초록 ▼

목적: 정제 백일해 백신의 면역원성 측정법은 제조사별로 백신 종균, 배양법, 약독화법, 면역원성 항원의 분리 및 정제법과 용량 등이 다르고, 국가별로 백일해 역학의 차이가 있어 전 세계적으로 표준화된 방법이 없어 제조사별, 국가별로 측정법을 자체적으로 개발하여 새로이 제조된 정제 백일해 백신의 면역원성 분석만 가능하나 이에 대한 시도는 국내에서 전무한 상태에 있다. 이런 상황에서 국내에서 개발되고 있는 3가 DTaP 백신과 Tdap 백신의 상용화를 위해 면역원성 평가방법을 개발하고, 실제 임상 검체를 통해 평가를 실행하고자 하였다.

목적: 정제 백일해 백신의 면역원성 측정법은 제조사별로 백신 종균, 배양법, 약독화법, 면역원성 항원의 분리 및 정제법과 용량 등이 다르고, 국가별로 백일해 역학의 차이가 있어 전 세계적으로 표준화된 방법이 없어 제조사별, 국가별로 측정법을 자체적으로 개발하여 새로이 제조된 정제 백일해 백신의 면역원성 분석만 가능하나 이에 대한 시도는 국내에서 전무한 상태에 있다. 이런 상황에서 국내에서 개발되고 있는 3가 DTaP 백신과 Tdap 백신의 상용화를 위해 면역원성 평가방법을 개발하고, 실제 임상 검체를 통해 평가를 실행하고자 하였다.

대상 및 방법: NIBSC로부터 PT, FHA 표준항원 구매, PRN은 국내 개발 정제 백일해 백신 항원을 공급받고 NIBSC로부터 이들 항원에 대한 복합 표준혈청을 구매하여 7 serial dilution ELISA를 실시하여 modified parallel line bioassay에 의한 reference standard의 ELISA unit(IU/ml)로 환산하여 분석. 양성으로 확진된 국내 백일해 환자 혈청으로 reference standard로 IU/ml을 측정하여 positive control로 사용하고, 국내 개발 A사 Tdap 백신 접종 전 200명의 피험자 혈청을 15일 연속 실험을 거쳐 측정된 평균값에 2배수 표준편차를 합산한 수치를 cut-off limit로 설정 후 백일해 확진 자 혈청에 적용하여 기존의 평가와 일치되는 결과로 확인 최종 결정하였고, 이 연구 결과를 사용하여 국내 A사 Tdap 백신과 국내사용 B사 Tdap 백신 접종자에 대한 면역원성 평가를 실시하고, 동시에 제조사 PT, FHA 항원으로도 평가를 실시하여 결과를 비교분석하였다. 또한 백일해 추정 환자 검체에 대한 검사를 실시하여 기존의 상용화된 ELISA kit 결과를 비교하였다.

결과: 최종적으로 NIBSC 항원을 사용한 면역원성 분석에서 PT 항원양은 10 U, FHA 항원양은 30 U, PRN 항원양은 0.5 yg으로 결정되었고 이에 따른 분석 결과로 PT cut-off value는 < 8.26U/ml ： negative,8.3 - 11,7U/ml：Equivocal, > 11,7U/ml：Positive, FHA cut-off value는 < 29.5U/ml： negative, 29.5 - 38.9U/ml: Equivocal, >38.9U/ml: Positive, PRN cut-off value는 < 4.1U/ml: negative, 4.1 - 5.6U/ml： Equivocal, > 5.6U/ml： Positive로 설정되었다. 이 연구 결과로 A사 Tdap 백신과 B사 Tdap 백신에 대한 면역원성을 분석하고 상용화 ELISA kit로 분석하여 비교한 결과 두 백신에서 FHA 결과에 차이가 있었으나 두 분석법에 의한 모든 결과는 통계적으로 유의한 차이가 없었다. 단, 제조사 항원으로 비교한 연구에서 제조사 항원에 의한 분석 결과가 다소 유리할 수 있음을 확인할 수 있었다. 그리고 백일해 추정 환자 임상 검체 분석에서 상용화된 ELISA kit에서 구분 할 수 없었던 PRN deficient pertussis case를 개별 항원 분석으로 확인할 수 있었다.

