초록 ▼

□ 연구개요
현재 바이러스감염증의 백신개발연구는 NNV배양액을 포르말린으로 처리한 불활화백신을 중심으로 진행되어 왔지만, 감염예방의 효과가 기대한 수준에 못 미쳐 긍정적인 결과는 도출되지 않았다. 이후 NNV제어에 대한 연구물로 신청자는 인터페론 유도물질을 투여하거나 혹은 사육온도를 조절함으로써, 바이러스 증식속도를 제어하여 간접적으로 바이러스의 병독성을 억제시킨 병독 바이러스를 이용한 어류면역법을 개발하여 NNV면역어는 NNV재감염에 대해 강한 방어능이 관찰되어 병독 NNV면역어를 효율적으로 생산해내는 기술이 개발되었다. 기

□ 연구개요
현재 바이러스감염증의 백신개발연구는 NNV배양액을 포르말린으로 처리한 불활화백신을 중심으로 진행되어 왔지만, 감염예방의 효과가 기대한 수준에 못 미쳐 긍정적인 결과는 도출되지 않았다. 이후 NNV제어에 대한 연구물로 신청자는 인터페론 유도물질을 투여하거나 혹은 사육온도를 조절함으로써, 바이러스 증식속도를 제어하여 간접적으로 바이러스의 병독성을 억제시킨 병독 바이러스를 이용한 어류면역법을 개발하여 NNV면역어는 NNV재감염에 대해 강한 방어능이 관찰되어 병독 NNV면역어를 효율적으로 생산해내는 기술이 개발되었다. 기존의 백신으로 면역한 어체내에서 NNV에 대한 중화항체가 관찰되지만, 신청자가 행한 예비실험에서 병독NNV로 면역된 어류는 NNV재감염에 대해 매우 강한 방어능을 획득함에도 불구하고 어체내 NNV 중화항체가 거의 검출되지 않았다. 또한 신청자의 NNV입자 항원구조에 대한 이전 연구결과, NNV감염에 관여하는 에피토프와 중화항체를 유도하는 에피토프가 NNV입자표면의 돌기구조에 독립적으로 존재함을 밝혔다. 아마 기존의 NNV백신으로 면역한 어체내에서 NNV 중화항체를 유도하는 에피토프(중화항체)는 관찰되지만 NNV감염에 관여하는 에피토프(감염가)가 소실되었기 때문에 기존 NNV백신의 감염예방효과가 제한적인 것으로 추측한다. 따라서 본 연구에서는 위의 가설을 바탕으로 중화항체를 유도하는 에피토프와 감염 에피토프가 존재하는 NNV입자의 화학처리를 통해 중화항체를 유도하는 에피토프를 억제시키고, 감염에피토프만이 관찰되는 NNV항원(부분변성 NNV입자)의 조정법을 확립한다면 NNV 제어에 매우 효과적인 대안을 마련할 수 있을 것이라 판단하였다.

□ 연구 목표대비 연구결과
NNV 중화항체 결합부위와 수용체 결합부위의 입체구조의 안정성 관계에 대해 검토하였다.NNV의 항원성은 PBS(37℃)처리 후 1일째에 66% ~ 79% 감소하였다. 한편, NNV 감염가는 동일조건에서 처리 후 10일째 10^7.6에서 10^5.8TCID₅₀/ml로 서서히 감소하였다. NNV의 항원성은 2M의 요소처리 후 75% ~ 84%감소되었지만, 감염가의 감소는 관찰되지 않았다. NNV를 탄산완충액으로 처리하면 NNV항원성과 감염성 모두 감소하였다. NNV감염가의 유지는 바이러스의 수용체 결합부위가 유지되었음을 의미한다. 따라서, NNV 중화항체 결합부위와 수용체 결합 부위는 NNV 표면돌기에 독립적으로 배치되어있는 것으로 나타났다.
이하에 실험을 통해 얻은 결론을 나타낸다.
1) 정제한 NNV입자를 3×10⁵MWCO의 한외여과막을 통과시킴으로써 단량체 입자를 생산하였다.
2) 샌드위치 ELISA는 정량성, 재현성 및 정량적 검출범위의 점에서 항원 고정화 ELISA보다 우수하다고 생각된다.
3) NNV항원성과 감염성은 37℃의 PBS와 25℃의 2M요소, 탄산완충액 등의 생화학적 처리에 대해 다른 변화를 보여 주었다.
4) 중화항체 결합부위와 수용체 결합부위는 아마 NNV 표면돌기에 독립적으로 배치되어있다.
5) NNV 중화항체 결합부위는 수용체 결합 부분보다 불안정하다.
6) NNV을 2M 요소용액으로 처리함으로써 숙주세포의 수용체 결합부위를 유지하면서 다른 NNV 중화항체 유도항원을 변성하는 것이 가능하다. 본 연구를 통해 처리된 NNV입자를 항원으로 사용하면 NNV 백신효과의 개선을 기대한다.

□ 연구개발결과의 중요성
기존 NNV백신은 “중화항체 유도항원=감염방어항원”을 전제로 개발되었기 때문에, NNV 중화항체의 유도에 초점이 맞춰져왔다. 그러나 1) NNV입자의 항원 구조분석, 2) 병독 NNV 감염어류가 인식하는 NNV 항원의 분석, 3) NNV감염기전이 해명되어 효과적인 백신의 개발이 가능하게 된다. 본 연구는 백신 개발의 기본항목을 재검토하여 백신의 효과향상에 필수적인 기초연구이다. 본 연구에서 만들어내는 NNV 감염 에피토프를 노출하는 부분변성 NNV입자를 면역용 항원으로 이용하면, 불활화 백신의 예방효과가 크게 개선될 것이다.

(출처 : 연구결과 요약문 2p)

목차 Contents

• 표지 ... 1
• 연구결과 요약문 ... 2
• 목차 ... 3
• 1. 연구개발과제의 개요 ... 3
• 2. 연구수행내용 및 연구결과 ... 4
• 1) 고순도로 정제된 단량체 NNV입자의 조정법 확립 ... 4
• 2) NNV입자표면 구조의 미세변화의 정량적 검출법 확립 ... 4
• 3) 저온처리에 의한 NNV의 항원성 및 감염가의 변화 ... 4
• 4) 요소처리에 의한 NNV의 항원성 및 감염성의 변화 ... 5
• 5) 다양한 pH처리에 의한 NNV의 항원성 및 감염성의 변화 ... 5
• 6) 다양한 처리에 따른 NNV의 항원성 및 감염성의 변화양상 비교 ... 5
• 7) 결론 ... 5
• 8) 실험방법 ... 6
• 3. 연구개발결과의 중요성 ... 6
• 4. 참고문헌 ... 13
• 5. 연구성과 ... 14
• 끝페이지 ... 14