초록 ▼

4. 당해연도 중간결과 요약
1. 주변국 발생바이러스에 대한 백신매칭 경향분석
ㅇ O형 : SEA지역형, ME-SA지역형이 주로 발생하고 있으며, 홍콩에서 Cathay형이 발생함.
- 2013-2015년 SEA지역형, ME-SA지역형 발생바이러스에 O 3039, O Tur05/09, O Taw98은 백신주는 55.6~70%의 매칭를을 보이고 있으나, Cathay지역형 발생의 경우 같은 Cathay형 백신이라해도 매칭되지 않는 경우가 확인됨
ㅇ A형 : ASIA지역형이 우리나라 주변지역에서 발생
- 2014

4. 당해연도 중간결과 요약
1. 주변국 발생바이러스에 대한 백신매칭 경향분석
ㅇ O형 : SEA지역형, ME-SA지역형이 주로 발생하고 있으며, 홍콩에서 Cathay형이 발생함.
- 2013-2015년 SEA지역형, ME-SA지역형 발생바이러스에 O 3039, O Tur05/09, O Taw98은 백신주는 55.6~70%의 매칭를을 보이고 있으나, Cathay지역형 발생의 경우 같은 Cathay형 백신이라해도 매칭되지 않는 경우가 확인됨
ㅇ A형 : ASIA지역형이 우리나라 주변지역에서 발생
- 2014-2015년 발생 ASIA지역형 바이러스에서 A22 (50%) 및 A Iran05 (30%)의 매칭을 보이고 있음
ㅇ Asial 형 :주변지역에 Asial 혈청형의 발생은 없으나, 중동 등에서 발생되고 있음
- 2013-2014년 파키스탄, 이란, 터키에서 발생된 7개 바이러스에 매칭되는 백신주는 없음
2. 주변국, 국내발생 바이러스 및 상용 백신주에 대한 항원단백질 서열비교 분석
ㅇ O형 : 최근 국내 발생바이러스 SEA형에서는 구조단백질에서 높은 상동성을 보임
- 국내 발생주와 상용백신주의 아미노산 매칭률은 ME-SA와는 90%, Cathay와는 84-89%, EURO-SA와는 85-89%, SEA 최근 발생주와는 97-99%의 상동성을 보임
- O형 바이러스의 지역형 비교분석에서 VP1에서 3개 부위의 variable region으로 보이는 특이한 서열변이가 관찰되었으며, 지역형별로 RGD서열 주변의 변이가 심했으며, Th epitope 부위에서의 변이도 관찰되었음.
- SEA 지역형의 경우 VP1에서 다른 지역형과는 차별되는 특이아미노산 서열이 8곳이 관찰되었고, VP2의 경우 4곳, VP3의 경우 3곳이 관찰되었음
ㅇ A형
- 같은 지역형 안에서도 VP1 내부의 세포와 결합부인 RGD서열 주변의 변이가 심했고 O형보다 변이범위가 좀 더 확장된 변이가 관찰되었으며, 방어에 영향을 줄수 있는 Th epitope의 변이도 관찰되었음
- VP2에서도 3 fold axis 근처에서 변이가 심하게 관찰되었음
- A Pocheon주는 유전형이 G1 type으로 A May97 백신이 적합 (rl=0.44)할 것으로 예상되나, 최근 중국에서는 유전 그룹이 약간 다른 G2 type이 발생되었음
- A22의 경우 돼지에서 교차면역능이 강한 것으로 분석되어 다른 바이러스와 교차방어에 유리할 것으로 예상됨
ㅇ Asia 1형
- 발생주간에 A형과 유사한 형태로 VP1의 서열의 RGD서열 주변에서 좀 더 확장된 변이가 관찰되었으며, Th epitope의 변이도 있었음
- VP1 에서 6곳의 variable region이 관찰됨. 다른 부위의 변이는 미미하였음
3. 백신후보주의 확보 및 증식성 평가
ㅇ 백신후보주로 O-PanAsia-2 R (PA-2), A22 R, Asia MOG R의 증식성 시험에서 백신생산 세포주인 BHK21 에서 O Manisa보다 비교적 낮은 증식성을 보였으나,
ㅇ One-step growth curve 분석에서 이들 바이러스는 약 10^6.5/0.1ml 안팎의 증식성을 보인 바 있기 때문에 적절한 증식세포에서의 적응과정이 필요할 것으로 생각됨.
ㅇ 항원의 대량 배양의 전단계로 개발중인 부유세포 배양에서 확보된 후보바이러스의 증식성을 예비 평가한 결과 대부분 증식되는 양상을 보여주었고 적절한 배양조건과 해당세포에 바이러스가 적합하도록하는 적응 단계가 필요할 것으로 판단됨.
ㅇ 바이러스의 불활화는 불활화제 처리후 3시간이내 후보 바이러스는 모두 불활화 되었음.
4. 백신후보주의 목적동물에서의 면역성 평가
ㅇ O-PA2-R, A22 R, Asia MOG R의 돼지에서의 면역성 평가 결과 A22의 경우 가장 높은 항체가를 형성하였으며, 공격후 모두 방어 (공격접종 부위 병변 형성 제외)되는 결과를 얻었음.
ㅇ 바이러스 배출도 현저히 낮아졌으며, 공격후 체온 변화도 거의 형성되지 않았음
ㅇ NSP항체는 공격후 6일 이후에 상승하는 양상을 보였지만 양성으로 전환되지는 않았음
5. 백신 후보주의 표준항체와의 교차반응성
ㅇ 혈청형간 표준항체와의 교차반응성은 거의 보이지 않았으며, O Manisa와 O-PA2와의 반응성 (돼지혈청)은 rl 값은 약 0.17~0.5로 추정되었음
ㅇ 공격접종된 돼지항체와의 교차반응성은 OPA2형의 경우 A22와 Asial형과의 일부 교차반응성이 확인되었음.
6. 유산양에서의 백신접종후 면역반응
ㅇ 3종 항원으로 제작된 백신 접종후 면역반응성은 Asial 형이 가장 높은 중화항체를 유도하였으며, 그다음은 A22이고, O-PA2는 비교적 낮은 항체가를 보였음
ㅇ 3가 백신(ED+AL adjuvant) 후 3주후 가장 높은 항체 형성능을 보였으며, 이후 항체가는 감소되는 경향을 보였음
7. 추가적인 백신후보주 제작
ㅇ O Thiban60-R, A May97-R, AIran05, O TAW97-R에 대한 바이러스를 제작함
ㅇ 항원의 정제 및 백신항원의 생산과 면역혈청생산을 위해 백신제작
8. 항 혈청 생산
ㅇ 소 (O Thiban60-R, A 22R, AsMOG-R, O-PA2-R) 에서 항혈청을 생산함
ㅇ 기니픽 (O Thiban60-R, A Iran05)에서 항혈청을 생산함
ㅇ 교차 중화시험 중
9. 구제역 백신주의 선발
ㅇ O/TAI/Ban60-R, O Pak/44/2008-R, A22-R, Asial MOG-R가 백신주로서 백신 매칭를 및 바이러스의 증식성, 면역원성 등을 고려하여 가능성이 있기 때문에 선발 추가 실험