결 론: 상기 결과에 의해 본 연구에 의한 정제 백일해 분석법은 PT, FHA, PRN 항원에 대한 면역원성 분석에 유용한 평가방법으로 확인되어 향후 국내에서 개발될 정제 백일해 백신 면역원성 평가에 실제 적용이 가능할 것으로 사료된다. 또한 이런 분석법이 백일해 의심 환자 진단 및 PRN deficient pertussis case 선별검사에 유용하게 사용될 것으로 기대한다.

(출처 : 국문 요약문 6p)

Abstract ▼

Purpose: The seed bacteria for vaccines, culture method, attenuation, and purification methods for vaccine antigens, and dose differ among manufacturers, and the epidemiology of pertussis differs among countries. In this aspect, a global standardization to measure the immunogenicity of pertussis vac

Purpose: The seed bacteria for vaccines, culture method, attenuation, and purification methods for vaccine antigens, and dose differ among manufacturers, and the epidemiology of pertussis differs among countries. In this aspect, a global standardization to measure the immunogenicity of pertussis vaccines that enables each manufacturer and country to assess the humoral immunity of a newly developed pertussis vaccine, is lacking. In particular, the method has not been established in our country. Recently, 3 components acellular pertussis vaccines(DTaP, Tdap) have been developed in Korea. So, we aimed to develop a local standardized method to evaluate immunuogenicity of those vaccines, and conduct practical diagnostic evaluation of clinical specimens.

Subjects and methods: PT, FHA antigens (purchased from NIBC), PRN Ag. (donated from the company) were used as standard antigens. A combined standard serum for those Ags. was purchased from NIBSC. 7 serial dilution ELISA method was used as basic assay, and a modified parallel line reference assay was used for subsequent analyses. The sera obtained from confirmed pertussis cases were used as positive control. Sera of 200 subjects before immunization with the A company Tdap were used for 15 consecutive analyses. The cut-off value was established that mean value, obtained from above the sera, were added to 2 SD. After consistency and validation tests, we evaluated the immunogenicity of A company Tdap and B company Tdap vaccines via the above method. In parallel, comparative evaluation was performed using PT and FHA Ags. (donated from manufacturer). In addition, pertussis screening tests were performed using pertussis suspicious cases sera and copared with results obtained from using a commercial Kit.

Results: In the immunogenicity analysis using the NIBSC antigen, 10 U of PT antigen, 30 U of FHA antigen, and 0.5 ㎍ of PRN antigen were detected. The estimated PT cut-off values were as follows: < 8.26 U/ml, negative for PT; 8.3-11.7 U/ml, equivocal for PT; > 11.7 U/ml, positive for PT; < 29.5 U/ml, negative for FHA; 29.5-38.9 U/ml, equivocal for FHA; > 38.9 U/ml, positive for FHA; <4.1U/ml, negative for PRN; 4.1-5.6 U/ml, equivocal for PRN; > 5.6 U/ml, positive for PRN. These were used for analyses of the immunogenicity of the A company Tdap vaccine and B company Tdap vaccine and comparisons with analytical results obtained using a commercial ELISA kit. Although the two vaccines had different results for FHA, the difference between the two assays was not statistically significant. However, analytical results obtained using the manufacturer’s antigens, to some degree. In the analysis of clinical specimens from patients with suspected pertussis, a PRN-deficient pertussis case was identified in an individual antigen analysis, but it could not be detected using the commercial ELISA kit.

Conclusion： Taken together, the purified pertussis assay developed in this study was useful for analyses of immunogenicity against PT, FHA, and PRN antigens and is expected to be applicable to the evaluation of the immunogenicity of purified pertussis vaccines developed in Korea in the future. This assay is also expected to be useful for the diagnosis of pertussis and screening tests for PRN-deficient pertussis cases.

(출처 : Summary 8p)

목차 Contents

• 표지 ... 1
• 용역연구개발과제 최종보고서 ... 2
• 제출문 ... 3
• 목차 ... 4
• Ⅰ. 총괄연구개발과제 요약문 ... 6
• 국문 요약 ... 6
• Summary ... 8
• Ⅱ. 총괄연구개발과제 연구결과 ... 10
• 제1장 총괄연구개발과제의 목적 및 필요성 ... 10
• 제2장 총괄연구개발과제의 내용 및 방법 ... 17
• 제3장 총괄연구개발과제의 최종결과 및 고찰 ... 40
• 제4장 총괄연구개발과제의 연구성과 ... 119
• 제5장 총괄주요연구 변경사항 ... 121
• 제6장 총괄참고문헌 ... 122
• 제7장 총괄첨부서류 ... 124
• 끝페이지 ... 188