초록 ▼

연구 개발 목표:
본 연구는 국가줄기세포은행에서 활용할 수 있는 단성생식 전분화능 줄기세포주 수립 및 특성분석 절차서 개발을 목표로 하였음.

연구 개발 내용:
1) 인간 단성생식 조직으로부터 세포 배양 및 단성생식 전분화능 줄기세포주를 수립하였고, 2) 수립된 단성생식 전분화능 줄기세포의 특성은 PCR, Quantitative PCR, Immunocytochemistry으로 전분화능 특이 유전자인 OCT4, SOX2, NANOG 등의 발현, in vitro 및 in vivo 에서의 삼배엽 분화능 분석, 마이크

연구 개발 목표:
본 연구는 국가줄기세포은행에서 활용할 수 있는 단성생식 전분화능 줄기세포주 수립 및 특성분석 절차서 개발을 목표로 하였음.

연구 개발 내용:
1) 인간 단성생식 조직으로부터 세포 배양 및 단성생식 전분화능 줄기세포주를 수립하였고, 2) 수립된 단성생식 전분화능 줄기세포의 특성은 PCR, Quantitative PCR, Immunocytochemistry으로 전분화능 특이 유전자인 OCT4, SOX2, NANOG 등의 발현, in vitro 및 in vivo 에서의 삼배엽 분화능 분석, 마이크로어레이 분석 등을 통해 전분화능을 확인함. 3) SNP array를 통한 단성생식세포주의 동형접합 유전자 구성 확인, 각인유전자 메틸화 확인을 위한 bisulfite sequencing 조건 구축 및 특이적 DNA 메틸화 마커 선별을 위한 human methylation 450k chip 분석을 수행하여 단성생식 유래의 전분화능 줄기세포임을 검증함. 4) SNP분석 및 메틸화 분석 등을 통해 단성생식 전분화능 줄기세포주 검증 프로토콜을 확립함.

결론 및 활용 계획:
본 연구로부터 수립된 단성생식 전분화능 줄기세포주가 줄기세포은행의 분양자원으로 연구자에게 제공 및 줄기세포주 등록업무에 대조군으로 활용될 것으로 판단됨.

(출처 : 최종보고서 요약문 4p)

Abstract ▼

Purpose:
Derivation of parthenogenetic human induced pluripotent stem cells (PgHiSPC) lines and establishment of protocol for characterization of pluripotent stem cells using genome-wide DNA methylation analysis.

Contents:
1) We have generated human PgHiPSCs from ovarian teratoma cell l

Purpose:
Derivation of parthenogenetic human induced pluripotent stem cells (PgHiSPC) lines and establishment of protocol for characterization of pluripotent stem cells using genome-wide DNA methylation analysis.

Contents:
1) We have generated human PgHiPSCs from ovarian teratoma cell lines. 2) Gene expression analysis by RT-PCR and Quantitative PCR showed that PgHiPSCs expressed pluripotency-specific genes, such as OCT4, SOX2 and NANOG.

Immunocytochemistry confirmed that PgHiPSCs expressed the pluripotency-specific proteins OCT4 and SSEA4. We have differentiated PgHiSPCs both in vitro and in vivo, analyzing the expression of PgHiPSCs in embryoid bodies and in teratomas formed of NOD-SCID mice. 3) We performed genome-wide Single-nucleotide polymorphism (SNP) array in PgHiPSCs and showed the genome-wide patterns of homozygosity. We conducted bisulfite sequencing analysis to determine the imprinting pattern and identified candidate DNA methylation markers using human methylation 450k array. 4) We established the characterization analysis protocols for PgHiPSC.

Conclusion of this study:
Our results suggest that PgHiPSCs can be a useful tool for investigation of the roles of the human genetic disease with imprinting and utilization of stem cell bank registration.

(출처 : Summary 5p)

목차 Contents

• 표지 ... 1
• 학술연구개발용역과제 최종결과보고서 ... 2
• 목차 ... 3
• 연구결과최종보고서 요약문 ... 4
• Summary ... 5
• 학술연구개발용역과제 연구결과 ... 6
• 제1장 최종 목표 ... 6
• 제2장 국내외 기술 현황 ... 16
• 제3장 최종 연구 내용 및 방법 ... 19
• 제4장 최종 연구 결과 ... 30
• 제5장 연구결과 고찰 및 결론 ... 53
• 제6장 연구성과 및 활용계획 ... 55
• 제7장 연구용역과제 진행과정에서 수집한 해외과학기술정보 ... 57
• 제8장 기타 중요변경사항 ... 57
• 제10장 참고문헌 ... 58
• 제11장 첨부서류 ... 59
• 끝페이지 ... 129