초록 ▼

본 연구의 목적은 HPV 백신의 면역원성 시험법 표준화 연구를 위해 HPV 백신의 면역원성을 평가할 수 있는 시험법을 개발하고, 표준항체 패널을 확립하여 이를 검증하고 표준화 하는 것이다.

면역원성 시험법은 각 항원에 특이적인 IgG 항체의 총역가를 측정할 수 있는 VLP ELISA 시험법과, pseudovirus를 이용한 중화항체가 시험법(PBNA)을 개발하였다.

VLP ELISA 시험법을 개발하기 위해 HPV 6, 11, 16, 18형의 L1 단백질을 배큘로바이러스 발현 시스템을 사용하여 발현하고 chr

본 연구의 목적은 HPV 백신의 면역원성 시험법 표준화 연구를 위해 HPV 백신의 면역원성을 평가할 수 있는 시험법을 개발하고, 표준항체 패널을 확립하여 이를 검증하고 표준화 하는 것이다.

면역원성 시험법은 각 항원에 특이적인 IgG 항체의 총역가를 측정할 수 있는 VLP ELISA 시험법과, pseudovirus를 이용한 중화항체가 시험법(PBNA)을 개발하였다.

VLP ELISA 시험법을 개발하기 위해 HPV 6, 11, 16, 18형의 L1 단백질을 배큘로바이러스 발현 시스템을 사용하여 발현하고 chromatography 기법으로 정제하고 VLP로 조립하였다. 발현/정제/조립한 L1 VLP는 특성분석을 통해 VLP를 이루고 있으며 품질에 이상이 없음을 확인하였다. VLP ELISA 시험법은 WHO의 HPV lab manual을 참고로 하여 개발하고 SOP를 작성하였다.
VLP ELISA 시험법의 validation을 수행하여 시험법이 유효함을 검증하였다.

PBNA 중화항체가 시험법 개발을 위해 미국 NIH에서 HPV pseudovirus(PsV)를 제조하는 방법과 을 기술이전 받아 6, 11, 16, 18형의 PsV를 제조하고 특성 분석하였다. PBNA 시험법은 WHO의 HPV lab manual을 참고하여 개발하고 SOP를 작성하였다. PBNA 시험법의 validation을 수행하여 시험법이 유효함을 검증하였다.

표준항체 패널 제조를 위해 임상시험을 통해 HPV 4가 백신(6, 11, 16, 18형)을 한번도 접종받지 않은 성인 여성 10명, 한번 접종받은 성인 여성 10명, 2회 이상 접종받은 성인 여성 10명의 혈청을 수집하였다. 수집한 혈청의 각 형별 IgG 총항체가와 중화항체가를 측정하고, 항체가 결과를 통계 분석하여 혈청을 총 9개 패널군으로 분류하고 pooling 하였다. Pooling 한 혈청을 용기에 분병하고 동결건조하여 9개 패널군, 총 1776병의 표준항체 패널을 제조하였다.

제조한 표준항체 패널과 개발한 면역원성 시험법을 공동연구기관에 제공하고 협업하여 표준항체 패널의 6, 11, 16, 18형 IgG 총항체가와 중화항체가를 결정하였고, 개발한 HPV 백신의 면역원성 시험법을 교차 검증하였다. 이를 통해 HPV 백신의 표준항체 패널을 확립하고, 면역원성 시험법을 표준화 하였다.

(출처 : 국문 요약문 6p)

Abstract ▼

In order to standardize the Immunogenicity tests for HPV vaccines, we developed and validated two test methods, VLP ELISA and PBNA, and established a standard antibody panel.

The antibody panel was prepared by collecting sera from 10 healthy adult women who had never been vaccinated with the

In order to standardize the Immunogenicity tests for HPV vaccines, we developed and validated two test methods, VLP ELISA and PBNA, and established a standard antibody panel.

The antibody panel was prepared by collecting sera from 10 healthy adult women who had never been vaccinated with the HPV vaccine, from 10 healthy adult women who had been vaccinated with the HPV 4-valent(type 6, 11, 16 and 18) vaccine one time, and from 10 healthy adult women who had been vaccinated with the HPV 4-valent(type 6, 11, 16 and 18) vaccine more than two times through a clinical trial. HPV 6, 11, 16 and 18 type-specific IgG titers and neutralization titers of each serum were measured in the VLP ELISA and PBNA, respectively. The sera were sorted and pooled into 9 groups and lyophilized. A total of 1776 vials of lyophilized antibody panel consisting of 9 groups were produced.

The VLP ELISA is an immunogenicity assay measuring total IgG antibody titers against HPV type 6, 11, 16 or 18 L1 VLP. We expressed the HPV type 6, 11, 16 and 18 L1 proteins using a baculovirus expression system and purified them by several chromatographic methods. Protein characterizations were performed to confirm that L1 proteins form VLP and that there is no abnormality in quality. The VLP ELISA was established using these L1 VLPs based on WHO HPV laboratory manual and validated.
The PBNA is pseudovirion-based neutralization assay measuring the neutralizing antibodies against HPV type 6, 11, 16 or 18.
Pseudoviruses(PsV) for HPV type 6, 11, 16 and 18 were made using the method licensed from the US NIH. The PBNA was established using these PsVs based on WHO HPV laboratory manual and validated.

The established immunogenicity assays were provided to a collaborative research institute to co-validate the assays. The total IgG titers and the neutralizing antibody titers of the standard antibody panel were determined by the co-validated immunogenicity assays and the antibody panel and the immunogenicity assays for HPV vaccines were standardized.

(출처 : Summary 9p)

목차 Contents

• 표지 ... 1
• 용역연구개발과제 최종보고서 ... 2
• 제출문 ... 3
• 목차 ... 4
• Ⅰ. 총괄연구개발과제 요약문 ... 6
• 국문 요약문 ... 6
• Summary ... 9
• Ⅱ. 총괄연구개발과제 연구결과 ... 12
• 제1장 총괄연구개발과제의 목적 및 필요성 ... 12
• 제2장 총괄연구개발과제의 내용 및 방법 ... 19
• 제3장 총괄연구개발과제의 최종결과 및 고찰 ... 27
• 제4장 총괄연구개발과제의 연구성과 ... 110
• 제5장 총괄주요연구 변경사항 ... 112
• 제6장 총괄참고문헌 ... 113
• 제7장 총괄첨부서류 ... 114
• 제(O)세부연구개발과제 연구결과 ... 115
• 제(○)세부 연구개발과제 요약문 ... 116
• 제2장 세부연구개발과제의 목적 ... 118
• 제3장 세부연구개발과제의 내용 및 방법 ... 118
• 제4장 세부연구개발과제의 결과 및 고찰 ... 118
• 제5장 세부참고문헌 ... 118
• 끝페이지 ... 119