초록 ▼

□ 연구개요
간흡충의 담즙독성 회피 조절기전을 규명하고, 담도 내 생존을 위해 필요한 핵심 담즙산 수송체를 치료제 표적단백질로 동정한다. 간흡충의 담즙산 배출수송체의 cDNA를 확보하고, 발육단계별 발현양상을 분석한다. 담즙산 배출수송체의 재조합단백질을 생산하고, 면역혈청을 제작하여 충체 조직내 분포를 분석한다. 담즙산 배출수송체의 담즙독성 회피기전으로써 배출기능을 관찰하고, 적합한 억제제를 스크리닝한다. 간흡충 담즙산 배출수송체의 발현을 RNAi 기법으로 억제시키거나 선택된 억제제로 제어하여, 운동성과 생존율의 변화를 검정한

□ 연구개요
간흡충의 담즙독성 회피 조절기전을 규명하고, 담도 내 생존을 위해 필요한 핵심 담즙산 수송체를 치료제 표적단백질로 동정한다. 간흡충의 담즙산 배출수송체의 cDNA를 확보하고, 발육단계별 발현양상을 분석한다. 담즙산 배출수송체의 재조합단백질을 생산하고, 면역혈청을 제작하여 충체 조직내 분포를 분석한다. 담즙산 배출수송체의 담즙독성 회피기전으로써 배출기능을 관찰하고, 적합한 억제제를 스크리닝한다. 간흡충 담즙산 배출수송체의 발현을 RNAi 기법으로 억제시키거나 선택된 억제제로 제어하여, 운동성과 생존율의 변화를 검정한다. 간흡충의 생리-대사에 가장 크게 영향을 주는 담즙산 배출수송체에 대해 치료제 표적단백질로 결정하고, 신약재창출기법으로 억제제를 선정 및 억제효능을 분석한다. 본 결과들을 종합하여, 간흡충의 담즙독성 회피 조절기전을 분자생물학 및 생리생화학적 수준에서 규명하고, 표적단백질기반 치료제 후보물질을 발굴한다.

□ 연구 목표대비 연구결과
본 연구에서는 간흡충이 담즙 내 환경에서 생존하기 필수적인 담즙산 수송체인, multidrug resistance-associated protein 1 (MRP1) subtype 1 및 2, MRP3, organic anion-transporting polypeptides (OATP) 등 총 4종의 분자생물학, 구조생물학, 분자동역학적 특성을 분석하고 그 조절기전을 분자수준에서 규명하고자 하였다. 우선 신규 유전자들을 발굴하고자 Taxonomic Extractor for BLAST Output(TEBO)라는 프로그램을 자체개발하여 간흡충 수송체 전체를 효율적으로 탐색하였다. 선택된 MRP1, MRP3 및 OATP 서열분석을 통해 항원부위를 탐색하고 재조합단백질을 생산하였다. 대표적인 담즙산 수송체인 MRP3는 성충보다 피낭유충에서 유전자 수준에서 과발현되었다. 다만 사전연구에서 bile salt export pump (BSEP)로 예측되었던 서열들은 모두 약제내성과 관려된 p-glycoprotein (p-gp)임이 밝혀졌다. 단백질 구조분석을 통해서 모든 수송체가 기능수행을 위해 필요한 필수잔기를 갖고 있는 것이 확인되었다. Poly(acrylic acid)-tetraDOCA conjugate (PATD)는 taurocholate와 경쟁적으로 수송체 결합하기 때문에 대표적인 담즙산 억제제로 알려져 있는데, 간흡충 성충에 투여했을 때 간흡충의 운동성과 생존율이 현저하게 감소하였다. 또한 화합물의 결합능을 분석하여 약물후보물질을 확보하였다. 전형적인 담즙산 배출 수송체인 CsMRP3은 분자동역학 모사분석에서 담즙산 및 pH에 따라 다른 기전을 보였다. 이상의 결과를 종합하면, 간흡충은 담도 내에서 생존하기 위해 담즙산 수송체를 효과적으로 사용하며, 간흡충 담즙산 수송체는 척추동물과는 분류군이 상이하고, 각 수송체는 특이적인 구조 및 발현 양상을 통해 간흡충의 담즙내 생존에 최적화된 기능을 수행할 것으로 사료된다.

□ 연구개발결과의 중요성
· 간흡충의 담즙산 수송체를 통한 담즙독성 회피 조절기전을 규명하여 간흡충의 생존전략에 대한 단서를 제공할 것이다.
· 담즙산 수송체는 상호보완적으로 기능할 것이므로 수송체를 한 개 또는 복합적으로 제어한다면 충체 내 담즙이 축적되어 담즙독성을 유발하고, 이로 인해 구충효과를 기대할 수 있다.
· 그 동안 흡충류의 praziquantel에 대한 내성이 보고되었지만, 약제내성기전 연구는 MRP1 또는 P-glycoprotein에 국한되었다. 본 연구의 간흡충의 전체 수송체 분류군 동정을 통해 약제내성관련 수송체 발굴에 기여할 수 있다.

(출처 : 연구결과 요약문 2p)

목차 Contents

• 표지 ... 1
• 연구결과 요약문 ... 2
• 목차 ... 3
• 1. 연구개발과제의 개요 ... 4
• 1-1. 최종 목표 ... 4
• 1-2. 연구범위(내용) ... 4
• 1-3. 연구의 필요성 ... 4
• 1-4. 연구의 중요성 ... 5
• 2. 연구수행내용 및 연구결과 ... 5
• 2-1. 연구수행내용 ... 5
• 2-2. 연구수행 결과의 적절성 ... 13
• 3. 연구개발결과의 중요성 ... 14
• 4. 참고문헌 ... 14
• 5. 연구성과 ... 16
• 대표적 연구실적 ... 16
• 끝페이지 ... 16