초록 ▼

융합능을 가진 세포를 제작하기 위하여 바이러스에서 유래한 융합단백질인 HN과 F를 발현하는 벡터를 제작하였고, 근육유래 융합유도인자 Myomaker와 Myomerger를 발현하는 벡터를 제작하여 확보하였음. HN/F 벡터와 Myomaker/Myomerger 벡터의 도입을 통해 세포간 융합이 이루어지는 것을 Flow cytometry와 Image분석을 통해 확인하였고, Myomaker/Myomerger의 발현세포는 융합능을 가진 근육세포와의 융합도 이루어짐을 확인함. 새로운 융합인자의 발굴을 위하여 Myoblast의 분화과정을 확립하

융합능을 가진 세포를 제작하기 위하여 바이러스에서 유래한 융합단백질인 HN과 F를 발현하는 벡터를 제작하였고, 근육유래 융합유도인자 Myomaker와 Myomerger를 발현하는 벡터를 제작하여 확보하였음. HN/F 벡터와 Myomaker/Myomerger 벡터의 도입을 통해 세포간 융합이 이루어지는 것을 Flow cytometry와 Image분석을 통해 확인하였고, Myomaker/Myomerger의 발현세포는 융합능을 가진 근육세포와의 융합도 이루어짐을 확인함. 새로운 융합인자의 발굴을 위하여 Myoblast의 분화과정을 확립하고 관련 융합인자들의 증가를 qPCR과 웨스턴블롯으로 확인하였음. Tandem mass tag-6plex 방법을 이용한 단백체분석을 통하여 4292개의 단백질을 ID하였고, 융합과정에서 2배 이상 증가하는 단백질 432개가 발굴되었음. 세포의 Membrane에 integration되어 있는 단백질을 서열분석 알고리즘을 통해 분석하였을 때 총 98개의 membrane helix구조를 가지는 단백질을 다시 선별할 수 있었음. 구조분석을 통해 바이러스의 HN단백질과 유사성을 가지는 Sialidase가 단백체분석상에서 나온 점에 착안하여 Sialidase-3의 벡터를 제작하였고 세포막에 존재하며 과발현시 세포간 융합을 유도하는 사람유래 단백질임을 확인하고 기존 근육융합단백질인 Myomaker와의 상호작용을 3차원 구조분석으로 예측하였음. 융합능세포의 대량생산을 위하여 iPSC로부터 중간엽줄기세포의 분화방법을 확립하고 세포 characterization 방법을 작성하였음. 융합능의 효과적인 QC를 위해서는 고순도의 형광세포의 제작, 세포융합유도를 위한 세포의 밀도 및 융합인자의 농도, 융합률의 분석을 위한 flow cytometry 및 image 분석 시스템을 확립함.
- 근이영양증 의심환자의 병력, 임상 증상, 영상소견, 혈액검사, 병리소견 등을 유기적으로 확인할 수 있는 근이영양증 임상데이터베이스를 확립하였으며, 조직바이오뱅크를 구축하였음.
- 본 과제를 통해 마련한 설비 및 데이터베이스 확립 노하우는 향후 후속 과제에도지속적으로 활용될 수 있음.
- 이를 바탕으로 근이영양증 환자의 임상증상-조직소견-유전형간 상관 관계를 분석하여 환자의 조기 진단을 이룰 수 있으며, 추후 치료제 규명을 위한 연구의 초석을 마련하였음.
DMD질환 기전연구를 위해 mouse myoblast cell인 C2C12 cell에서 RNAi를 이용하여 dystrophin을 감소시킨 후 DMD질환 세포모델을 확립. DMD질환에서 fibrosis를 관여하는 CTGF의 발현이 증가함을 확인. DMD질환에서 muscle tissue의 fibrosis를 유도하는 CTGF증가원인에 miR-18b가 직접적으로 관여함을 발견 이를 DMD질환 마우스 모델(mdx)의 muscle tissue에서도 확인함.
HN/F-hATMSC를 mdx 마우스에 주입 후 Dystrophin의 발현 및 치료효능을 muscle tissue염색을 통해 Dystrophin의 발현을 확인. HN/F-hATMSC의 치료 기전연구를 위해 DMD질환 세포 모델과 HN/F-hATMSC의 세포융합을 실시 후 miR-18b의 변화를 확인하고 miR-18b에 의해 조절되는 CTGF의 변화 또한 확인. 새로운 human fusion protein (HN &F, and Neu3)의 세포융합능을 hATMSCs or ES-MSCs를 이용하여 확인. fMSCs(HN & F, and Neu3)를 mdx mice의 TA muscle에 주입 후 dystrophin의 발현, muscle damage (Evans blue test)의 완화, fMSCs(HN & F, and Neu3)의 생창능을 확인.

(출처 : 요약서 3p)

목차 Contents

• 표지 ... 1
• 보고서요약 ... 2
• 제 출 문 ... 14
• 보고서 요약서 ... 15
• 국문 요약문 ... 16
• 목차 ... 17
• 1. 연구개발과제의 개요 ... 19
• 1-1. 연구개발 목적 ... 19
• 1-2. 연구개발의 필요성 ... 19
• 1-3. 연구개발 범위 ... 19
• 2. 국내외 기술개발 현황 ... 19
• 3. 연구수행 내용 및 결과 ... 25
• 4. 목표달성도 및 관련분야 기여도 ... 71
• 4-1. 목표달성도 ... 71
• 4-2. 관련분야 기여도 ... 75
• 5. 연구결과의 활용계획 ... 79
• 6. 연구과정에서 수집한 해외과학기술정보 ... 80
• 7. 연구개발성과의 보안등급 ... 80
• 8. 연구개발과제 수행에 따른 연구실 등의 안전조치 이행실적 ... 81
• 9. 연구개발과제의 대표적 연구실적 ... 81
• 10. 기타사항 ... 81
• 11. 참고문헌 ... 82
• 끝페이지 ... 84