초록 ▼

4. 당해년도 중간결과 요약
1. 한국형 O, A, Asia1형 백신주의 방어단백질 조합 형성 및 바이러스 제작
1) 바이러스의 제작
- ME-SA 지역형에 속하는 O manisa의 VP4, 2, 3를 이용하고, VP1은 요즘 유행되는 SEA 지역형 (O/Andong/SKR/2010)의 VP1을 이용하여 바이러스 제작 및 확인
- Asia1/MOG/2005 바이러스의 VP4, 2, 3를 이용하고, Shamir 주의 VP1을 이용하여 바이러스 제작 및 확인
- O형 Manisa를 이용하여 2010년 국내분리

4. 당해년도 중간결과 요약
1. 한국형 O, A, Asia1형 백신주의 방어단백질 조합 형성 및 바이러스 제작
1) 바이러스의 제작
- ME-SA 지역형에 속하는 O manisa의 VP4, 2, 3를 이용하고, VP1은 요즘 유행되는 SEA 지역형 (O/Andong/SKR/2010)의 VP1을 이용하여 바이러스 제작 및 확인
- Asia1/MOG/2005 바이러스의 VP4, 2, 3를 이용하고, Shamir 주의 VP1을 이용하여 바이러스 제작 및 확인
- O형 Manisa를 이용하여 2010년 국내분리주 A pocheon의 VP4, 2, 3를 이용하고, 보완대책으로 A22의 VP1을 사용 바이러스 제작 및 확인
- 한국형 O형, Asia 1형, A형 백신 바이러스를 선정하고 VP1 N17D, VP2 H145Y를 각각 mutation시켜 환경 저항성 재조합 바이러스 클론 4종을 확보
- 각종 면역향상에 기여할 저항성바이러스 확보완료
- 정제가 가능한 6x His가 삽입된 Asia1 혈청형 바이러스 확보
2) 백신 후보바이러스의 감염혈청의 교차혈청 중화시험
- 백신 후보 바이러스를 돼지에 감염 후 10일째 혈액을 채취하여 중화시험을 실시하였으며, O형에서는 ME-SA 및 SEA지역형과 모두 관련성(r=0.948)이 높게 형성이 되었으며,
- A형의 경우 A/SKR/pocheon/2010바이러스와 백신주인 A22와의 비교적 낮은 0.292,
- Asia1의 경우 Shamir바이러스는 Asia1/MOG/2005 바이러스 보다 더 높은 항체를 형성하였다. Asia1 바이러스간에 항체의 관련성은 0.358로 확인되었음.

2. 한국형 환경 안정성 백신 종독주의 평가
- 제작된 재조합 바이러스의 온도 저항성을 확인하기 위해 42도 2시간 처리한 것은 original virus 보다 Asia1 형과 A형 에서 온도 저항성을 보였고, O형은 저항성을 보이지 않았음.
- 제작된 재조합 바이러스의 산 저항성을 확인하기 위해 PBS (50mM NaH2PO4, 140 mM NaCl) pH 6.0과 pH 7.4 300ul에 10⁶ TCID50/0.1ml 바이러스를 감염시켜 30분간 처리한 후 역가 조사 결과 3가지재조합 바이러스 중에서 Asia1 형과 A형이 original virus 와 비교하여 산성에 저항성을 보였고 나머지 O형은 산성에 저항성을 보이지 않았음.

3. 새로운 오일아쥬반트 후보물질의 마우스에서 안전성 평가와 방어
- 후보 아쥬반트로 평가되어 왔던 Emulsigen-D, Emulsigen-D + Alum, ISA 201의 마우스에서의 안전성을 평가결과 체중이 심각하게 저하되어 문제가 되는 경우는 없었음.
- 오일과 gel을 함께 사용한 백신접종군에서 원래 체중의 감소가 보였으나, 백신접종 후 7일후 시간이 지남에 따라 회복됨.
- 1회 접종시와 2회접종군으로 분류하여 면역성을 실험한 결과 1회 접종군에서는 신규 아쥬반트인 ISA201과 Emulsigen-D에서의 효과는 유사하였으며, 겔을 혼합하였을 경우 같거나 면역형성에 도움이 되지 않았음.
- Emulsigen-D 가 포함된 시험백신 (O/Andong/SKR/2010)이 강력한 Th1 (IL-2, IL-12, GM-CSF, IFN-g,TNF-a) 및 Th2 (IL-4, IL-5, IL-10) cytokines 의 자극을 확인할 수 있었고, ISA 201 및 ISA 206의 경우 IL-2의 Th1 반응성만 일부 인정되었음.
- 접종후 1주, 4주에 공격접종하여 각 아쥬반트별 면역실험 결과 Alum을 섞은 군에서 방어률이 향상됨을 확인함.

4. 백신평가를 위한 구제역바이러스 공격용 실험동물 제작 및 평가
- 구제역바이러스의 세포 수용체인 소의 integrin 유전자 (alpha v-beta 6)를 클로닝.
- alpha v-beta 6 인테그린 유전자를 가지고 있는 TG마우스를 확보하여 2세대를 확보 진행 중이며, 유전자의 유지 여부 및 진천주에 대한 구제역 감수성 확인
- Asia1 shamir에 대한 백신을 접종한후 그 백신의 방어한계량을 측정

5. 작성된 3가 시제백신를 제작하여 마우스 및 돼지에서 면역 및 공격 시험
- 마우스에서 단가 및 3가 백신을 접종한 후 공격 시험 진행중
- 면역, 공격후 체중감소, 생존률 조사 진행중
- 돼지에서의 공격접종시험을 위한 면역항원 증폭 진행중

(출처 : 4. 당해년도 중간결과 요약 1p)

목차 Contents

• 표지 ... 1
• Ⅰ. 연구배경 및 목표 ... 3
• 1. 연구배경 ... 3
• 2. 현황 및 문제점 ... 3
• 2. 연구개발의 최종목표 ... 4
• 3. 연차별 연구개발 목표와 내용 ... 4
• Ⅱ. 연구방법 및 수행전략 ... 5
• 1. 재 료 ... 5
• 2. 연구전략 및 방법 ... 5
• Ⅲ. 연구결과 ... 6
• 1. 한국형 O, A, Asia1형 백신바이러스의 선정과 백신바이러스 클론제작 ... 6
• 2. 백신 후보바이러스의 감염혈청중 교차중화시험 ... 7
• 3. 제작된 3종의 시제백신의 마우스 면역원성 및 공격시험 ... 8
• 3. 한국형 환경 안정성 백신종독주 제작을 위한 클론작성 및 바이러스 제작 ... 9
• 4. 한국형 환경 안정성 백신 종독주의 평가 ... 11
• 5. 새로운 오일 adjuvant 들의 마우스에서 면역성과 안전성 평가 ... 12
• 6. 백신평가를 위한 구제역바이러스 공격용 실험동물 제작 및 평가 ... 14
• Ⅳ. 연구결과요약 ... 15
• 1. 한국형 O, A, Asia1형 백신주의 방어단백질 조합 형성 및 바이러스 제작 ... 15
• 2. 한국형 환경 안정성 백신 종독주의 평가 ... 15
• 3. 새로운 오일아쥬반트 후보물질의 마우스에서 안전성 평가와 방어 ... 15
• 4. 백신평가를 위한 구제역바이러스 공격용 실험동물 제작 및 평가 ... 16
• 5. 작성된 3가 시제백신를 제작하여 마우스 및 돼지에서 면역 및 공격 시험 ... 16
• Ⅴ. 금후 추진계획 ... 16
• Ⅵ. 연구결과 활용실적 ... 16
• 끝페이지 ... 17