초록 ▼

□ 연구개요
혈우병 (Hemophilia)의 치료제인 혈액응고인자 VIII는 반감기가 고작 8~12 시간으로 매우 짧기 때문에 빈번히 투여함으로 불편할 뿐 아니라 고가의 치료비용이 소요된다. VIII 인자의 반감기를 단축시키는 원인중 하나는 저밀도 지방단백질 수용체 관련 단백질 (low-density lipoprotein receptor-related protein, LRP)에 의한 VIII 인자의 제거이다. 따라서 본 연구는 VIII와 LRP의 상호작용을 생화학적, 구조생물학적으로 연구함으로써 반감기가 연장된 VIII 인자

□ 연구개요
혈우병 (Hemophilia)의 치료제인 혈액응고인자 VIII는 반감기가 고작 8~12 시간으로 매우 짧기 때문에 빈번히 투여함으로 불편할 뿐 아니라 고가의 치료비용이 소요된다. VIII 인자의 반감기를 단축시키는 원인중 하나는 저밀도 지방단백질 수용체 관련 단백질 (low-density lipoprotein receptor-related protein, LRP)에 의한 VIII 인자의 제거이다. 따라서 본 연구는 VIII와 LRP의 상호작용을 생화학적, 구조생물학적으로 연구함으로써 반감기가 연장된 VIII 인자 또는 small molecule drug 개발에 기초자료를 제공하고자 한다.

□ 연구 목표대비 연구결과
최종목표: A형 혈우병의 치료제인 혈액응고인자 VIII와 low-density lipoprotein receptor-related protein (LRP)의 분리된 도메인과의 복합체 삼차구조를 규명함으로써 FVIII과 LRP의 상호작용을 분자수준에서 이해한다.
1. LRP cluster II와 IV, 이들의 구성요소인 CR double domains 클로닝, 발현, 정제
- cluster II, IV와 14종의 CR double domains의 발현 벡터 구축, 가용성 발현 및 정제
2. FVIII의 A2, A3 domain의 클로닝, 발현, 정제
- FVIII와 CR double domains의 복합체 구조 결정을 위해 A2, A3 domain의 클로닝, 발현, 정제를 실시하였으나 가용성 발현 달성하지 못하였음
3. 재조합 CRs과 FVIII의 상호작용 분석
- Surface Plasmon Resonance를 이용하여 FVIII과 14종의 CR double domains 및 cluster II, IV의 결합 친화력 결과확보 (이중 CR3-5, CR 21-23이 높은 친화도를 보임)
4. CRs과 FVIII의 복합체 구조결정
- CR double domains중 CR 3-4, CR21-22에 대한 결정화 및 CR double domains과 FVIII 복합체 결정화 진행 중에 있음
5. 단백질간 결합 부위 mapping
- 결정구조 확보 후 실시 예정

□ 연구개발결과의 중요성
본 연구 개시전 FVIII과 결합하는 복합체 구조 연구는 전무하였으나 최근들어 본격적으로 FVIII와 결합하는 단백질 복합체에 관한 구조, 예를들어 integrin과의 복합체(PDB ID : 4PT6), antibody와 복합체(PDB ID : 4XZ6)에 대한 연구가 활발하게 진행되고 있다. SPR 분석을 통해 LRP cluster II, IV의 complement repeat domain 3-5와 21-23이 FVIII과 가장 친화도가 높은 것으로 밝혀졌다. 이들 도메인과 결합된 FVIII 복합체 구조 결정화 작업을 수행 중에 있으며 복합체 구조 규명시 체내 FVIII의 반감기를 증가시킨 혈우병 치료제 개발에 매우 중요한 기초자료를 제공해 줄 수 있을 것으로 생각합니다.

(출처 : 연구결과 요약문 3p)

목차 Contents

• 표지 ... 1
• 연구결과 요약문 ... 3
• 목차 ... 4
• 1. 연구개발과제의 개요 ... 5
• 2. 연구수행내용 및 연구결과 ... 6
• 2.1. LRP cluster II와 IV, 이들의 구성요소인 CR domains 및 RAP (receptor-associated protein) 클로닝, 발현, 정제 ... 6
• 2.2. FVIII 인자의 A2, A3 domain의 클로닝, 발현 및 정제 ... 10
• 2.3. LRP cluster II와 IV, double CR domains과 full-length FVIII 인자의 상호작용 분석 ... 11
• 2.4. CRs과 VIII 인자의 복합체 구조결정 ... 13
• 2.5. 단백질간 결합 부위 mapping ... 14
• 3. 연구개발결과의 중요성 ... 14
• 4. 참고문헌 ... 15
• 5. 연구성과 ... 15
• 대표적 연구실적 ... 15
• 끝페이지 ... 18