보고서 정보
주관연구기관 |
가톨릭대학교 Catholic University of Korea |
연구책임자 |
박훈준
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보고서유형 | 최종보고서 |
발행국가 | 대한민국 |
언어 |
한국어
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발행년월 | 2017-12 |
과제시작연도 |
2016 |
주관부처 |
보건복지부 [Ministry of Health & Welfare(MW)(MW) |
등록번호 |
TRKO201800038080 |
과제고유번호 |
1465021732 |
사업명 |
국가보건의료연구인프라구축 |
DB 구축일자 |
2018-09-15
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키워드 |
유전성 부정맥.역분화 줄기세포주.Congenital arrhythmia.Induced pluripotent stem cell.
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DOI |
https://doi.org/10.23000/TRKO201800038080 |
초록
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1. 유전성 부정맥 환자의 임상특성정보 수집과 시료확보
가. 최종적으로 총 50명의 유전성 부정맥 환자에서 체세포 시료로서 말초혈액을 수집함
(서울성모병원 29명, 고대안암병원 21명)
나. 임상특성 상 Long QT syndrome 18명, Brugada syndrome 15명, idiopathic VF 15명, Early repolarization 2명으로 진단됨.
다. 18명의 Long QT Syndrome 중 10명이 유전자 분석에서 질환관련 유전자로서 KCNQ1 (1명), KCNH2 (1
1. 유전성 부정맥 환자의 임상특성정보 수집과 시료확보
가. 최종적으로 총 50명의 유전성 부정맥 환자에서 체세포 시료로서 말초혈액을 수집함
(서울성모병원 29명, 고대안암병원 21명)
나. 임상특성 상 Long QT syndrome 18명, Brugada syndrome 15명, idiopathic VF 15명, Early repolarization 2명으로 진단됨.
다. 18명의 Long QT Syndrome 중 10명이 유전자 분석에서 질환관련 유전자로서 KCNQ1 (1명), KCNH2 (1명), SCN5A (3명), ANK2 (1명), KCNE1 (1명), AKAP9 (3명) 유전자 변이가 검출되었음.
라. 15명의 Brugada Syndrome 중 6명이 유전자 분석에서 질환관련 유전자로서 SCN5A (3명), CACNB2 (1명), KCNE3 (1명), HCN4 (1명) 유전자 변이가 검출되었음.
마. 15명의 idiopathic VF 환자들 중 Long QT 혹은 Brugada syndrome 관련 유전자인 SCN5A (2명) 및 CPVT 관련 유전자인 RYR2 (1명) 유전자 변이가 검출됨.
차. 2명의 early repolarzation syndrome 환자들 중 Long QT type 11 관련 유전자인 AKAP9 (c.9113G>A, Arg3038His) 유전자 변이가 검출됨. 발생빈도가 0.006% 이내로 매우 드문 변이로서 질환 관련성은 variant of uncertain significnace (VUS)인 상태임.
2. 리프로그래밍 기법을 이용한 역분화줄기세포 생산
· Long QT syndrome 환자 시료들 중 임상적으로 관련성이 높은 유전자 변이가 검출된 01_P_CMC (LQTS2), 05_P_CMC (LQTS3), 08_P_CMC (LQTS1) 시료로 부터 Sendai virus를 이용하여 역분화 줄기세포를 수립하고 다분화능 및 품질검증을 수행함.
3. 역분화 줄기세포의 심근세포 분화, 정제기술 개발 및 세포특성 분석
· Wnt pathway activator인 CHIR99021과 Wnt signal의 선택적 inhibitor인 Wnt-C59로 심근세포로 분화시켰으며 CDM3-L 배지에 5일동안 배양하여 정제함. 특성파악을 위해 단일세포에서 패치고정법을 이용하여 활동전위를 측정함.
(출처 : 최종보고서 요약문 4p)
Abstract
▼
1. Collection of primary cells and clinical informations of Korean genetic arrhythmia
가. Total 50 patients were enrolled based on the clinical informations of congenital arrhythmia and blood sampling was performed for banking as a source of iPSC line (Seoul St. Mary's Hospital, n=29; Korea Unive
1. Collection of primary cells and clinical informations of Korean genetic arrhythmia
가. Total 50 patients were enrolled based on the clinical informations of congenital arrhythmia and blood sampling was performed for banking as a source of iPSC line (Seoul St. Mary's Hospital, n=29; Korea University of Hospital, n=21)
나. Clinical diagnosis was confirmed as Long QT syndrome (n=18), Brugada syndrome (n=15), idiopathic VF (n=15), and early repolarization syndrome (n=2).
다. Among 18 patients of Long QT syndrome, 10 patients were identified to have disease-associated gene mutations, such as KCNQ1 (n=1), KCNH2 (n=1), SCN5A (n=3), ANK2 (n=1), KCNE1 (n=1), and AKAP9 (n=3).
라. Among 15 patients of Brugada syndrome, 6 patients were identified to have a disease-associated gene mutation of SCN5A (n=3), CACNB2 (n=1), KCNE3 (n=1), and HCN4 (n=1).
마. Among 15 patients of idiopathic VT, 2 patients were identified to have a disease-associated gene mutation of SCN5A (n=2) and RYR2 (n=1).
자. Among 2 patients of early repolarization syndrome, 1 patients had gene abnormalites of AKAP9 in c.9113G>A(p.Arg3038His), which is unclear to associate with the disease.
2. Generation of induced pluripotent stem cells (iPSC) using reprogramming factors
· Using sendai virus, iPSCs were generated by reprogramming factors, OCT4, SOX2, cMYC, and KLF4 from the mononuclear cells of 3 patients of long QT syndrome, 01_P_CMC (LQTS2), 05_P_CMC (LQTS3), and 08_P_CMC (LQTS1).
3. Differentiation and purfication of iPSC-CM and chararterization
· Differentiation to iPSC-CM with Wnt pathway activator (CHIR99021) and Wnt signal inhibitor (Wnt-C59) and purification with CDM3-L media
· Characterization of iPSC-CM with patch clamp for measurement of action potentials
(출처 : Summary 5p)
목차 Contents
- 표지 ... 1
- 학술연구개발용역과제 최종결과보고서 ... 2
- 목차 ... 3
- 연구결과최종보고서 요약문 ... 4
- Summary ... 5
- 학술연구개발용역과제 연구결과 ... 6
- 제1장 최종 목표 ... 6
- 제2장 국내외 기술 현황 ... 9
- 제3장 최종 연구 내용 및 방법 ... 11
- 제4장 최종 연구 결과 ... 13
- 제5장 연구결과 고찰 및 결론 ... 23
- 제6장 연구성과 및 활용계획 ... 25
- 제7장 연구용역과제 진행과정에서 수집한 해외과학기술정보 ... 27
- 제8장 기타 중요변경사항 ... 27
- 제10장 참고문헌 ... 28
- 제11장 첨부서류 ... 28
- 끝페이지 ... 29
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