초록 ▼

연구개요
본 연구의 목표는 두피 지루피부염, 아토피 피부염과 같은 피부 질환의 대표적 악화 인자인 Malassezia 피부 진균이 실제 환자의 피부 병변 부위에서 어떠한 유전자들을 발현하는 가를 차세대 염기서열 분석 방법을 이용한 진균의 메타전사체(Metatranscriptome) 분석을 통해 이해하는 것이었으며, 변병 부위에서 Malassezia 진균이 실제 발현하고 있는 유전자를 발굴하고 이를 이용하여 치료제 표적을 제시하는 것이었음. 이를 위해 1차년도는 두피 지루피부염 환자의 두피에서 시료 채취 및 메타전사체 증폭, 시

연구개요
본 연구의 목표는 두피 지루피부염, 아토피 피부염과 같은 피부 질환의 대표적 악화 인자인 Malassezia 피부 진균이 실제 환자의 피부 병변 부위에서 어떠한 유전자들을 발현하는 가를 차세대 염기서열 분석 방법을 이용한 진균의 메타전사체(Metatranscriptome) 분석을 통해 이해하는 것이었으며, 변병 부위에서 Malassezia 진균이 실제 발현하고 있는 유전자를 발굴하고 이를 이용하여 치료제 표적을 제시하는 것이었음. 이를 위해 1차년도는 두피 지루피부염 환자의 두피에서 시료 채취 및 메타전사체 증폭, 시료 채취 및 메타전사체 증폭에 대한 실험 방법정립, 2차년도는 두피 지루피부염 환자의 병변 부위에 대한 Malassezia 메타전사체 상호 비교, 두피 지루피부염 환자의 두피와 건강한 대조군 두피에서의 Malassezia에 대한 정량적 분석을 진행하였음. 3차년도는 메타전사체 분석을 위한 수율저하등의 문제를 보완하기 위하여 Malassezia 진균이 실제 병변 부위에서 대량 발현할 것으로 예측되는 분비 단백질 (Secreted protein)인 Lipase 등의 발현 정도를 기 확보된 시료를 대상으로 하여 분석을 진행하였음.

연구 목표대비 연구결과
[1차년도]
▷ 두피 지루피부염 환자의 두피에서 시료 채취 및 메타전사체 증폭: 시료 채취 및 메타전사체 증폭에 대한 실험 방법 정립
▷ 아토피 피부염 환자의 병변 부위에서 시료 채취 및 메타전사체 증폭: 시료 채취 및 메타전사체 증폭에 대한 실험 방법 정립
[2차년도]
▷ 두피 지루피부염 환자의 병변 부위에 대한 Malassezia 메타전사체 상호 비교: 두피 지루피부염 환자의 병변 부위에 대한 Malassezia 메타전사체 상호 비교를 위하여 정상인군 샘플과 환자군 샘플의 두피에서 추출한 total RNA에 대하여 mRNA poly-A tail 및 oligo-dT를 이용한 mRNA amplification 수행 후, Next-Generation Sequencing을 수행하였으나, Whole mRNA amplification을 통한 Malassezia 진균의 메타전사체 분석 방법은 Host 및 세균의 RNA 분만 아니라 rRNA로 인해서 효율이 지나치게 낮은 것으로 판단되었음.
▷ 두피 지루피부염 환자의 두피와 건강한 대조군 두피에서의 M. restricta에 대한 정량적 분석: 두피 지루피부염 환자를 대상으로한 연구는 두피와 건강한 대조군 두피에서의 M.restricta에 대한 정량적 분석법을 수립하여 효과적으로 연구를 수행하였음.
[3차년도]
▷ 두피 지루피부염 환자의 병변 부위에 대한 Malssezia restricta 마커 발굴: 두피 지루 피부염 환자의 병변부에서 추출한 RNA를 이용하여 M. restricta lipase 의 발현을 분석한 결과 Lipase MrLIP5에 대한 중요성을 인지할 수 있었고, MrLip5의 특성을 분석하기 위해 단백질을 정제한 후, 다양한 환경에서의 발현정도 및 효소특성을 분석하여, 진균의 병원성에 있어서 MrLip5의 중요성, 향후 검출법 및 항진균제의 신규 표적으로서의 가능성을 제시하였음.

연구개발결과의 중요성
최근 들어 병원성 진균 감염의 피해는 기하급수적으로 증가해왔고 그 중, Malassezia 균주로 인한 지루피부염 환자들의 숫자도 지속적으로 증가하고 있는 추세임. 본 연구는 피부에서 분리된 진균에 대한 메타전사체 분석의 국내 최초 시도이며, 본 연구의 1차 년도에 얻어진 연구결과 및 본 연구에서 정립된 Whole mRNA Amplification 방법은 추후 관련 분야 연구자들에게 큰 도움이 될 만한 Reference로서의 역할을 할 것으로 기대됨. 도한 본 연구에서 수행된 두피 변병부위의 Malassezia 군집의 정량 분석 및 두피에서 가장 많이 발현하는 Lipase인 MrLip5의 특성 등에 대한 연구 결과는 Malassezia를 포함한 피부 진균의 병원성 관련된 기전의 이해에 큰 도움을 줄 것이며, 향후 Malassezia 관련 연구 분야 및 지루피부염, 아토피 피부염의 증상 개선을 위한 새로운 항진균제 표적 개발에도 큰 기여를 할 것으로 예상됨.

(출처 : 요약문 3p)

목차 Contents

• 표지 ... 1
• 연구결과 요약문 ... 3
• 목차 ... 4
• 1. 연구개발과제의 개요 ... 5
• 2. 연구수행내용 및 연구결과 ... 5
• 가. 1차 년도 연구내용 및 결과 ... 5
• 나. 2차 년도 연구내용 및 결과 ... 9
• 다. 3차 년도 연구내용 및 결과 ... 12
• 3. 연구개발결과의 중요성 ... 15
• 4. 참고문헌 ... 15
• 5. 연구성과 ... 18
• 끝페이지 ... 18