초록 ▼

□ 연구개요
• 삼일열말라리아(Plasmodium vivax) 젖산탈수소효소(Lactate dehydrogenase, LDH)에 대한 단클론 항체 개발 및 항체절편(Fab, ScFv) library를 구축하고, 파아지 디스플레이(Phage display) 기술을 이용하여 85%의 진단률을 보이는 삼일열말라리아 진단률을 95% 이상 높일 수 있는 진단용 항체를 개발하고자 함
• 대장균에 기생하는 바이러스의 일종인 박테리오 파아지 (Bacterio phage)에 유전자재조합 기술을 이용해 다양한 이종단백질을 바이러스 표면에

□ 연구개요
• 삼일열말라리아(Plasmodium vivax) 젖산탈수소효소(Lactate dehydrogenase, LDH)에 대한 단클론 항체 개발 및 항체절편(Fab, ScFv) library를 구축하고, 파아지 디스플레이(Phage display) 기술을 이용하여 85%의 진단률을 보이는 삼일열말라리아 진단률을 95% 이상 높일 수 있는 진단용 항체를 개발하고자 함
• 대장균에 기생하는 바이러스의 일종인 박테리오 파아지 (Bacterio phage)에 유전자재조합 기술을 이용해 다양한 이종단백질을 바이러스 표면에 발현시키는 기술로 생체내에 존재하는 수천만 가자지의 다양한 항체 유전자 (Single chain fragment variable, ScFv) 파아지 표면에 융합 단백질 형태로 발현시켜 항체 라이브러리 제작 가능하여 항체 라이브러리로부터 삼일열말라리아 LDH 항원과 결합하는 다양한 단클론 항체의 선별이 가능하여 기존의 방법으로 만들 수 없었던 다양한 인간화 단클론 항체의 제작이 가능하므로 추후 항체 치료에도 활용이 가능할 것으로 기대됨

□ 연구 목표대비 연구결과
• 재조합 항체 기술 및 파아지 디스플레이 기술을 이용하면 삼일열말라리아 LDH에 대한 다양한 항원 결합 부위를 갖는 항체의 스크리닝이 대량으로 가능하고 현재 사용되는 말라리아 진단 항체를 대체할 수 있는 고민감도 항체의 발굴하고자 하였음
• 파아지 디스플레이 기술을 이용하여 42개의 항체 후보를 발굴하였으나 항체의 염기서열을 분석결과 9개의 항체 후보만이 서로 다른 염기서열을 가지고 있었고, 이 중 6종의 항체만 발현 정제가 완료되었음. 정제된 항체 중 PvLDH 재조합 단백질에 반응하는 항체는 총 5종으로 선별되었으나 삼일열말라리아 환자 혈청과 반응하는 항체는 최종 3종이 선별되었음.
• 선정된 3종의 항체 및 1차년도에 선별한 단클론 항체를 HRP 및 Biotin conjugation하여 항체 pairing을 시도하였지만 의미있는 결과를 얻지 못함
• 선별된 항체들이 모두 같은 항원 인식부위에 결합하는 것으로 예측됨에 따라 삼일열말라리아 capture 또는 detection용으로 사용이 가능할 것으로 생각됨

□ 연구개발결과의 중요성
• pLDH(4종 말라리아 검출), HRP2(열대열말라리아 검출)의 두 항원에 대한 단클론 항체를 이용한 RDT (Rapid Diagnostic Test: 신속진단키트) 진단법으로 현장에서 신속하게 말라리아 환자의 검출이 가능하나 우리나라에서 유행하는 삼일열말라리아에 대한 진단 민감도는 85% 정도의 수준으로 다소 낮아 이를 보완할 대체 항체의 개발이 필요한 실정임
• 재조합 항체 기술 및 파아지 디스플레이 기술을 이용하면 삼일열말라리아 LDH에 대한 다양한 항원 결합 부위를 갖는 항체의 스크리닝이 대량으로 가능하고 현재 사용되는 말라리아 진단 항체를 대체할 수 있는 고민감도 항체의 발굴이 가능할 것으로 기대됨
• 본 연구를 통해 확보한 삼열열말라리아 LDH 특이 항체를 이용해 삼일열말라리아의 낮은 진단 민감도를 극복하여 삼일열말라리아 환자의 조기 발견 및 모니터링에 활용할 수 있을 것으로 생각되며, 발굴된 진단용 항체 후보들을 이용한 고민감도의 진단 시스템 개발의 기초 지식이 마련될 것으로 생각됨

(출처 : 연구결과 요약문 3p)

목차 Contents

• 표지 ... 1
• 연구결과 요약문 ... 3
• 목차 ... 4
• 1. 연구개발과제의 개요 ... 5
• 가. 연구개발의 필요성 ... 5
• (1) 현재 사용되는 말라리아 진단법의 한계 ... 5
• (2) 삼일열말라리아 진단의 한계 ... 5
• (3) 말라리아의 신속진단테스트 (Rapid Diagnostic Test, RDT) ... 5
• 나. 연구가설 및 최종목표 ... 5
• (1) 연구가설 ... 5
• (2) 연구의 최종 목표 ... 6
• 다. 연구범위 ... 6
• 2. 연구수행내용 및 연구결과 ... 6
• 가. 1차년도 연구개발 내용 및 결과 ... 6
• (1) 1차년도 연구개발 내용 ... 6
• (2) 1차년도 연구 결과 ... 6
• 나. 2차년도 연구개발 내용 및 결과 ... 7
• (1) 2차년도 연구개발 내용 ... 7
• (2) 2차년도 연구 결과 ... 7
• 다. 3차년도 연구개발 내용 및 결과 ... 8
• (1) 3차년도 연구개발 내용 ... 8
• (2) 3차년도 연구 결과 ... 8
• 3. 연구개발결과의 중요성 ... 9
• 4. 참고문헌 ... 10
• 5. 연구성과 ... 11
• [별첨]. 연구에 사용한 primer list ... 12
• 끝페이지 ... 13