(출처 : 4. 당해연도 중간결과 요약 1p)

목차 Contents

• 표지 ... 1
• I. 연구배경 및 목표 ... 3
• 1. 연구배경 ... 3
• 2. 연구최종목표 ... 4
• 3. 연차별 연구개발 목표 및 내용 ... 4
• II. 연구방법 및 수행전략 ... 4
• 1. 재 료 ... 4
• 2. 연구전략 및 방법 ... 4
• III. 연구결과 ... 5
• 1. 주변국 발생 바이러스의 백신과의 면역학적 상관성 분석 ... 5
• 2. 주변지역바이러스를 방어하는 구제역백신 후보로서 백신후보주의 유전자 분석 ... 6
• 3. 백신후보주의 증식성 평가 ... 15
• 4. 백신후보주의 면역원성 평가 ... 17
• 5. O, A, Asia1형의 종독 후보주 요약 ... 20
• IV. 연구결과요약 ... 21
• 1. 주변국 발생바이러스에 대한 백신매칭 경향분석 ... 21
• 2. 주변국, 국내발생 바이러스 및 상용 백신주에 대한 항원단백질 서열비교 분석 ... 21
• 3. 백신후보주의 중식성 평가 ... 22
• 4. 백신후보주의 목적동물에서의 면역성 평가 ... 22
• 5. 백신 후보주의 표준항체와의 교차반응성 ... 23
• 6. 유산양에서의 백신접종후 면역반응 ... 23
• 7. 추가적인 백신주 제작 ... 23
• 8. 항 혈청 생산 ... 23
• 9. 구제역 백신주의 선발 ... 23
• V. 금후 추진계획 ... 23
• VI. 연구결과 활용실적 및 계획 ... 24
• VII. 연구사업 추진상 문제점 및 건의사항 ... 24
• VIII. 주요연구 변경사항 ... 24
• IX. 참고자료 ... 25
• 끝페이지 ... 25