보고서 정보
주관연구기관 |
농림축산검역본부 Animal and Plant Quarantine Agency |
연구책임자 |
표현미
|
참여연구자 |
변재원
,
박미영
,
구복경
,
김희연
,
최강석
|
보고서유형 | 최종보고서 |
발행국가 | 대한민국 |
언어 |
한국어
|
발행년월 | 2019-12 |
과제시작연도 |
2019 |
주관부처 |
농림축산식품부 Ministry of Agriculture, Food and Rural Affairs(MAFRA) |
등록번호 |
TRKO202000030770 |
과제고유번호 |
1545019634 |
사업명 |
농림축산검역검사기술개발(R&D) |
DB 구축일자 |
2020-11-21
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키워드 |
구제역.혈청은행.표준항혈청.야외혈청.FMD.Serum bank.Reference serum.
|
초록
▼
5. 최종 연구결과 요약
O 세부과제명: 구제역 표준항혈청 생산
1. 국제표준항혈청 확보
- 국제표준연구소 (Pirbright Institute, 영국)에서 생산된 O, A, Asial 혈정형에 대한 표준항혈청 및 대조혈청 72점 (O1 Manisa, O SKR/2000, A22 Iraq, A IRN, Asial Shamir, C Noville 표준혈정 등) 및 항원 3종(O1 Manisa, A22 Iraq, Asial Shamir) 도입 완료
2. 신규도입 O형 백신 접종 돼지 항혈청 생산
신규도
5. 최종 연구결과 요약
O 세부과제명: 구제역 표준항혈청 생산
1. 국제표준항혈청 확보
- 국제표준연구소 (Pirbright Institute, 영국)에서 생산된 O, A, Asial 혈정형에 대한 표준항혈청 및 대조혈청 72점 (O1 Manisa, O SKR/2000, A22 Iraq, A IRN, Asial Shamir, C Noville 표준혈정 등) 및 항원 3종(O1 Manisa, A22 Iraq, Asial Shamir) 도입 완료
2. 신규도입 O형 백신 접종 돼지 항혈청 생산
신규도입 O형 백신주 2종 (O Primorskiy, O Campos)의 돼지 항혈청 생산. 야외시험농장에서 8주령과 12주령에 2회 백신을 접종 혈액 시료 14점 및 SPF 돼지 항혈청 9점 생산
3. 재조합 NSP항원을 접종한 NSP 항체 양성 돼지 혈청 생산
재조합 NSP 항원을 이용하여, 구제역바이러스 인공감염 없이 NSP 항체 양성 돼지 혈청 검체 생산. 국내에서 구제역 검사에 사용되는 2종의 NSP 진단키트를 이용하여 생산된 혈청에 대한 검사 후, 진단키트 검정 및 정도관리 (Proficiency test) 검체 등으로 활용
4. 구제역 바이러스 감염 일자별 돼지 혈청 생산
2002년 분리주인 O형 안성주 바이러스 접촉감염 후 일자별 혈청 2dpc부터 30dpc 사이의 혈청 35점(개체 당 혈청량 400㎖ 이상) 수집. 확보된 혈청은 바이러스 비동화를 거쳐 NSP 항체진단키트 검정 등에 활용
5. 구제역 항체 음성 혈청 481점 수집
- (돼지) 북미지역 수입 혈청 (40ml) 61점
- (염소) 국내 혈청 수집 (~30ml) 50점
- (소) 종축창 소 혈청 (~10ml) 370점
6. 돼지 야외 혈청 수집
7. 구제역 감염 염소혈청 생산
- 2017년 보은군 소에서 분리된 O/SKR/1/2017 바이러스를 공격 접종한 감염 14일차 염소(n=6) 혈청 확보. 일자별 수집 혈청을 이용한 ELISA 분석결과 O형 SP 항체는 감염 후 4일차부터 양성 전환, NSP 항체는 감염 후 7일부터 일부 개체에서 양성 전환됨. 감염 후 14일차 혈액 (개체 당 240~400ml)은 혈청은행에 등록
8. 구제역 감염 또는 백신접종 소·돼지 혈청 114점 확보
- 2017년 발생주 (O형 보은주, A형 연천주) 공격 접종한 감염 혈청 각 16점, O형 단가 (O1 Campos, O Primorskiy, O1 Manisa) 1회 접종 후 6주차 혈청 각 3점, 구제역백신연구센터 협조로 백신 효능 평가 시험 시료 73점 (소 7점, 돼지 66점) 수집.
