프로파일링 기법은 Journal of Lipid Research (IF 4.37)에 게재)
2) LC-MS/MS 정량분석법 개발
○ 시료전처리
○ 해당 지질체의 분자특이적 MS/MS (MRM, Neutral loss scan, Precursor Ion scan)
○ LC 조건 최적화
• 역상 (Reverse Phase, RP), 친수성고정상 (HILIC) 등 최적의 LC 컬럼 선택
• 이동상 종류 및 이동상 구배 (gradient) 조건 최적화
3) 생리활성 인지질의 LC-MS/MS 정량분석법 개발 완료 및 표준 프로토콜 정립
○ 지방산 길이, 불포화도에 따른 생리활성 인지질 이성체들의 LC-MS/MS 정량분석법 개발
○ 생체 조직 및 혈액 시료에 개발된 분석법을 하였음.
○ 시료전처리부터 분자특이적 LC-MS/MS 분석법까지 생체시료를 위한 표준 프로토콜로 정립
4) 다양한 생체 시료에 적용
○ 플라즈마로겐 분석법은 장기 이식 환자의 혈청에 적용하여 바이오마커 발굴에 활용(국내출원 1건)

연구결과의 활용계획
○ 생리활성 인지질들은 다른 여러 지질체들에 비해 MS/MS를 이용한 특이적 검출방법에 대한 연구가 소홀한 분야임. 생리활성 인지질들에 대한 새로운 MS/MS 기법 개발은 질량분석학내에서 새로운 지평을 열 것으로 생각됨.
○ 최근 관심이 높아져가고 있는 지질체학 분야로, 골다공증 등 여러 질병과 밀접한 관계있는 생리활성 인지질을 대상으로 함. 따라서, 본 연구 및 향후 응용연구의 결과물들을 최우수 국제적 학술지에 게재할 수 있고, 지질체 관련 임상연구에도 선도적 역할 수행이 기대됨.
○ 최근 질량분석기를 이용한 분석서비스나 진단키트로 상용화가 많이 이루어지고 있으며, 해당 연구는 다양한 질환의 진단 또는 치료효과 마커로서의 분석서비스 개발을 위한 기반기술로 활용가능함.

( 출처 : 한글요약문 4p )

Abstract ▼

Purpose&contents
Major bioactive phospholipids such as plasmalogens, PAF, PAF like lipids and PtdInds are important for the understanding of diseases and drug target discovery. Although the quantitation of these bioactive phospholipids are crucial for biomedical researches, analytical platforms f

Purpose&contents
Major bioactive phospholipids such as plasmalogens, PAF, PAF like lipids and PtdInds are important for the understanding of diseases and drug target discovery. Although the quantitation of these bioactive phospholipids are crucial for biomedical researches, analytical platforms for quantitation of these lipids have not been established. We developed MS-based analytical platforms and applied these methods for quantitative determination of these lipids from various biological samples.

Result
1) Major bioactive phospholipids for method development
• ethanolamine-plasmalogens and choline-plasmalogens
• Platelet activating factors and platelet activating factor like lipids
• Phosphoinositides: PI, PI3P, PI(3,4)P₂, PI(3,4,5)P₃(published on Journal of Lipid Research in 2017 (IF 4.37))
2) Analytical method optimization for each bioactive phospholipid
○ Sample preparation
○ Lipid specific MS/MS (MRM, Neutral loss scan, Precursor Ion scan)
○ Optimization of LC condition
• Stationary phase; Reverse Phase(RP), Aqueous normal phase (HILIC)
• Mobile phase composition and optimizaton of LC gradient
3) Establishment of LC-MS/MS based quantitation method and Statement of Procedure (SOP)
○ LC-MS/MS based quantitation method which can differentiate fatty acid chain length and unsaturation among bioactive phospholipid isomers
○ Application of developed method to tissues and bloods from various biological samples
○ Completion of SOP including sample preparation, molecule-specific LC-MS/MS methods, and data analysis
4) Application to various biological smaples
○ Application of the developed LC-MS/MS method of plasmalogen to human serums to find biomarkers of organ transplantation rejection(Domestic patent application; 1 case)

Expected Contribution
○ Analytical methods for bioactive phospholipds were not successfully developed to meet the needs in bio-related researches, comparing to other phospholipids. The developed analytical methods for these lipids based on novel MS/MS strategies play an important role in mass spectrometry based analytical chemistry.
○ Lipidomics is the part of omics and recently drawn more attention, and bioactive phospholipids are related to various human diseases such as osteoporosis. The developed analytical methods for bioactive phospholipids can be applied to basic biology, translational or clincial researches.
○ Recently, mass-spectrometry based analytical services or diagnostic kits have been commercialized. The developed methods can be used as core technologies for development of diagnostic kits or biomarkers related to various human diseases.

( 출처 : SUMMARY 5p )

목차 Contents

• 표지 ... 1
• 목차 ... 2
• 연구계획 요약문 ... 3
• 연구결과 요약문 ... 4
• 한글요약문 ... 4
• SUMMARY ... 5
• 연구내용 및 결과 ... 6
• 1. 연구개발과제의 개요 ... 6
• 2. 국내외 기술개발 현황 ... 7
• 3. 연구수행 내용 및 결과 ... 11
• 4. 목표달성도 및 관련분야에의 기여도 ... 15
• 5. 연구결과의 활용계획 ... 16
• 6. 연구과정에서 수집한 해외 과학기술정보 ... 16
• 7. 주관연구책임자 대표적 연구실적 ... 17
• 8. 참고문헌 ... 17
• 9. 연구성과 ... 18
• 10. 국가과학기술지식정보서비스에 등록한 연구시설‧장비 현황 ... 20
• 11. 연구개발과제 수행에 따른 연구실 등의 안전조치 이행실적 ... 20
• 12. 기타사항 ... 20
• 별첨1 대 표 연 구 성 과 ... 21
• 별첨2 세부 목표 관련 증빙 ... 25
• 끝페이지 ... 31