9. NSP 항체 양성 혈청 수집
- NSP 항체 양성 농가 도축장 출하 시 혈청 30점 수집 (소 20두, 돼지 10두)
10. 신규 도입 돼지 2가 백신 (O+A형) 접종 돼지 항혈청 생산 (진행 중)
- 2018년 10월 이후 돼지에서 O+A형 2가 백신 사용에 따라 Merial (O Manisa, O 3039, A22 Iraq), ARRIAH (O Primorsky, A Zabaikalsky), Biogenesis BAGO S.A. (O1 Campos, A24 Cruzeiro, A2001 Argentina) 3사의 백신에 대한 돼지 항혈청 생산을 위해 야외 농장의 자돈 20두를 3그룹으로 나누어 부표에 따라 8주, 12주에 백신을 접종하고, 2주 후 혈청 수집 (12월 중순 완료 예정) 및 특성 분석 (2020년 3월 완료 예정)
O 세부과제명: 표준항혈청 특성분석
1. 돼지 항혈청 역가측정
- 신규도입 O형 백신주 O Campos 백신 접종 혈청 7점을 WRLFMD의 바이러스 중화시험 기준 강양성 혈청 2점 (〉181), 약양성 혈청 4점 (45-181), Cut-off/Borderline 혈청 1점 (11-32)으로 분류하고 중화시험 대조표준혈청으로 활용 검토
- 수집된 혈청 시료 중 선발한 시료를 이용하여, SP 항체 검사 ELISA 3종에서 SP O 항체 역가를 측정함. 각 키트에 적합한 국제표준항혈청과 비교 후 Working standards (국가표준혈청)로 활용 검토
- 2017~2018년 수집된 일부 혈청 시료에 대한 중화항체시험을 실시하고 중화항체역가에 따라 구간 별 시료패널 구성. “구제역 백신 항체 예찰용 ELISA 진단법 개발’ 사업의 진단액 효능 평가에 활용
2. 감염 일자별 돼지 혈청에 대한 NSP 항체진단액 4종 검사
- O형 안성주 접촉 감염 시료 35점에 대한 3종의 NSP ELISA 및 간이진단키트 검사 완료. 4종의 NSP 항체 검사에서 모두 양성인 시료가 8점, 모두 음성인 시료가 12점이었고, 사용된 키트에 따라 결과가 불일치하는 시료가 15점이었음. 2종 이상의 ELISA에서 양성인 10 dpc 이후 시료 16개에 대해 EITB 시험법 적용 결과 1개 혈청을 제외한 15개 모두 양성으로 각 시료에 대한 NSP 항체 특성 분석 완료
3. 재조합 NSP항원 접종 돼지 혈청 등을 이용한 역가 측정 및 EITB 적용 시험
- 2017년 재조합 NSP 단백질을 접종하여 유도한 NSP양성 혈청 시료를 이용하여 NSP 항체 검사 ELISA 2종에서 NSP 항체 역가를 측정함. 진단키트의 민감도 차이에 따라 양·음성 판정 기준값 (cutoff)을 기준으로 항체역가의 차이를 보임.
- 돼지 혈청 검사에 EITB 검사법 적용 가능성 검토를 위해 NSP 양·음성 혈청 5점을 사용하여 EITB 실시한 결과 음성 혈청은 음성으로 판정하였으나, 재조합 3ABC 접종 혈청을 제외한 감염시료는 음성으로 판정됨. 우리과에서 수행 중인 “구제역 비구조단백질검출용 간이진단키트 개발 (산업체공동)” 과제에 수집된 NSP 항체 양·음성 돼지 혈청 시료 제공
4. 음성 혈청에 대한 SP·NSP 항체 검사
- 북미지역 돼지 혈청 시료 61점에 대한 SP·NSP 항체 ELISA 검사 결과 모두 음성이었으며, 지역별 차이 없이 유사한 수준의 검사 결과를 보임
- 소 및 염소 음성 혈청 420 점에 대한 NSP 항체 ELISA 검사 완료
5. 진단액 간의 상관성 분석
- 2017년도 생산된 신규도입 O형 Campos 또는 Primorskiy 백신을 접종 야외 돼지 혈청 (백신 접종 전, 1차 접종 후 4주, 2차 접종 후 4주 혈청)을 이용하여 Prionics SP O ELISA 와 백신주와 동종항원을 사용한 2종의 ELISA (CEVAN O LPBE 또는 ARRIAH O LPBE)간의 상관성 분석을 실시한 결과 각각 상관계수 0.96 및 0.86로 비교적 높은 상관성이 있음을 확인함
O 세부과제명: 구제역 표준항혈청 관리매뉴얼(S0P) 작성
1. 구제역 혈청은행 관리매뉴얼 작성
- 구제역 혈청은행 운영을 위한 혈청의 수집, 기탁, 보존, 관리, 분양, 이용 등에 관한 사항을 규정하는 구제역 혈청은행 운영 지침(안)작성 완료. 구제역 혈청은행 운영지침에는 구제역 혈청은행의 운영을 위한 업무분장, 혈청은행 기탁 혈청의 수집 경로 및 수집 방법, 기탁된 혈청의 실물 및 목록 작성 및 관리 방법, 혈청은행에 기탁된 혈청의 이용 목적, 분양 방법, 혈청은행 기탁 시료의 특성분석에 사용 가능한 시험법 및 진단액 현황, 표준혈청 선발 기준 및 선발 방법, 구제역 항혈청 패널 구성 방법 및 활용에 대한 내용을 규정함. 수집된 혈청의 “생물안전과 보안 관련 위험 관리”에 관한 내용 보완 예정
2. 항혈청 패널 구성
- 구제역 항체양전이 혈청, 구제역 항체 음성 혈청 등 혈청 시료의 특성별로 그룹으로 관리
- NSP 항체 진단액 평가용 혈청 패널 2종 (양·음성 혈청 패널, 계단희석 혈청 패널) 및 구제역 항체 검사 기관의 정도관리 시험용 혈청 패널 1종 (소, 돼지 양·음성 혈청 패널)을 구성하여 활용 중
(출처 : 요약 1p)
Abstract
▼
Foot-and-mouth disease outbreak occurred in 2010-2011 devastated the directly and indirectly involved farming industries in the nation. Along with massive culling and strict movement restriction, Korean government introduced vaccination policy to contain the disease. Following the national FMD vacci
Foot-and-mouth disease outbreak occurred in 2010-2011 devastated the directly and indirectly involved farming industries in the nation. Along with massive culling and strict movement restriction, Korean government introduced vaccination policy to contain the disease. Following the national FMD vaccination program, Animal and Plant Quarantine Agency (APQA) had been performed robust research in the development of FMD vaccine and diagnostic tests and intensive serological surveillance.
Due to the traits of FMD, any related research and diagnosis are performed in strictly restricted laboratories. Consequently, it limits the source of biological reference materials, serological samples in particular, although these biological are indispensable to FMD research and product validation.
As a FMD reference laboratory, we recognized the importance of serological diagnosis in FMD control as well as the application of validated serological assay and well-defined serological panels, originated in various species for the validation. However, FMD infected field serological samples are scarce, especially the ones from swine that we have developed panel of swine sera for the purpose of validation of NSP ELISAs. we took the initiative to produce, collect, manage and distribute the serological samples. This project encompasses three aims: 1) to collect anti-serum mainly from pigs and cattle, 2) to define the characteristics of the collection, 3) to write a SOP and the list of collection.
(출처 : Abstract 28p)
목차 Contents
- 표지 ... 1
- I. 연구배경 및 목표 ... 4
- 1. 연구배경 ... 4
- 2. 연구최종목표 ... 5
- 3. 연차별 연구개발 목표 및 내용 ... 5
- II. 연구방법 및 수행전략 ... 6
- 1. 재 료 ... 6
- 2. 연구전략 및 방법 ... 6
- III. 연구결과 ... 7
- 1. 제1세부과제명: 구제역 표준항혈청 생산 ... 7
- 2. 제2세부과제명: 구제역 항혈청 특성분석 (2018, 2년차) ... 18
- 3. 제3세부과제명: 구제역 표준항혈청 관리 매뉴얼 작성 (2019, 3년차) ... 23
- IV. 연구결과요약 ... 24
- V. 참고자료 ... 27
- VI. 영문초록 ... 28
- 끝페이지 ... 28
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